神经生长因子对哮喘豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在哮喘豚鼠内脏感觉传入部位的表达及神经生长因子(NGF)对MMP-2的调节作用。方法应用免疫组织化学方法检测豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2免疫反应的变化。用W estern b lot蛋白印迹方法检测豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果①免疫组织化学结果显示:豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角内MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值(0-深色,255-浅色),生理盐水组(175.50±4.67、166.47±6.20)与单纯致敏组(172.63±9.51、165.20±5.14)比较没有显著差异(P>0.05);哮喘组(139.87±4.88、125.93±4.49)明显低于生理盐水组和单纯致敏组(P<0.01);哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体,169.73±6.24、152.37±8.67)则明显高于哮喘组(P<0.01)。②W estern b lot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中MMP-2和NGF阳性产物的IDV(Integrated Density Value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2的表达。结论C7~T5段脊神经节以及相应节段脊髓背角内的MMP-2可能也参与哮喘的发病过程,NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时MMP-2的表达有可能延缓气道重塑的发生,可能是治疗哮喘的新途径。     

NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位IL-1β表达的影响

为探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制,本研究应用免疫组织化学方法检测各组豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位白介素-1β(IL-1β)免疫反应的变化。用Western blot方法分别检测各组豚鼠肺、C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和IL-1β的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。免疫组织化学结果显示(染色反应强度用灰度值表示):生理盐水组与单纯致敏组豚鼠IL-1β阳性免疫反应产物的平均灰度值没有显著差异(P>0.05);与这两个对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓背角内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显降低(P<0.01);在哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体),上述部位内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显高于哮喘组(P<0.01)。Western blot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠肺、C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中IL-1β或NGF目标带的IDV(integrated density value)与内参照IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组上述部位样品中IL-1β或NGF目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调IL-1β的表达。这些结果提示NGF诱发IL-1β的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位IL-1β的表达可能是治疗哮喘的新途径。     

NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位TNF-αmRNA表达的上调作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。　方法　应用原位杂交方法结合显微图像分析 ,研究实验性哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位肿瘤坏死因子 αmRNA(TNF αmRNA)表达的变化以及NGF抗体对其的影响。　结果　生理盐水组与单纯致敏组TNF αmRNA的表达没有显著差异 (P >0 0 5 ) ;与这两个对照组相比 ,哮喘豚鼠TNF αmRNA的表达在气道上皮、肺内炎性细胞、C7～T5段脊神经节及脊髓后角内均明显上调 (P <0 0 1) ;在哮喘 +NGF抗体组 ,上述部位内TNF αmRNA的表达明显低于哮喘组 (P <0 0 1)。　结论　NGF诱发TNF α的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一 ,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位TNF αmRNA的表达可能是治疗哮喘的新途径。     

哮喘时豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位Trk A的表达以及神经生长因子对其影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。方法：应用免疫组织化学方法检测豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位 NGF 高亲和力受体酪氨酸激酶 A(TrkA),用 Western blot 蛋白印迹方法检测豚鼠肺、脊神经节和脊髓背角 NGF 和 TrkA 的表达。结果：(1)与对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓背角内 TrkA 阳性反应产物的平均灰度值均明显降低;哮喘 NGF 抗体组则明显高于哮喘组。(2)哮喘组豚鼠肺、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓样品中 TrkA 或 NGF 目标带的 IDV 与内参照 IDV 的比值均明显升高,而哮喘 NGF 抗体组则明显低于哮喘组。结论：NGF 可上调 TrkA 的表达,TrkA 介导的细胞内信号传导系统可能是 NGF 参与哮喘发病的主要途径之一。     

NGF对哮喘小鼠肺及初级传入神经元SH2-Bβ表达的调节作用

目的探讨NGF对哮喘小鼠肺及初级传入神经元(C7-T5脊神经节及相应脊髓后角)SH2-Bβ表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组、anti-NGF组,每组10只。利用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lot)测定各组SH2-Bβ的免疫反应变化;M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7-T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值(MOD)分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P<0.01)。而Anti-NGF组小鼠SH2-Bβ免疫阳性产物MOD分别为0.252±0.015、0.158±0.012、0.251±0.024,明显低于哮喘组(P<0.01)。W estern B lot显示哮喘小鼠的C7-T5节段脊髓及肺内SH2-BβMOD与-βactin MOD的比值(0.738±0.021和1.526±0.022)明显高于对照组(0.346±0.017和0.512±0.018,P<0.01);而Anti-NGF组小鼠在肺、C7-T5节段脊髓SH2-Bβ免疫阳性产物MOD与β-actioin MOD的比值(0.436±0.011和0.682±0.015)明显低于哮喘组(P<0.01)。结论肺内、C7-T5脊神经节及对应脊髓后角神经元的SH2-Bβ可能参与NGF介导的哮喘的发病过程。     

TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β表达的上调作用

目的研究NGF的特异性高亲合力受体TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β的表达的调节作用,探讨TrkA介导的信号通路在哮喘发病机制中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、TrkA抗体阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,利用免疫组织化学方法测定IL-1β表达,M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),TrkA组吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学结果显示TrkA抗体阻断组肺(0.324±0.013)、C7-T5节段脊神经节(0.301±0.065)及对应的脊髓后角(0.216±0.019)IL-1β免疫阳性产物平均光密度值明显低于哮喘组小鼠(0.796±0.025、0.745±0.016、0.528±0.011,P<0.01)。结论NGF介导的TrkA通路的激活可上调IL-1β的表达,介导哮喘气道高反应和炎症反应。     

微卡对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究微卡对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响。 方法： 30只豚鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及微卡组，每组10只。微卡组每只豚鼠在OVA致敏前10 d肌注22.5 μg微卡。应用TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞的凋亡，免疫组化法检测肺组织Bcl-2蛋白的表达。 结果： 微卡组豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数（23.78±5.42）%显著高于哮喘组（4.56±0.68）%(P<0.01)；肺组织Bcl-2蛋白平均积分吸光度值（1 556.3±492.4）显著低于哮喘组（2 321.9±751.2）（P<0.05）。 结论： 微卡能诱导哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡，可能与其抑制Bcl-2蛋白在哮喘豚鼠肺组织的表达有关。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统神经生长因子表达的抑制作用

目的：探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)神经生长因子(NGF)表达的影响。方法：利用免疫组织化学和Westem印迹方法,观察生理盐水组、单纯致敏组、哮喘组和地塞米松组豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)NGF表达的变化。结果：哮喘组豚鼠NGF在肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)表达明显高于对照组,而地塞米松组则明显低于哮喘组。结论：NGF可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠NGF的表达可能是其治疗哮喘的机制之一。     

Akt对哮喘小鼠肺组织VEGF表达的上调作用

目的探讨在哮喘发病机制中,PKB/Akt对哮喘小鼠肺组织VEGF表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、PKB/Akt阻断组,免疫荧光、Western blot方法检测各组小鼠肺组织VEGF的表达。结果免疫荧光结果显示:哮喘组肺组织内VEGF阳性产物的平均光密度(MOD)显著高于正常对照组(P<0.01),而PKB/Akt阻断组与哮喘组相比,上述部位VEGF阳性反应产物的MOD值明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示:与正常对照组比较,哮喘组小鼠肺组织内VEGF的IDV( integrated density value)与内参照IDV的比值均明显升高(P<0.01),而PKB/Akt阻断组上述部位IL-1β目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显低于哮喘组(P<0.05)。结论在NGF介导的哮喘发病机制中,Akt能上调哮喘小鼠肺组织内VEGF的表达。     

哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统(C7~T5脊神经节及对应的脊髓后角)的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只。利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7~T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法(Western blotting)检测肺及C7~T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子(NGF)的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析。结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7~T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P<0.01)。Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7~T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022。NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关(r=0.651,P<0.01)。结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7~T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子。     

哮喘豚鼠MMP-9、TIMP-1免疫反应的变化及与气道重塑的关系

目的　观察实验性哮喘豚鼠气道平滑肌基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达以及气道平滑肌厚度的变化。方法　用免疫组织化学结合显微图像分析测定气道平滑肌MMP 9、TIMP 1免疫反应的变化及气道平滑肌厚度。结果　MMP 9、TIMP 1广泛分布于气道平滑肌。哮喘组MMP 9平均灰度值(10 5 94± 6 0 9)明显低于对照组 (12 0 2 5± 3 6 6 ) (P <0 0 1) ;哮喘组TIMP 1平均灰度值 (99 36± 5 71)明显低于对照组 (12 3 4 5 7) (P <0 0 1) ;哮喘组气道平滑肌厚度 (6 45± 1 83μm2 / μm)明显高于对照组 (3 17± 0 85 )(P <0 0 5 )。结论　MMP 9、TIMP 1可能参与哮喘时气道重塑。     

哮喘豚鼠下呼吸道及内脏传入部位NGF表达的研究

目的　探讨哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统神经生长因子 (NGF)的作用。　方法　利用免疫组织化学和原位杂交结合显微图像分析 ,研究哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统NGF免疫反应及mRNA表达的变化。　结果　与对照组相比 ,哮喘豚鼠NGF免疫反应在气道上皮、C7～T5段脊神经节及脊髓背角明显上调 (P <0 0 1) ,NGFmRNA表达在气道上皮明显增多 (P <0 0 1) ,而在C7～T5段脊神经节及脊髓背角却未见明显改变。　结论　气道上皮、C7～T5段脊神经节及对应节段脊髓背角的NGF可能参与哮喘的发病过程 ;C7～T5段脊神经节细胞及对应节段脊髓背角神经细胞本身能合成NGF。     

实验性哮喘时神经生长因子对P物质的上调作用

目的：探讨实验性哮喘时神经生长因子（NGF）对P物质（SP）的调节机制。 方法： 应用放射免疫分析方法检测了NGF缺失时（鼻腔吸入NGF抗体）哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位SP含量的变化。 结果： NGF缺失时哮喘豚鼠气管、支气管、肺、C7-T5段脊神经节及相应节段脊髓后角、结状神经节和孤束核区SP含量明显低于哮喘组和对照组（P<0.01）。 结论： 实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的P物质水平，两者共同参与支气管哮喘的发病过程。     

实验性哮喘时神经生长因子对神经激肽A的上调作用

目的:探讨实验性哮喘时神经生长因子(NGF)对神经激肽A(NKA)的调节机制。方法: 应用放射免疫分析方法检测了NGF缺失时(鼻腔吸入NGF抗体)哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位NKA含量的变化。结果:NGF缺失时哮喘豚鼠气管、支气管、肺C₇-T₅段脊神经节及相应节段脊髓后角、结状神经节和孤束核区NKA含量明显低于哮喘组和对照组(P＜0.01)。 结论: 实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的神经激肽A水平,二者可能参与支气管哮喘的发病过程。     

NGF在哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液细胞中的表达

为了通过对神经生长因子和支气管肺泡灌洗液细胞在哮喘发病中的作用的研究进而探讨哮喘的神经免疫调节机制 ,本研究应用免疫组织化学方法研究了哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液细胞中神经生长因子的表达变化。结果发现 ,哮喘豚鼠神经生长因子阳性嗜酸细胞和淋巴细胞百分率明显增加 ( P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ;肺泡巨噬细胞绝对数量增加 ,神经生长因子表达也明显上调 ( P<0 .0 1) ,且呈 NGF阳性反应的小型肺泡巨噬细胞数量大大多于大型肺泡巨噬细胞。提示 ,气道炎症细胞内的神经生长因子可能参与哮喘发病的病理生理过程     

1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑的干预作用

 目的 探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3,VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的干预作用及其机制。方法 卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型,BALB / c 小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(DEX）组及VD组。HE 染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用明胶酶谱法及RT-PCR法检测各组的MMP-9的活性及其mRNA表达水平。结果 ①HE 染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而DEX组及VD组均可部分逆转上述病理改变;②DEX组及VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组( P < 0.05);③DEX组及VD组肺组织MMP-9的活性及其mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组 ( P < 0.05) 。结论 VD可显著减轻哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内 MMP-9的表达来延缓气道重塑进程。