SCID-hu人鼠嵌合模型在生物医学研究中的应用

将人的造血干细胞移植到重症联合免疫缺陷（Ｓｅｖｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＳＣＩＤ） 小鼠体内，构建成ＳＣＩＤｈｕ 人鼠嵌合小鼠模型。该ＳＣＩＤｈｕ 小鼠模型的构建为在体内研究人造血、免疫系统的病理生理机能及人造血干细胞基因治疗提供了有力的工具。     

重建SCID小鼠免疫功能对肝癌抗原的体液免疫应答

为在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人免疫Ｂ淋巴细胞，将１２～１４周龄的胎儿肝细胞（１～２）×１０１０／Ｌ腹腔注射于ＳＣＩＤ小鼠，然后再分次接种肝癌细胞。用ＥＬＩＳＡ法于第４，５，６周连续检测ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠血清人ＩｇＧ；用免疫组化ＡＢＣ法检测各种组织中的人淋巴细胞。各实验小鼠均检测到人ＩｇＧ的存在，最高为３９１μｇ／Ｌ，且随时间的延长呈上升趋势。在ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠肝、脾及腹腔接种瘤组织的周边，可见人ＣＤ３＋和ＣＤ２０＋的淋巴细胞。上述结果表明，用人胎肝细胞移植可在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人淋巴细胞，并对人肝癌细胞抗原产生免疫应答，分泌一定水平的抗人肝癌的抗体。提示：用人胎肝细胞在ＳＣＩＤ小鼠体内可建立人免疫系统的部分功能。     

人类造血干细胞:具有不同增殖和自我更新能力的异质性群体

利用骨髓、外周血或脐带血来源的造血干细胞作过继免疫治疗 (ＡＩＴ)是一种行之有效的临床治疗手段。ＡＩＴ成功的关键有赖于大量的输注细胞 ,而大量细胞的获得与造血干细胞 (ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ,ＨＳＣｓ)密切相关。加拿大多伦多大学肿瘤 血液基因治疗小组的科学家古恩奇利用基因示踪法对输注的造血干细胞作了研究。ＨＳＣｓ经逆转录病毒转染后 ,移植到非肥胖型糖尿病性严重联合免疫缺陷小鼠 (ＮＯＤ ＳＣＩＤ)上 ,此种细胞称为ＳＣＩＤ细胞系重建细胞 (ＳＲＣｓ) ,分别在 3、6、12周取其骨髓 ,提取其ＤＮＡ ,…     

两种人化SCID小鼠的建立及其免疫应答性

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳｅｖｅｒｅＣｏｍｂｉｎｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔＤｉｓｅａｓｅ，ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，建立人化ＳＣＩＤ小鼠（即ＳＣＩＤ－ｈＰＢＬ，ＳＣＩＤ－ｈＰＬＮＬ）。两个月后，两种人化小鼠体内淋巴器官都可以检测到人Ｔ、Ｂ淋巴细胞分布；小鼠血清人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体水平（ＩｇＧ／ＶＣＡ）比较显示，用Ｂ９５８死细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。１４只ＳＣＩＤ－ｈＰＬＮＬ小鼠血清内人ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度在１∶１０８和９６．２±５６．４μｇ／Ｌ；在另８只ＳＣＩＤ－ｈＰＢＬ中为１∶７．９和１３．８４±６．０μｇ／Ｌ。实验提示，ＳＣＩＤ－ｈＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ｈＰＢＬ小鼠更适合于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

用SCID小鼠可提供高产量的抗人HLA单抗

用ＳＣＩＤ小鼠可提供高产量的抗人ＨＬＡ单抗［英］／ＰｉｓｔｉｌｌｏＭｐ…／／ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ。－１９９２，２５（１）。－２５６～２５９ＳＣＩＤ（严重联合免疫缺陷症）小鼠缺乏功能性Ｔ，Ｂ淋巴细胞，但仍有ＮＫ细胞功能。最近，ＳＣＩＤ小鼠已用...     

体内IL－12对血管生成的抑制作用

体内ＩＬ－１２对血管生成的抑制作用［英］／ＥｍｉｌｅＥＶｏｅｓｔ…Ｃａｎｃｅｒｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．－１９９５８７．－８已知ＩＬ－１２在一些鼠类肿瘤模型中具有抗肿瘤生成和抗转移作用，但ＵＩＬ－１２在体外没有直接的抗瘤细胞作用，而且在ＳＣＩＤ，免疫缺陷的...     

G-CSF、GM-CSF的临床应用现状

粒细胞集落刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ, Ｇ－ＣＳＦ）、粒巨噬细胞集落刺激因子（ Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ＧＭ－ＣＳＦ）分别是促粒系、粒－单系造血祖细胞增殖、分化及成熟,并增强其成熟细胞功能的特异造血调控生长因子。重组ＤＮＡ技术的发展,使得利用基因工程方法大量生产细胞因子成为可能。目前,Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ基因重组产品已广泛应用于临床。在血液病的治疗,造血干细胞移植及恶…     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建、表达和其体内外生物学活性研究

目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ｒｈＧ－ＣＳＦ）的稳定性和活性,对ｒｈＧ－ＣＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,ＤＮＡ序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ－６０,对在不同温度及在人血浆中保存的Ｇ－ＣＳＦ蛋白（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）和野生型的Ｇ－ＣＳＦ进行活性测定。腹腔注射后小鼠外周血白细胞计数检测其体内生物学活性。结果ＤＮＡ序列分析表明１７位半胱氨酸突变为丙氨酸,并在大肠杆菌中表达成功Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７。纯化的突变蛋白对ＮＦＳ－６０细胞具有刺激活性;与野生型Ｇ－ＣＳＦ相比,在各种温度储存的突变蛋白保留更高的活性,与人血浆孵育５０小时后突变蛋白仍保持活性;小鼠一次性体内注射突变蛋白后外周血白细胞数明显高于野生型Ｇ－ＣＳＦ。结论Ｇ－ＣＳＦ突变体（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）较野生型的Ｇ－ＣＳＦ具有更高的体外稳定性和体内造血刺激活性。     

小鼠造血干细胞因子的cDNA克隆化及在大肠杆菌表达

造血干细胞因子（ＳＣＦ）是一种多功能造血生长因子，与其它造血生长因子协同作用，刺激不同分化阶段的造血细胞增殖和分化。本文采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从新生ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠胸腺组织克隆了ＳＣＦ膜外功能区ｃＤＮＡ，进而在大肠杆菌表达出具有生物学活性的重组蛋白。     

病毒介导造血干细胞基因转移

造血干细胞（Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌ，ＨＳＣ）是体细胞基因治疗尝试的主要靶细胞之一。造血干细胞基因转移具极大的疾病治疗潜能，可应用于治疗造血细胞及非造血系统的遗传性和获得性疾病。由于造血系统的组织形式十分严密，在造血干细胞群体内以长期重建细胞（Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇｃｅｌ，ＬＴＲＣ）为靶细胞而进行的基因转移，能保证其被基因修饰的成熟终末细胞的连续补充，且其被转移的基因能长期有效表达     

抑制性底物杂交(SSH)技术研究BXSB小鼠的差异表达基因

目的：利用抑制性底物杂交技术（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＳＨ），以ＢＸＳＢ狼疮小鼠为模型，研究系统性红斑狼（ＳＬＥ）发病相关基因。方法：分离ＢＸＳＢ和Ｃ５７－ＢＬ－６小鼠骨髓细胞，ｍＲＮＡ，反转录构建ｃＤＮＡ文库，利用技术研究ＢＸＳＢ小鼠差异表达基因。结果：获得了１２个阳性克隆，其中有３个克隆编码ＴＣＲ、ＭＨＣⅡ类分子及逆转录病毒基因表达产物，均     

造血干细胞与β-地贫的基因治疗

造血干细胞 (ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ,ＨＳＣｓ)是外周血中所有细胞成分的唯一来源。ＨＳＣｓ在体内的含量稀少 ,约占骨髓有核细胞总数的 0 .5 % ;主要存在于造血组织中 ,也有少量循环于外周血[1] 。实验证明 ,哺乳动物每天所需的大量成熟血细胞就是由其体内少量的ＨＳＣｓ产生的。ＨＳＣｓ是一种多能造血细胞 ,能分化出红系细胞、血小板、粒系细胞、单核血细胞和淋巴系细胞。ＨＳＣｓ可自我更新而不发生分化 ,并通过产生各系祖细胞来形成各种成熟的血细胞[2 -5] 。ＨＳＣｓ的特性可应用于移植方面 ,即把少量ＨＳＣ…     

体内HIV－1含量的定量检测

体内ＨＩＶ－１含量的定量检测艾侬戴蒙ＡＩＤＳ研究中心曹韵贞综述ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１（ＨＩＶ－１）是引起ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＩＤＳ）的病因已众所周知，在急性感染后...     

CD34基因克隆和表达

ＣＤ３４分子是高度糖基化的Ⅰ型跨膜蛋白，主要表达于多功能造血干细胞、祖细胞表面，在成熟血细胞表面无ＣＤ３４抗原表达，提示ＣＤ３４分子在早期造血调控方面起着重要的作用。本文采用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从高表达人ＣＤ３４抗原的ＫＧ－１ａ细胞系中成功地克隆出人ＣＤ３４抗原全长ｃＤＮＡ，并将此基因插入克隆“载体ｐＵＣ１８ＨｉｎｃＩＩ酶切位点，构建了重组质粒ｐＵＣ１８－３４。用双酶切ｐＵＣ１８－３４质粒，将分离得到的基因片段插入痘苗病毒载体的ＳｍａⅠ位点，构建了重组质粒ＰＪＳＡ１１７５－３４。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，ＰＪＳＡ１１７５－３４转染已被野生痘苗病毒感染的ＴＫ￣－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人ＣＤ３４抗原全长ｃＤＮＡ的重组痘苗病毒。经活细胞荧光染色和ＡＰＡＡＰ检测，表明重组痘苗病毒能特异地表达人ＣＤ３４抗原。人ＣＤ３４抗原ｃＤＮＡ克隆和表达，为进一步研究其结构和功能的关系以及研究造血调控机理奠定了基础。     

Hu—TLC—SCID小鼠的建立及其对2型登革病毒的免疫应答

利用２型登革病毒（ＤＶ２）体外免疫人扁桃腺淋巴细胞（Ｈｕ－ＴＬＣ）移植给ＳＣＩＤ小鼠，以建立Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠。并用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，观察小鼠对ＤＶ２的免疫应答。结果表明，移植Ｈｕ－ＴＬＣ后第２周起，可在Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠血清中检出入ＩｇＧ，最高达４１２．８６μｇ／ｍｌ。移植后次日用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，每２周加强１次，首次加强免疫后第２周，Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠血清中出现抗ＤＶ２特异性人ＩｇＭ；第４周起有特异性人ＩｇＧ产生，最高达１：６４００。其含量和产生动态与抗原量有关。     

再障患者血清GM—CSF水平及体外骨髓造血祖细胞对GM—CSF的反应

目的：了解再生障碍性贫血（再障）患者血清粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎ，ｆａｃｔｏｒ，ＧＭ－ＣＳＦ）水平及粒－巨噬细胞系造血祖细胞（ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｓ ｏｆ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＣＦＵ－ＧＭ）对ＧＭ－ＣＳＦ的增殖反应特性。方法：用＾１２５Ｉ放射免疫分析法测定１５例再障碍患者     

鼠逆转录病毒小鼠模型的建立

艾滋病（ＡＩＤＳ）的大流动，仍在全球迅速蔓延，极大地危害人类的生命及健康，临床迫切需要寻找新的抗人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）芗，小动物模型是发展新药的重要环节，我们引进Ｃ型鼠白血病病毒，建立了Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠感染模型，观察了ＲＶＢ－３的感染特征。用ＡＩＤＳ首选药－－叠氮胸苷（ＡＺＴ）及黄芩提取品（ＳＢＴ），在该模型内进行实验治疗，两者在体内实验中均显示明显的抗病毒效果。     

含人突变DHFR基因的逆转录病毒对造血细胞的转导及造血功能的作用

利用逆转录病毒介导,成功地将许多基因导入了造血干细胞,含人突变二氯叶酸还原酶（ｈｕｍａｎｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ,ｈＤＨＦＲ）基因的产病毒细胞ＡＭ１２－Ｓ３１,能稳定产生高滴定、安全有效的非复制型逆转录病毒,并能成功转染小鼠造血细...     

表达CS3菌毛和CT—B抗原双价疫苗候选株的构建

肠毒素性大肠杆菌（ＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ＥＴＥＣ）是引起幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。本研究的目的是构建既具有抗菌能力又有中和毒素能力的工程菌株。本研究以Ｂｌｕｅ－ｓｃｒｉｐｔ质粒为载体构建了表达ＣＳ３和ＣＴ－Ｂ的双价重组抗原的克隆株。口服免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和肌肉注射免疫家兔，该重组菌株可以诱发抗ＣＴ－Ｂ和抗ＣＳ３的双重免疫应答，为构建多价腹泻疫苗株奠定了基础。     

rhGM-CSF cDNA直接注射小鼠骨骼肌的体内表达研究

将外源基因直接注入动物体内并获得表达，是近几年发展起来的一种新的基因疗法。该方法操作简便，临床易于接受。天然ＧＭ－ＣＳＦ在体内产生的量极少，本研究将ｈＧＭ－ＣＳＦ基因直接注入小鼠体内，以使小鼠体内产生自身所需要的天然ｈＧＭ－ＣＳＦ。首先将ＰＣＲ扩增的ｈＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ片段平端插入真核表达质粒ｐＣＤＳ中，构建成重组质粒ｐＣＧＩ；然后采用电击法转染ＣＯＳ－７细胞，ＥＬＩＳＡ法检测结果显示转染后２４，４８，７１和９６小时细胞上清有ｈＧＭ－ＣＳＦ的表达分泌。说明重组质粒ｐＣＧＩ能表达分泌ｈＧＭ－ＣＳ…