新生大鼠缺氧缺血后不同部位脑组织中Par-4基因的表达

目的：观察Par-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后，不同脑组织中的表达。方法：制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型。利用RT-PCR检测脑缺氧缺血后不同时间点海马组织、大脑额叶皮质及小脑中Par-4的mRNA表达的改变，利用Western blot检测在缺氧缺血24h后，海马组织大脑额叶皮质和小脑中Pat-4蛋白表达量的改变。结果：①海马组织和大脑额叶皮质中的Pat4 mRNA在脑缺氧缺血后2h已明显升高，至6h已达高峰。而小脑未见表达；②在新生大鼠脑缺氧缺血24h后，海马组织及大脑额叶皮质中Pat-4蛋白表达量显著升高，并且海马组织中Par-4蛋白表达量高于大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量。而小脑未见其蛋白表达。结论：缺氧缺血对新生大鼠不同脑组织中Par-4基因表达影响不同，Pat-4可能参予了缺氧缺血对新生大鼠海马组织和大脑额叶皮质的致病过程。     

新生大鼠脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA及蛋白的表达

目的 观察μ-calpain基因及蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)脑组织中的表达情况,探讨其在HIBD发生中的作用.方法 7日龄新生SD大鼠随机分为假手术对照组及HIBD后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h各组,采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术观察μ-calpain mRNA及蛋白随时间变化的表达情况.结果 HIBD后6 h损伤侧脑组织μ-calpain mRNA开始增高,24 h达到高峰(P＜0.05),48～72 h下降,但是仍然高于对照组(P＜0.05);μ-calpain蛋白的活性在HIBD后6～12 h表达增高(P＜0.05),24 h达到高峰(P＜0.01),48～72 h仍处于较高水平(P＜0.05).结论 μ-calpain mRNA及蛋白在HIBD新生鼠脑中表达增高,可能参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发生.     

缺氧缺血新生鼠脑组织Nogo-A含量变化

目的 探讨Nogo-A在缺氧缺血新生鼠脑组织中含量变化及其意义。方法 将SD大鼠的7日龄新生鼠（n=64）随机分为8组：4个不同时段的缺氧缺血后脑损伤组（HIBD后6h。24h,72h。7d组）和相对时段的假手术对照组,采用Nogo-A（S-19）多克隆抗体免疫组织化学SP法。结果 Nogo-A在HIBD后24h组新生鼠脑组织中含量明显升高达到峰值,72h及7d组降低。与假手术组无统计学差异。结论 Nogo-A在实验性缺氧缺血脑损伤后含量升高,可能抑制了中枢神经系统的再生。     

缺氧缺血新生鼠脑组织Ng-R含量变化

目的观察Ng-R在缺氧缺血新生鼠脑组织中含量变化,探讨Ng-R抑制神经再生的作用。方法将7日龄新生SD大鼠(rt=64)随机分为8组：4个不同时段的缺氧缺血后脑损伤组(HIBD后6h,24h,72h,7d组)和4个相对时段的假手术对照组,采用Ng—R(N-20)多克隆抗体免疫组织化学SP法观察Ng—R的表达变化。结果Ng-R在HIBD后6h组新生鼠脑组织中含量明显升高,24h组持续升高达到峰值,72h组开始降低,但与假手术组仍有统计学差异,7d组继续降低,与假手术组无统计学差异。结论Ng-R在实验性缺氧缺血脑损伤后含量升高,可能抑制了中枢神经系统的再生。     

Nogo-A蛋白在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠大脑组织中的表达及意义

目的研究神经生长抑制因子Nogo—A在HIBD组和假手术组新生大鼠神经系统中的表达和分布特点，探讨Nogo—A与新生大鼠神经系统生长发育的关系。方法将120只7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组和HIBD组，假手术组仅分离左倒颈总动脉但不结扎颈总动脉不缺氧，HIBD组结扎颈总动脉且缺氧；建模后再细分亚组并在相应时间点取材，免疫组化法检测Nogo—A蛋白的含量。结果Nogo—A免疫反应阳性物质仅存在于神经元胞浆及突起内，海马前下托与胼胝体Nogo—A阳性神经元高度密集，大脑皮层也呈强阳性表达，主要分布于顶叶皮层的第3层，细胞着色较深。建模后7d Nogo—A蛋白表达量仍较少，14d稍增加（P〉0．05），21d较14d增加（P〉0．05），而28d较21d变化幅度较大（P〈0．05）。在假手术组脑组织切片中也可见到Nogo—A阳性细胞，阳性细胞散在分布，着色较淡。结论新生大鼠HIBD组Nogo—A蛋白表达强于假手术组，这说明缺氧缺血性脑损伤的发病机制可能与Nogo—A这一神经生长抑制因子的产生增多有关。     

川芎嗪对新生鼠缺血缺氧脑损伤HIF-1α表达的影响

目的:探讨实验性大鼠缺血缺氧脑损伤(HIBD)时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及川芎嗪对HIF-1ɑ表达的影响?方法:新生SD大鼠结扎左侧颈总动脉并置于缺氧环境中,制备HIBD模型?川芎嗪干预组在缺血前和缺血后腹腔注射川芎嗪(50 mg/kg)?应用逆转录PCR和免疫组化方法观察川芎嗪对HIBD新生鼠皮质部位HIF-1α mRNA 及蛋白表达的影响?结果:缺血缺氧2 h后HIF-1α mRNA 及蛋白表达有增加的趋势,但与假手术组相比无统计学意义(P > 0.05);川芎嗪干预组HIF-1α mRNA 及蛋白表达显著增加,明显高于缺血缺氧组(P < 0.05)?结论:川芎嗪促进新生鼠缺血缺氧脑损伤皮质部位HIF-1α mRNA 及蛋白表达,是其神经保护作用的重要机制?     

电针治疗对缺氧缺血新生大鼠海马组织超微结构的影响

目的：探讨电针治疗对缺氧缺血新生大鼠脑组织超微结构的影响。方法：9只出生7d的Wistar大鼠,随机分为3组。假手术对照组不进行缺氧处理,缺氧缺血组制备成缺氧缺血模型,电针治疗组于缺氧缺血模型制备成功后,电针针刺“百会”、“大椎”两穴。常规饲养22d后,取海马区脑组织制成超薄切片,电镜观察其超微结构变化。结果：缺氧缺血组海马区脑组织神经元及神经胶质细胞损伤明显,缺氧缺血后电针治疗组神经组织超微结构与假手术对照组差异无统计学意义,而受损程度明显轻于缺氧缺血组。结论：电针具有促进缺氧缺血大鼠脑组织损伤修复的作用。     

新生大鼠持续缺氧条件下水通道蛋白4与脑水肿的关系

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在新生大鼠持续缺氧过程中与脑水肿的关系。方法健康10d龄SD大鼠,随机分为对照组和实验组。实验组结扎右侧颈总动脉,然后缺氧不同时间分为缺氧缺血(HI)2h组、HI 4h组、HI 8h组、HI 16h组4个亚组,对照组行假手术。观察每组动物神经行为学改变,各组实验取脑组织,行苏木精伊红(HE)染色、免疫组织化学染色、荧光定量PCR,观察新生大鼠海马CA1区形态变化和AQP4表达水平。结果实验组均出现不同程度的缺氧症状;实验组与对照组比较,有不同程度的水肿,且随着时间的延长,水肿加重,神经元呈现不可逆损伤;AQP4蛋白和RNA的表达水平呈下降趋势。结论 AQP4表达水平下降参与新生大鼠持续缺氧缺血条件下脑水肿的形成。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑细胞凋亡的研究

目的　利用大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型 ,观察缺氧缺血性脑损伤后不同时间细胞形态变化及细胞的死亡形式 ,为缺血缺氧性脑病提供实验和理论依据。方法　 7日龄SD大鼠 6 6只 ,随机分为对照组、假手术组和实验组 (缺氧缺血不同时间 ) ,实验组动物采用阻断左侧颈总动脉后置于含 8%O2 的低氧环境中 ,建立缺氧缺血性脑损伤动物模型。用HE、硫堇及TUNEL染色技术在光镜下观察脑组织的病理改变。结果　大鼠缺氧缺血后 3h时脑细胞即有水肿 ,6h时发现有局灶性坏死 ,12、2 4和 48h可发现大量坏死神经细胞 ;在缺氧缺血后 3h细胞凋亡出现 ,之后凋亡细胞数目明显增加。凋亡出现在细胞坏死之前。结论　新生鼠缺氧缺血性脑损伤后 ,细胞死亡有凋亡和坏死两种形式。     

GM1对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用

目的研究外源性单唾液酸四已糖神经节苷脂(monosialotetrahexosylgangtliosicle,GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic brain damage，HIBD)的保护作用。方法建立HIBD模型，观察腹腔注射GM，对HIBD模型鼠体重增长、脑水肿的影响，并用免疫组化及苏木素-伊红(HE)染色方法检测缺氧缺血(hypoxic—ischemic，HI)和GM1干预后不同时间点脑海马组织HSP70阳性细胞及病理学改变。结果HI后新生大鼠海马CA1区仅能检出少量阳性HSP核蛋白(仅在核内表达的蛋白)，海马CA1区神经元呈较严重的缺血损伤性改变。而GM1组体重增加、脑水肿减轻、可见应激蛋白HSP70明显表达。结论GM1可使新生大鼠海马CA1区HSP70表达上调，减轻脑水肿、减轻脑缺氧缺血后病理损伤，对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血再灌注脑损伤肾上腺髓质素表达的研究

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血再灌注脑损伤(hy-poxic-ischemic reperfusion brain damage,HIRBD)后不同时间脑组织肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)mRNA、AM及外周血血浆AM水平变化规律。方法:将42只健康7 d龄SD实验大鼠随机分为正常对照组、假手术组、HIRBD后0 h、6h、12 h、24 h、48 h组,每组6只,按时剖杀各组实验大鼠,断头取血及双侧脑组织,采用半定量RT-PCR法测定脑组织AM mRNA,酶联免疫吸附法测定脑组织和血浆AM水平。结果:①HIRBD各组脑组织AM mRNA、AM和血浆AM水平显著性增高,与对照组比较有统计学意义(P均<0.05),高峰在6~24 h,24 h后开始下降。②脑组织AM mRNA水平和脑组织AM水平呈正相关(r=0.75,P<0.05)。③外周血血浆AM水平和脑组织AM水平呈正相关(r=0.78,P<0.05)。结论:缺氧缺血再灌注可诱导新生大鼠脑组织AM基因表达和转录水平的增高,并具有一定的时间依赖性;新生大鼠HIRBD时脑组织AM基因表达和转录水平的增高可能是外周血血浆AM增高的主要原因。     

降钙素基因相关肽对缺氧缺血新生大鼠脑组织中内皮素的影响

目的:建立新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型,探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对缺氧缺血性新生大鼠脑组织匀浆中内皮素(ET)的影响及CGRP对脑损伤的保护作用。方法:将7日龄新生大鼠分为3组,正常对照组(假手术组);生理盐水组给予生理盐水3μg/(kg·d),腹腔内注射,连续3d;药物治疗组给CGRP3μg/(kg·d),腹腔内注射,连续3d,断头取脑,用放射免疫分析法检测新生大鼠脑组织匀浆中ET的含量变化。结果:生理盐水组ET(112.55±20.70)pg/ml显著性升高,与正常对照组(53.02±12.39)pg/ml比较,差异有显著性P<0.01;药物治疗组ET(61.01±14.44)pg/mlCGRP与正常对照组比较,差异无显著性P>0.05。结论:ET参与缺氧缺血时的病理生理过程;CGRP能降低新生大鼠缺氧缺血脑损伤后ET的含量,CGRP对缺氧缺血脑损伤有保护作用。     

氦氖激光穴位照射对缺血缺氧新生大鼠海马组织超微结构的影响

目的：探讨氦氖激光穴位照射对缺血缺氧新生大鼠海马组织超微结构的影响。方法：9只新生Wistar大鼠,随机分为3组：假手术组、缺血缺氧组、激光穴位照射组,每组3只。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧,后2组均制作缺血缺氧模型,缺血缺氧组动物不加任何治疗,激光穴位照射组于缺血缺氧后2d,采用氦氖激光穴位照射。常规饲养22d后,取海马区脑组织电镜下观察其超微结构的变化。结果：假手术组海马区神经细胞结构清晰,细胞核膜光滑,胞浆内细胞器丰富,结构完整;缺血缺氧组神经细胞胞体水肿,核膜模糊,细胞器明显减少;激光穴位照射组神经细胞水肿减轻,核膜较清晰,细胞器较丰富。结论：氦氖激光穴位照射具有减轻缺血缺氧对大鼠海马组织超微结构损伤的作用。     

鼠神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后巢蛋白表达的影响

目的观察鼠神经生长因子(mNGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后巢蛋白(nestin)表达水平的影响,研究内源性神经干细胞增殖情况,探讨m NGF可能的神经保护机制。方法新生7 d龄Wistar大鼠108只按完全随机法分为对照组、HIBD组和治疗组,每组36只。结扎大鼠左侧颈总动脉和8%低氧暴露2 h,制作新生大鼠HIBD模型。对照组仅暴露游离左侧颈总动脉,不结扎左侧颈总动脉和低氧暴露。治疗组大鼠于左侧股二头肌部位肌肉注射m NGF (10μg/kg),1次/d,连用3 d。HIBD组大鼠于相同部位注射等量生理盐水3 d。每组随机取12只大鼠分别于术后4 d、7 d、14 d处死后,制备大鼠海马部位脑组织HE及免疫组化切片。利用计算机图像分析技术检测各组nestin阳性细胞计数。结果对照组海马部位椎体细胞排列整齐,HIBD组海马部位椎体细胞排列紊乱,可见较多凋亡神经细胞,治疗组可见海马部位椎体细胞排列较整齐,可见少量凋亡神经细胞;对照组、HIBD组及治疗组大鼠术后4 d nestin阳性细胞个数分别为(15.25±3.02)个、(24.67±3.37)个、(40.33±2.6...     

亚低温降低新生大鼠缺氧缺血脑损伤半胱氨酸蛋白酶活性

目的　探讨亚低温治疗对新生大鼠缺氧缺血脑损伤 (HIBD)脑组织天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 3(caspase 3)活性的影响及意义。 方法　将HIBD模型鼠随机分为常温缺氧缺血 (IN)组 (肛温 37℃ )和亚低温缺氧缺血 (IH)组 (肛温 33℃ ) ;对照组为假手术动物 ,分为常温对照 (CN)组和亚低温对照 (CH)组。采用显色底物天冬氨酸 谷氨酸 缬氨酸 天冬氨酸 7 氨基 4 三氟甲基香豆素 (DEVD AFC)测定caspase 3酶的活性 ,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法 (TUNEL)检测脑细胞凋亡。结果　缺氧缺血侧大脑组织caspase 3活性逐渐增高 ,以IN组最明显 ,2 4h达高蜂 (34.7± 3.2 ) ,然后逐渐下降 ,但 4 8h(12 .9± 4 .1)和72h(4 .2± 0 .9)后仍有明显增高 ;亚低温可明显降低caspase 3活性的增高 ,以亚低温治疗 2 4h(2 .4± 0 .5 )最明显 ,与IN组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1) ;72h亚低温还可显著降低脑细胞凋亡的发生率 ,为 (6 .4± 1.7) % ,与IN组的 (2 5 .3± 1.5 ) %相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;72h亚低温对细胞坏死无明显改善 ,细胞坏死率为(11.2± 0 .7) % ,与IN组的 (13.0± 1.4 ) %相比 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。caspase 3活性与脑细胞凋亡发生率呈正相关 (r =0 .78,P <0     

新生鼠脑组织缺氧缺血再灌注损伤NF-κB的表达及意义

目的 观察新生鼠窒息后缺氧-缺血-再灌注损伤不同时间脑组织NF-κB动态变化,以探讨NF-κB信号途径在新生儿窒息脑损伤中的作用.方法 出生7 d新生鼠随机分为对照组(A组)和窒息组(B组);制备新生鼠窒息模型,并于窒息后1、3、5和7 d取脑组织行石蜡切片.采用免疫组织化学方法检测窒息新生鼠脑组织NF-κB p65活性表达水平,用苏木精-伊红染色观察窒息后脑组织形态学变化.结果 B组脑组织NF-κB的表达较A组显著增强(P＜0.05),以5 d时升高最明显;并伴有神经细胞坏死及凋亡现象.结论 NF-κB可能通过炎症反应机制介导窒息脑损伤过程.     

新生大鼠缺氧缺血再灌注损伤后ROCK-2，α-SMA与ROCK信号通路的关系

目的检测α-SMA(α-Smooth muscle actin)、ROCK-2(Rhoass ociated coiled-coil forming protein kinase-2)在缺氧缺血新生大鼠脑组织的表达,探讨Rho(Rho guanosinetriphosphatases)/ROCK信号通路的激活在新生大鼠缺氧缺血再灌注脑损伤中的意义。方法将SD大鼠的7 d龄新生鼠(n=48)随机分为两组:真手术组包括3个不同时段的缺氧缺血性脑病后2 h、6 h、24 h组和相对时段的假手术对照组,采用多克隆抗体免疫组织化学SP法观察α-SMA、ROCK-2的表达。结果假手术组在各时段α-SMA、ROCK-2表达无明显变化;HIBD组中α-SMA,ROCK-2在不同时间点呈上升趋势;ROCK-2与α-SMA的表达呈正相关。结论 ROCK-2与α-SMA在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后随着时间表达呈上升趋势,证明ROCK-2与α-SMA参与HIBD的病理生理过程,从而说明RHO/ROCK信号通路的激活参与了新生鼠缺氧缺血性脑病的发生发展。     

新生大鼠缺氧、缺血合并高、低血糖的脑细胞凋亡研究

目的应用显微镜观察及原位末端标记技术,对新生大鼠缺氧、缺血（HI）合并高、低血糖模型进行脑细胞凋亡形态学研究。方法7日龄SD新生大鼠通过不同的模型制备方法,分为8组：正常对照组、假手术组、HI组、HI前轻度高血糖组、HI前重度高血糖组、HI前低血糖组、HI后轻度高血糖组及HI后重度高血糖组。在对新生大鼠HI合并高、低血糖模型进行脑病理研究的同时,运用原位末端标记技术进一步对其进行脑细胞凋亡形态学研究,观察不同血糖浓度对脑细胞凋亡造成的影响。结果HI前重度高血糖组大鼠的脑凋亡细胞数明显减少,而HI前低血糖组大鼠的脑凋亡细胞数明显增加。提示HI前重度高血糖可显著减轻HI后脑细胞凋亡,HI前低血糖则可进一步加剧HI后脑细胞凋亡。结论HI前重度高血糖减轻HI后脑细胞凋亡的机制可能与其补充了一定量的葡萄糖,使能源物质不至匮乏,因而避免或减轻脑HI损伤加剧及脑细胞凋亡有关。     

缺血缺氧新生大鼠脑内HO-1的表达及与CO的相关性

目的：研究缺血缺氧时新生大鼠脑内血红素氧化酶－1（HO－1）表达的变化及其与内源性一氧化碳的相关性。方法：7d龄SD仔鼠110只，随机分为3组：假手术对照组（Control,10只），缺血缺氧组（HI，50只）及缺血缺氧＋锌原卟啉组（HI＋Znpp,50只），于模型建立后0，1，4，12和24h处死，观察各组脑组织HO－1活性的变化及CO和cGMP含量。结果：（1）缺血缺氧组cGMP及CO水平在缺血缺氧后0h即升高，与对照组相比较有明显差异（P＜0．01），但与HI＋Znpp组无显著差别（P＞0．05）。（2）缺血缺氧后0h各组HO－1活性均无显著差异（P＞0．05）。（3）缺血缺氧组在1，4和12hHO－1，cGMP，CO水平与对照组及HI＋Znpp组比较均 明显升高（P＜0．01），在12h达到高峰，在24h恢复正常水平。与HI和12h均明显减低（P＜0．01），但仍高于正常组（P＜0．01）。结论：缺血缺氧对脑内HO－1诱导高表达，并与内源性一氧化碳的增高密切相关。HO－CO－cGMP系统可能在缺血缺氧脑损伤的病理生理过程中起着重要作用。     

新生大鼠缺氧缺血时脑皮质Fas-L的变化

目的: 探讨缺氧缺血脑损伤时脑皮质Fas-L蛋白表达的变化.方法: 建立新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型并设假手术组作为对照,根据检测需要,在缺氧、缺血后24 h,3 d,7 d应用免疫组织化学SP法测定脑皮质Fas-L蛋白表达情况.结果: 左脑皮质Fas-L蛋白表达阳性率假手术组、实验组24 h依次为8.04±3.50,120.20±6.10 ; 3 d依次为8.20±3.10,87.6±5.90; 7 d依次为8.01±2.80,8.32±2.90.实验组与假手术组比较,在第7天时,差异无显著性(P＞0.05);24 h,3 d时明显增多,差异显著(P＜0.05).结论: 新生大鼠HIBD后24 h,3 d,7 d结扎侧脑皮质,Fas-L蛋白开始表达增高,后降低.