白木通基因组DNA提取方法研究

以白木通新鲜叶片为材料,采用改良CTAB法提取DNA,并对提取的DNA进行了纯度鉴定和PCR检测。结果表明：改良的CTAB提取法,能够有效去除次生物质对DNA的干扰,提高提取DNA的质量和纯度,适宜白木通叶片DNA的提取。该改良法提取的DNA可用于SRAP分析。     

丹参干叶片的DNA提取

目的以丹参干叶片为材料,优选一种有效去除多酚类杂质的DNA提取方法.方法先用PVP-40T与材料共研碎,加预冷的提取缓冲液冰置,弃去上清液,沉淀用加Vit C粉末(调pH＝6～6.5)的2×CTAB抽提缓冲液提取.结果得到的DNA可以很好地用于PCR扩增.结论该方法适用于提取含多酚材料的DNA.     

简易提取石蜡包埋组织DNA

DNA的提取是 PCR成功与否的关键 ,而 DNA提取最好是用新鲜标本 ,但对回顾性研究只能从石蜡包埋组织中提取。传统的石蜡包埋组织 DNA提取是用二甲苯脱蜡 ,酚 -氯仿反复多次的抽提 ,这样使得 DNA不断破坏 ,大量丢失 ,操作非常繁琐 ,费时费试剂 ,不适宜处理大量标本 ,且试剂对人体有毒害作用 ,而得到的 PCR反应的结果阳性率低 ,污染严重。为此 ,本室将传统的石蜡包埋组织 DNA提取法进行改良 ,介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　本室 1996～ 2 0 0 0年存档的手术切除的甲状腺癌标本 41例。水浴恒温振摇器 (SHA- C型 ,深圳天南海北实…     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

天麻总DNA提取的研究

目的：寻找快速便捷的天麻总DNA的提取方法.方法：采用天麻干品为材料,用CTAB,SDS 2种提取法及液氮、玻璃砂2种研磨方法提取干天麻总DNA,并进行了比较.结果：2种不同的研磨法和2种不同的提取方法,均可从天麻中提取到一定纯度的DNA,其中CTAB法提取的DNA纯度较好,产率较高;SDS法提取的DNA纯度较低且不稳定,产率较低.结论：从天麻干品中采用CTAB法提取DNA用于分子生物学研究是可行的,用玻璃砂研磨能取得与液氮相近的结果.     

玻璃珠法提取基因组DNA

基因组DNA的分析在科研、临床以及法医界等都得到广泛的应用,以DNA样本为研究对象的PCR、Southern Blot、RFLP等技术手段被广泛采用。因此建立一种经济、快捷高质量的DNA提取方法是非常必要的。我室曾报告过全血[1]、小块组织[2]以及口腔黏膜脱落细胞[3]DNA提取方法。本文利用玻璃珠对细胞的机械破碎作用,建立一种简单、快捷从组织中制备高质量DNA的方法并与目前常用的蛋白酶K组织DNA提取方法进行了比较。1材料与方法1.1材料样品为胃镜下剪取的病人胃黏膜(病例来自天津医科大学总医院,30例,男15例,女15例,均为慢性胃炎病人),玻…     

不同DNA抽提方法在乳腺癌血清循环DNA提取中的效果比较

目的:探讨不同DNA抽提方法在乳腺癌血清循环DNA提取中的效果。方法:选取86例乳腺癌患者为研究对象,比较QIAgene、OMEGA、磁珠法、酚/氯仿法对乳腺癌患者血清循环DNA的提取效果。结果:四种DNA提取方法中,磁珠法具有最高的提取效率(72.5%)和最低的CV值(23.1%)。结论:磁珠法对乳腺癌患者血清循环DNA的提取效果最好,尤其适用于小片断DNA的提取。     

碱裂解法提取质粒DNA的研究

目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究.方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取.结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多.结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少,溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素.     

陈皮总DNA提取方法的研究

目的寻找一种以市售中药材陈皮为材料,可获得高质量的陈皮总DNA的方法。方法采用CTAB法提取总DNA,在研磨过程加入PVP,经琼脂糖凝胶电泳检测。结果用非可溶性PVP(Polyvinylpyrrolidone)研磨,CTAB法能较好的去除色素、多糖等干扰物质。结论该方法可以用于多糖、色素含量高的中药材的总DNA的提取。     

川党参的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

目的 筛选最适党参基因组DNA的提取方法及ISSR (inter-simple sequence repeat)引物,为研究党参种植资源遗传多样性及DNA鉴定奠定基础.方法 以党参嫩叶作为材料,采用常规SDS法、改良CTAB法和试剂盒法3种提取方法基因组DNA,用优化的ISSR-PCR反应对100条引物进行筛选.结果 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA,改良CTAB法效果最佳.从公布的100条ISSR引物中筛选出10条引物,能扩增条带清晰、稳定性好、多态性高的DNA条带.结论 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA进行ISSR分子标志研究遗传多样性时应采用改良CTAB法,筛选出合适的引物在ISSR分子标志中很重要.     

石蜡包埋皮肤组织DNA提取方法的改进

医学研究中,有时新鲜材料取材困难,故常选择石蜡包埋组织用于回顾性研究。从石蜡包埋组织中提取基因组DNA有一定难度,尤其像皮肤这样纤维成分含量较高的组织DNA提取更加困难。传统的酚氯仿抽提DNA,其弊端是过程长、标本损失量相对     

DNA探针杂交检测结核分支杆菌的研究

我们选用生物素标记了一段188bp的常链DNA探针,以碱性磷酸酶催化的显色反应检测,研究其检测结核分支杆菌基因组DNA及其PCR产物的敏感性与特异性。1材料和方法1.1菌种的来源及DNA提取方法24种分支杆菌来自中国药品生物制品检定所,11种非分支杆菌来自中国科学院微生物所。DNA提取     

多种提取全血DNA方法的对比及探讨

目的:探讨不同方法提取全血DNA对DNA质量的影响.方法:采用了从新鲜全血中、冷冻全血中、取白细胞层法全血DNA等方法抽提全血DNA.结果:如果提取液中有0.4M的Nacl,其提取的DNA长度较长;采用双倍抗凝所提取的DNA长于肝素抗凝所提取的DNA;高温及机械损伤能使DNA缩短;EDTA浓度低与提取的DNA长度较短有关;TE溶解的鸡蛋清能使加样孔显示有产物发光.结论:不同方法可以提取不同长度的DNA,根据不同的实验需要可以采取不同的提取DNA的方法.TE溶解的鸡蛋清能使加样孔显示有产物发光的现象需要进一步研究.     

高效提取血细胞DNA的体会

随着分子生物学技术的迅速发展,实验方法也在逐步提高。基因组DNA的提取是分子生物学实验的最基本技术,DNA产量与纯度的高低可直接影响以后的实验结果。在提取DNA的过程中掌握住几个重要环节,可以得到纯度很高的DNA。血细胞提取DNA的主要步骤分为溶解红细胞裂解白细胞,释放DNA氯仿抽提乙醇漂洗DNA存放。在上速提取过程中,经过我们的实践摸索,需要注意以下几个问题:(1)溶血必须彻底,第一次离心后,沉淀物中还存有红细胞,一定重复使用溶血剂,再离心,直到沉淀物发灰白色为止。(2)蛋白酶消化时间要足,使白细胞全部裂解,有时因DNA释放,…     

细菌DNA提取方法比较

目的：比较细菌DNA4种提取方法的优缺点。方法：采用水煮法、传统法、Genmiction DNA Kit法、E．ZNA法分别制备18种细菌DNA，比较4种方法提取DNA纯度及量的差异。结果：4种方法制备的DNA均可成功应用于PCR扩增，水煮法与E．ZNA法提取DNA量都较大，但前者纯度低于后者；Genmiction DNA Kit法提取DNA纯度高，但量较低；传统法提取的DNA量及纯度均较低，但经济、可靠。结论：4种方法各具特点，应根据实验目的选用。     

石蜡组织存放时间对提取DNA质量的影响

目的探讨储存时间对石蜡包埋组织提取DNA质量的影响。方法采用试剂盒方法,分别提取10例保存1~3a的石蜡组织样品DNA,NanoDrop-2000分光光度仪检测DNA浓度和OD260/OD280比值,质量分数2%琼脂糖进行电泳检测,采用单因素方差分析比较DNA质量。结果琼脂糖凝胶电泳显示:石蜡包埋组织提取DNA降解明显。储存1~3a的石蜡包埋组织提取DNA的浓度有明显差异(P=0.04),储存时间越长,DNA浓度越低,但提取DNA的纯度无明显差异(P>0.05)。结论石蜡包埋组织储存时间越长,提取DNA浓度越低,但纯度无明显差异。     

改良国产试剂盒提取血浆DNA的方法

目的建立一种高效、简便快速、成本低的提取血浆DNA的方法。方法对国产试剂盒提取血浆DNA的方法进行改良,并比较了4种方法提取的DNA的质量、所需时间及其费用。结果改良国产试剂盒提取血浆DNA的质量不仅能达到相关分子生物学实验的要求,而且与其他3种提取血浆DNA的方法相比,具有操作简单,耗时短,成本低等优点。结论改良国产试剂盒提取血浆DNA方法操作简单快捷、价格便宜,适合于大样本的血浆DNA提取。     

提取道地药材基因组DNA方法的探讨

目的为研究道地药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供技术保证。方法以道地中药材板桥党参（板党）、五鹤续断药源植物的鲜嫩叶片为材料,采用改进的CTAB法从中提取出基因组DNA,检测其提取效果。结果使用改进的CTAB法从鲜叶中提取板党、五鹤续断的基因组DNA浓度较高,能满足PCR反应的要求。结论自行改进的CTAB法提取道地药材板党、五鹤续断基因组DNA效果较好。     

氯化锂用于质粒DNA的提纯

在分子生物学实验中常常涉及到小量质粒 DNA的提取和纯化。用质粒 DNA提纯试剂盒 ,虽然能得到高纯度的质粒DNA,但成本过高 ,不适合大量使用。用常规的苯酚氯仿提纯法 ,步骤繁琐 ,而且得到的产物中常残留有苯酚或其它杂质而影响后续的酶切分析等工作。再者 ,苯酚有害人体健康 ,而且废弃的苯酚又可造成环境污染。在本实验中 ,已摸索出一种可用于替代苯酚氯仿提纯质粒 DNA的氯化锂质粒 DNA提纯法。该方法简便易行 ,安全经济 ,所获结果稳定性好。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　菌株　 p BR32 2 / C6 0 0 ,RP4/ 1485为本室保存的菌株 ;p …     

影响外周血DNA提取质量因素分析

目的探讨人体外周血冻存标本存放时间对提取DNA质量的影响。方法使用外周血DNA提取试剂盒FlexiGene DNA Kit(250),对-80℃冻存1a、2a、3a和4a的外周血标本进行DNA提取,NanoDrop-2000分光光度仪检测DNA浓度和OD260/OD280比值,1%琼脂糖进行电泳检测,采用单因素方差分析比较DNA质量。结果冻存1a、2a和3a的外周血DNA浓度之间无差异(P>0.05),冻存4a的外周血提取DNA浓度明显低于冻存1~3aDNA的浓度(P<0.05)。冻存1a的外周血DNA纯度明显高于冻存2a及以上的样品(P<0.05)。结论外周血标本-80℃冻存时间超过3a对提取DNA的质量有明显的影响。