紫外线减毒日本血吸虫尾蚴和童虫免疫小鼠的抵抗力研究

本文报告用２５条、５０条、１５０条和３００条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴钻皮免疫或减毒童虫皮下注射免疫均能诱导小鼠产生有效的抗攻击感染抵抗力。以２５条免疫量为例，尾蚴钻皮及童虫皮下注射后的减成虫率分别为７２．１％和７０．４％，肝脏减卵率分别为６９．４％和５７．４％，小肠组织减卵率分别为７６．６％和８０．５％，免疫后的有效保护期为７．５个月。     

旋毛虫肌蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用４种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴３０条或１００条攻击感染，攻击后４５ｄ剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：４种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（ＴｓＳＡ）效果较好，减虫率为２１．３％，加用福氏佐剂时，其减虫率为２９．３％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达４８％和５８．５％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵ＥＰＧ减少率分别为４１．７％和４８．９％；当抗原剂量为１００００条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达３９．６％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应     

血吸虫合成多肽抗原保护性免疫效果及小鼠外周血细胞的变化(英文)

根据公认的血吸虫保护性抗原候选分子Ｓｍ２８ 的氨基酸序列人工合成４ 个不同血吸虫多肽片段,对小鼠进行免疫保护实验。采用２００ μｇ／只,皮下注射共免疫３ 次,每次间隔１ 周,末次免疫后２ 周以（４０ ±２） 条日本血吸虫正常尾蚴攻击感染。另设不免疫攻击感染日本血吸虫的小鼠为对照组。实验组小鼠分别获得２４．３ ％ ～４７ ．９ ％ 的减虫率和３５．１ ％ ～５０ ．４ ％ 的减卵率。各组小鼠免疫前和免疫后尾部取血涂片染色,观察比较外周血白细胞及Ｔ 细胞、Ｂ细胞的变化,结果免疫后较免疫前嗜酸性白细胞和Ｔ细胞升高。实验提示,血吸虫多肽抗原有一定免疫效果,值得进一步研究。     

UV致弱尾蚴免疫对小鼠血吸虫再感染的保护力观察

目的观察致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠再次感染血吸虫后的减虫率、减卵率及肝脏病理损伤,为血吸虫疫苗的研制奠定基础。方法分别以400μw／cm^2×60s和422μw／cm^2×40s两种不同UV强度及时间照射的日本血吸虫尾蚴免疫C57BL／6和DBA小鼠,观察免疫小鼠对再次血吸虫感染的减虫率、肝脏减卵率及肝脏病理改变。结果400μw／cm^2×60s（A）和422μw／cm^2UV×40s（B）照射的日本血吸虫尾蚴免疫组C57BL／6小鼠再次感染血吸虫后的减虫率分别为一0．60％和0．02％,肝脏肝脏减卵率分别为2．70％和11．37％;DBA小鼠再次感染血吸虫后的减虫率分别为29．10％和25．70％,肝脏肝脏减卵率分别为59．50％和69．50％。422μw／cm^2UV×40S辐照尾蚴免疫C57BL／6小鼠,再次感染血吸虫形成的肝脏单个虫卵肉芽肿面积与对照组比较显著减小（P〈0．01）;400μw／cm^2UV×60s和422μw／cm^2UV×40S辐照尾蚴免疫DBA小鼠再次感染血吸虫造成的肝脏单个虫卵肉芽肿面积与对照组比较显著减小（P〈0．01）。结论UV致弱尾蚴免疫对C57BL／6、DBA小鼠再次感染血吸虫的保护作用较小,但能降低肝脏卵荷并减轻肝脏的病理损伤。     

日本血吸虫多价分子疫苗的保护性免疫力研究

本实验将从日本血吸虫成虫分离纯化出的２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白混合组成多价分子疫苗免疫小鼠,再行攻击感染,观察其保护性免疫力。结果：疫苗加佐剂组成虫减虫率,肝组织减卵率及肠壁组织减卵率分别为５０．３％、７２．０％和８１．５％,均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）。     

未成熟日本血吸虫虫卵抗原对宿主肝内肉芽肿病变影响的研究

用４ｗｋ－ＳＥＡ、５ｗｋ－ＳＥＡ和６ｗｋ－ＳＥＡ加福氏佐剂，背部皮下注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，攻击感染后短期动态观察结果显示，４ｗｋ－ＳＥＡ免疫小鼠攻击感染后４～６ｗｋ时，小鼠肝组织内的减卵率（４０．７４％～５２．５９％）显著高于感染组和佐剂对照组（Ｐ＜０．０１），且在攻击感染后６ｗｋ时，免疫鼠肝组织内未见成熟虫卵，同期肝组织内肉芽肿平均直径（８１．５４±２０．７０μｍ～１１５．２８±２０．５２μｍ）明显小于对照鼠者（１５２．２２±６０．６９μｍ～３４９．１１±４８．４０μｍ），而用５ｗｋ－ＳＥＡ和６ｗｋ－ＳＥＡ免疫小鼠均未获得类似４ｗｋ－ＳＥＡ的免疫效应。研究结果表明，未成熟虫卵可溶性抗原能诱导出显著的抗病免疫力（明显的减卵率和成熟卵减少率及感染鼠肝内肉芽肿的显著缩小），具有理论意义和应用前景     

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,攻击感染后６Ｗ计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数结果 用构建的ｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠成虫发育,肝组织减卵率为５９．３￣６５．０％,肠组织减卵率为５７．６￣６２．１％,粪便减卵率为８６．５％。结论Ｓｊ３１ＢＩＮ可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。     

日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究

目的 观察日本血吸虫（中国大陆株）的线粒体相关蛋白rSj338及膜蛋白rSj22.6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性，为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗rSj338抗体和抗rSj22.6的抗体筛选噬菌体随机12肽库，将获得的rSj338的有效抗原表位与rSj22.6有效抗表位混合后免疫BALB／c小鼠，并与rSj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 rSj338的4种表位和rSj22.6抗原的4种表位混合免疫组小鼠获得了45．4％（P＜0．01）的减虫率及59．1％（P＜0．01）肝总减卵率，rSj338的4种表位混合免疫组小鼠获得了34．2％（P＜0．01）的减虫率及46．8％（P＜0．01）肝总减卵率；rSj338 4种表位和rSj22.6的4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于rSj338的4种表位混合免疫组，差异有显著性（P＜0．05）。结论 两种抗原分子的有效抗原表位联合免疫的效果优于单个抗原分子的有效抗原表位。     

日本血吸虫重组抗原rSj14-3-3免疫保护作用的初步研究

目的初步探讨重组信号蛋白14-3-3及14-3-3与GST融合蛋白抗日本血吸虫尾蚴感染和抗血吸虫病的免疫保护作用。方法用rSj14-3-3和rSj14-3-3／SjGST免疫BALB／c小鼠，日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤攻击感染，收集实验组与对照组成虫和虫卵，计算减虫率和减卵率；间接ELISA法测定实验组与对照组小鼠免疫前、后血清中特异性IgG抗体水平的变化；显微镜下测量并比较实验组与对照组肝脏切片上单个虫卵肉芽肿大小，观察两种重组抗原对小鼠肝脏肉芽肿形成的影响。结果上述两种重组抗原在尾蚴攻击感染后的减虫率分别为31．93％和34．39％；每克肝组织减卵率分别为53．24％和60．06％，每对成虫减卵率分别为33．39％和40．48％；免疫前各组血清IgG抗体A值差异无显著性，免疫后实验组血清IgG抗体A值明显高于对照组；实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿平均直径比对照组分别下降35．23％和46．13％。结论信号蛋白14-3-3在抗感染和抗病免疫中具有保护作用，复合多价疫苗的免疫保护作用可能优于单价疫苗。     

日本血吸虫未成熟卵抗原和成虫抗原分别与联合免疫小鼠的 …

目的 探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）和成虫抗原（ＳＡ）分别与联系免疫小鼠的抗卵胚胎发育效果和抗感染效果。方法 采用ＳＩＥＡ与ＳＡ分别与联合免疫小鼠，于攻击感染后４８天剖杀，统计雌雄虫数及肝脏各期虫卵数。结果 与对照组比较，ＳＩＥＡ单独免疫产生显著抗卵胚胎发育的免疫力，肝组织成熟卵数下降３７．３％，成熟卵比例下降２４．０％；ＳＡ单独免疫产生显著抗感染免疫力，减虫率为３４．５％；ＳＩＥＡ     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白诱导小鼠保护力的研究

目的 用重组日本血吸虫副肌球蛋白（rSj97)免疫小鼠,观察保护效果。方法 小鼠随机分为3组,免疫组在0、2、15周,皮下注射rSj97加佐剂Quil,同一时间佐剂对照组和空白对照组注射等量QuilA和缓冲液A,第3次免疫后,每鼠经腹部贴片攻击感染50条尾蚴,感染后45d剖杀小鼠,观察其减虫和减卵效果。结果 与缓冲液和QuilA对照组相比,rSj97 QuilA免疫组的减虫率分别为44．1％（P＜0．01）和17．8％（P＜0．05）,每克肝组织虫卵数（LEPG）减少率分别为76．5％（P＜0．01）和16．9％（P＜0．05）,每雌肝组织虫卵数（LEPF）减少率分别为62．2％（P＜0．01）和6．1％（P＜0．05）。结论 rSj97加佐剂QuilA可诱导小鼠产生明显的抗血吸虫攻击感染的保护性免疫力及抗生殖免疫力。     

紫外线减毒尾蚴活疫苗预防小鼠日本血吸虫感染的实验研究

本实验结果显示300—500μW·min/cm~2剂量的紫外线照射减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠可使之产生抗血吸虫感染的能力,所得减虫率分别为48.70％、68.97％、60.00％。100和700μW·min/cm~2的照射剂量所获减虫率明显低于上述水平,分别为10.62％和20.17％。免疫次数与免疫力之间并不相关,免疫一次、两次和三次所得的减虫率分别为68.97％、69.46％和71.16％,无显著性差异。免疫有效期研究表明,小鼠所获的抵抗力至少可达5个月。一个月、三个月和五个月所获减虫率分别为71.28％,69.63％和60.26％,七个月所获减虫率为46.25％,虽与它们有显著性差异,但仍有明显的保护效果。     

重组副肌球蛋白联合ISA206佐剂诱导抗日本血吸虫保护力

目的探讨重组的全长日本血吸虫副肌球蛋白（rSj97）的免疫保护作用以及作为疫苗的适用佐剂组合。方法重组副肌球蛋白分别与弗氏佐剂（rSj97-FA）、ISA206（rSj97-ISA206）、CpGODN（rSj97-CpGODN—IFA）联合免疫C57BL／6小鼠,在0、2、4周共进行3次免疫注射,剂量为每只每次25μg rSj97。第3次免疫后2周,经腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴（40±2）条。第12周剖杀冲虫,计算减虫率与减卵率。同时,在0、2、6、8、12周对各组小鼠采血,检测血清中特异性IgG1与IgG2a抗体。结果相对于未免疫组,rSj97-FA组的减虫率为27．6％、减卵率为-2．3％,rSj97-ISA206组的减虫率为45．3％（P〈0．01）、减卵率为35．4％（P〈0．05）,rSj97-CpGODN—IFA组的减虫率为7．3％、减卵率为6．4％,对照组（仅注射CpGODN）减虫率为13％、减卵率为3％。rSj97-FA、rSj97-ISA206与rsj97-CpGODN—IFA组在首次免疫后2周,rsj97特异性IgG1与IgG2a水平较免疫前显著升高（P〈0．01）,攻击感染后仍维持在同一水平;对照组与未免疫对照组,其特异性IgG1水平至感染后6周方显著升高（P〈0．01）,但仍为较低水平（A值〈0．1）,而IgG2a一直保持在基线水平,无显著变化。结论重组副肌球蛋白分别与3种佐剂联合使用均能诱导小鼠产生特异性IgG1和IgG2a,但仅ISA206佐剂组诱导C57BL／6小鼠产生显著的抗日本血吸虫保护力,rSj97-ISA206是潜在用于大动物免疫的疫苗组合。     

日本血吸虫及其中间宿主原肌球蛋白免疫小鼠的保护作用

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分离的天然原肌球蛋白（分别称为ＳｊｃＴＭ和ＯｈＴＭ）免疫小鼠后对日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护作用。方法：参照Ｃｏｔｅ和Ｓｍｉｌｉｅ文献改进的方法从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分别提取天然原肌球蛋白（ＴＭ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其纯度和分子量，并以所提纯之ＴＭ抗原加福氏佐剂皮下多点注射免疫Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠，共免疫３次，攻击感染后６ｗｋ解剖小鼠，门脉灌注收集成虫，并分类计数小鼠肝脏和肠组织内的未成熟和成熟虫卵。同时设立佐剂对照组。结果：日本血吸虫大陆株成虫和湖北钉螺ＴＭ分子量相似约４０ｋＤａ。与佐剂对照组相比，日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ免疫组：减虫率分别为２１．１％和２８．２％；平均每对成虫肝脏减卵率分别为２０．１％和５２．２％，肠组织减卵率分别为３２．８％和２８．１％；肝脏成熟虫卵减少率分别为２５．９％和４６．８％，在肠组织的减少率分别为３９．７％和６６．８％。结论：日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ抗原具明显的免疫原性，免疫小鼠后具有抗感染和抗血吸虫病免疫的作用。可作为血吸虫病候选疫苗分子作进一步研究。     

旋毛虫机蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用4种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴30条或100条攻击感染，攻击后45d剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：4种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（TsSA）效果较好，减虫率为21．3％，加用福氏佐剂时，其减虫率为29．3％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达48％和58．5％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵EPG减少率分别为41．7％和48．9％；当抗原剂量为10000条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达39．6％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应。     

UV致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL/6小鼠免疫保护作用的研究

目的 研究紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL／6小鼠的免疫保护作用。方法分别观察不同UV强度（300、400和500μW／cm。照射的日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫剂量（8、24和300条uV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫位点（300条UV致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫）和不同免疫次数（100条UV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫3次）诱导C57BL／6小鼠抗血吸虫攻击感染（40条正常尾蚴经腹部皮肤感染）的保护力。同时观察免疫后小鼠的体液免疫应答变化。结果 300、400和500μW／cm。UV照射的日本血吸虫尾蚴免疫C57BI。／6小鼠诱导产生的减虫率分别为2．72％、11．37％和10．38％；8、24和300条致弱尾蚴免疫小鼠诱导产生的减虫率分别为38．67％、7．54％和16．36oA；300条致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为16．36％和16．14％；100条致弱尾蚴免疫3次，诱导小鼠产生减虫率为4．88％。对300条uV照射尾蚴免疫后小鼠的体液免疫应答动态观察显示，与感染对照组相比，免疫组血清中可溶性成虫抗原（SWA）和可溶性虫卵抗原（SEA）特异的IgG于免疫后2周开始升高，正常尾蚴抗原（SCA）特异的IgG于免疫1周后开始升高，SWA和SCA特异的IgG随免疫次数的增加而升高。结论 UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫C57BL／6小鼠能诱导其产生高水平的体液免疫应答，但保护力水平较低，提示C57BL／6小鼠为对UV致弱日本血吸虫尾蚴的低应答品系。     

日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和表位疫苗联合免疫诱导的保护性免疫研究

目的 探讨日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和日本血吸虫抗原表位疫苗联合免疫对昆明感染鼠的免疫保护作用。方法 将制备的日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和用特异性抗体筛选噬菌体随机12肽库获得的日本血吸虫抗原表位疫苗联合或单独免疫昆明鼠,共3次,分别在0、2、4周进行。每次背部皮下多点注射50μg重组铁蛋白和/或10~(13)pfu表位疫苗,第6周每鼠经腹部感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴。攻击感染后42d剖杀冲虫,计数成虫及肝虫卵数。在免疫前和末次免疫后从小鼠尾静脉采血,分离血清,用间接ELISA法检测抗体反应。结果 联合免疫组与对照组相比,获得了32.8％的减虫率和63.0％的减卵率;单独重组铁蛋白疫苗免疫组的减虫率为21.6％,减卵率为49.5％;单独表位疫苗免疫组减虫率和减卵率分别为17.1％和44.3％,显著低于联合组(P<0.05);联合免疫组小鼠体内IgG的抗体水平明显高于其他各组。结论 日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和表位疫苗联合免疫的效果优于单独应用铁蛋白免疫和表位疫苗免疫。     

不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护 …

应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＳＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果，１００μｇ和２００μｇ ｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。     

日本血吸虫多价分子疫苗的保护性免疫力研究

本实验将从日本血吸虫成虫分离纯化出的２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白混合组成多价分子疫苗免疫小鼠,再行攻击感染,观察其保护性免疫力。结果：疫苗加佐剂组成虫减虫率、肝组织减卵率及肠壁组织减卵率分别为５０．３％、７２．０％和８１．５％,均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）;实验组肝虫卵肉芽肿较对照组炎症反应程度轻,虫卵肉芽肿周长及面积均低于对照组（Ｐ＜０．０１）。结果提示,由日本血吸虫成虫２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白联合组成的多价分子疫苗,具有较高的减虫率、减卵率及抑制虫卵肉芽肿形成的作用,有一定的应用前景