抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立

目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术。建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为2．8×10^-11mol／L。该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为0．07ng／ml。校正曲线的线性范围为0．02～2ng／ml，线性方程y=-0．4364x＋0．2693（R^2=0．9949）。方法的加标回收率为72．5％～131．3％。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。     

免疫荧光层析试纸条法检测食用油中的黄曲霉毒素B_1

目的建立快速检测食用油中黄曲霉毒素B1的免疫荧光层析试纸条法,用于鉴别正规的食用油和地沟油。方法应用自行研制的免疫荧光层析试纸条,对20份检验合格的食用油样本和10份地沟油样本进行免疫荧光试纸条法检测,同时采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法作比较;采用含黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、黄曲霉毒素M2、黄曲霉毒醇、黄曲霉毒素Q1的模拟样本进行特异性检测。结果本免疫荧光层析试纸条法的检测下限为5μg/L;20份检验合格的食用油样本均未检出黄曲霉毒素B1,10份地沟油中有8份检出含有黄曲霉毒素B1,荧光免疫层析试纸条法和LC-MS/MS法具有高度的相关性,r0.950 0;对于其他的黄曲霉毒素具有高度特异性。结论用免疫荧光层析试纸条法检测地沟油中黄曲霉毒素B1是可行的。     

潍坊市售液态奶及奶粉中黄曲霉毒素M_1污染分析

目的对潍坊市售液态奶与奶粉中黄曲霉毒素M1的含量进行调查分析。方法随机抽取不同品牌的超高温灭菌液态全脂纯牛奶(UHT奶)41份、巴氏灭菌液态全脂牛奶7份,牛奶粉51份(其中婴幼儿奶粉45份,其他10份)作为研究对象,采用免疫亲和层析净化-高效液相色谱-荧光检测法测定黄曲霉毒素M1含量。结果液态奶中黄曲霉毒素M1阳性率为62.5%,其中超高温灭菌奶检出阳性率为56.1%,巴氏消毒奶检出阳性率为100.0%。奶粉中黄曲霉毒素M1阳性率为20.0%,其中婴幼儿奶粉的检出阳性率为17.8%,其他类奶粉检出阳性率为30.0%。结论潍坊市售液态奶及奶粉的黄曲霉毒素M1污染总体上属于轻度污染,但巴氏奶检出率较高,收购原料奶中的黄曲霉毒素M1的检测还需加强。     

免疫亲和-荧光光度法快速测定乳脂及其制品中的黄曲霉毒素M1

本文研究应用荧光光度法测定高乳脂乳和乳制品中的黄曲霉毒素M1,方法 检测限为0．1μg／kg,相对标准偏差低于5％,回收率88％～93％。方法 简便快速、灵敏准确,能够满足进出口乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的测定。     

黄曲霉毒素：人类健康的隐形“杀手”

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的有毒代谢产物,上世纪60年代由于英国发生的十万只火鸡突发性死亡事件而被发现,至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有二十多种,在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见,危害性也最强,而此次牛奶检测超标的黄曲霉毒素M1则是黄曲霉毒素B1的代谢物。     

黄曲霉毒素B1的检测方法

黄曲霉毒素具有毒性大,致癌力强,样品中含量低等特点,而黄曲霉毒素B1是全部黄曲霉毒素中毒性最强的,这要求检测方法灵敏度高,特异性强,集分离与检测为一体。目前黄曲霉毒素B1测定的方法有薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。所有这些方法主要是根据黄曲霉毒素B1的化学结构和生物特性结合仪器来对黄曲霉毒素B1进行定性、定量的分析,使之更加完善。笔者就目前使用较多,受人们关注的几个代表性方法作如下讨论。     

食品中黄曲霉毒素污染及其检测

自1960年英国发现“火鸡的X病”(黄曲霉毒素中毒症)以来,国内外学者对黄曲霉毒素的分布、产生、毒害作用、预防、检测等方面进行广泛的研究,积累了大量资料,本文仅就黄曲霉毒素的生物特性,食品中的污染情况,对人畜危害及其检测方法作概括性介绍。1 黄曲霉毒素的生物学特性     

采用噬菌体展示技术筛选黄曲霉毒素B_1模拟抗原表位

目的从随机肽库中筛选黄曲霉毒素B1模拟抗原表位,以建立无需黄曲霉毒素B1偶联抗原的免疫学检测方法。方法利用噬菌体展示技术,以抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和淘选,ELISA鉴定阳性克隆,通过DNA测序对每个阳性克隆进行定性分析。结果通过4轮结合/扩增循环,获得了能与抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体结合的肽,采用间接竞争ELISA,筛选到了4株能抑制黄曲霉毒素B1的阳性克隆子,经DNA测序得到HXXDPXH共有序列,其中X为任意氨基酸。以其中P10噬菌体阳性克隆建立竞争ELISA方法,线性范围为500~2000pg/ml,检测下限为50pg/ml。结论利用噬菌体展示技术筛选到了黄曲霉毒素B1模拟抗原表位,并以其代替黄曲霉毒素B1偶联抗原建立了免疫学检测方法。     

腐乳中6种黄曲霉毒素污染状况调查

目的掌握绍兴市场上腐乳的黄曲霉毒素污染情况,并从生产工艺中寻找黄曲霉毒素产生的途径。方法抽取绍兴市场上腐乳样品37份检测黄曲霉毒素,并进行腐乳生产工艺流程监测。结果 37份样品中,1份青腐乳检测出黄曲霉毒素B11.5μg/kg,腐乳生产流程监测未检出黄曲霉毒素。结论绍兴市场中腐乳黄曲霉毒素没有超标,需加强腐乳生产工艺流程监测。     

食品中黄曲霉毒素高灵敏检测方法研究进展

黄曲霉毒素(Aspergillus flavus toxin,AFT)主要是由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)产生的次生代谢产物,目前已分离鉴定出12种,分别是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1、H1、GM、B2a和毒醇,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2是粮油制品中黄曲霉毒素存在的主要形式[1].1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)划定为Ⅰ类致癌物,主要作用于肝脏,在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)最为多见,其毒性和致癌性也最强[2].     

DNA加合物检测方法研究进展

DNA加合物的研究已成为现代毒理学领域的热点,其检测方法也不断改进、发展,其中包括32p后标记法、免疫学方法、荧光测定法、气谱-质谱法以及一些其他方法.每种方法都存在着一些优势和不足,该文就对其中几种常用的检测方法进行介绍和评述.     

游程总数法与传统方法诊断发表偏倚的一致性

摘要:目的　评价基于发表时间顺序构建的游程总数法与基于效应量及其误差项构建的传统方法诊断发表偏倚的一致性。方法　产生Meta分析模拟数据采用Kappa指数评价诊断方法的一致性。结果　对于有偏和无偏Meta分析模拟数据两类方法诊断发表偏倚的一致性Kappa指数处于0～0.4之间。结论　依不同理论依据构建的发表偏倚诊断方法的诊断一致性差,为探讨构建两类诊断方法间的联合诊断发表偏倚的方案提供了参考依据。     

两种快速检测西尼罗病毒方法的研究

目的 建立可用于中国的蚊虫携带西尼罗病毒（WNV）监测的快速检测方法。方法 选择两种快速检测方法VecTest试剂盒和Ramp系统，对其检测WNV的敏感性、精确性以及与流行性乙型脑炎（乙脑）病毒的交叉反应进行研究，同时对采自北京市野外的蚊虫进行WNV检测。结果 Ramp试剂盒检测方法比VecTest试剂盒方法敏感性高，但后者检测时间短、操作简便，更适合现场筛查使用；经RT-PCR方法确认此2种快速检测方法无假阳性及假阴性结果；VecTest试剂盒和Ramp系统与乙脑病毒也无交叉反应。使用这2种检测方法对北京市6种野外蚊虫进行了WNV检测，结果 均为阴性。结论 VecTest试剂盒和Ramp系统均可用于WNV快速检测。     

16SrRNA在多聚酶链反应麻风诊断中的特异性研究

目的：了解用16SrRNA作引物，多聚酶链反应（PCR）技术检测麻风病的特异性。方法：用16SrRNA分子片段作引物，用多聚酶链反应检测20余株非麻风分枝杆菌，麻风分枝杆菌标准菌株及4例传统方法确诊的麻风病患者。结果：麻风标准菌株和4例中的3例患者检测为阳性，其余20余株非麻风分枝杆菌均阴性。结论：16SrRNA作引物，PCR方法检测麻风病确有其特异性。     

一种用于食源性空肠弯曲菌阻抗法检测的培养基及其应用

目的:利用空肠弯曲菌生长时对培养基中添加物质氧化还原电位的改变,建立空肠弯曲菌阻抗检测法。方法:利用电阻抗法检测食品中空肠弯曲菌方法,通过对空肠弯曲菌选择性增菌培养基布氏肉汤的改进,加入硫酸亚铁、丙酮酸、偏亚硫酸钠等还原剂降低培养基中氧化还原电势Eh,及多种抗生素,TMP为抗菌增效剂,多粘菌素B对革兰阴性菌有效,万古霉素对革兰阳性菌抗菌效果较强。检测时在培养基表面覆盖石蜡油以获得更好的微需氧条件,连续检测空肠弯曲菌代谢所引起培养基的电阻抗变化值,通过培养基电阻抗变化判定空肠弯曲菌的存在。结果:经与常规培养法进行比较,阻抗法可最低检出添加量为102/m l的阳性样品,检测结果与常规培养法一致性较高,对于阴性结果能在48 h内出具结果,大大提高了检测速度。结论:空肠弯曲菌阻抗检测法相比于传统的培养法,能够有效缩短检测时间,提高检测效率。     

Mechanisms of psychophysiological choice in schoolchildren and humanitarian students

Described in the paper is a case study targeted at detecting the age-related dynamics of some indices and psychophysiological mechanisms of decision-making in senior schoolchildren and humanitarian students; the study was based on computer-aided test systems. The research methods are presented and its results are analyzed.     

转基因作物标记蛋白潮霉素磷酸转移酶活性的测定方法

潮霉素磷酸转移酶 (HPT)是转基因作物中重要的标记蛋白 ,其活性的测定对含有该标记基因的转基因作物的植株构建、基因沉默、标记基因去除及安全性分析等具有重要的作用。本文综述了潮霉素磷酸转移酶活性测定的几种方法 ,包括放射化学法、抑菌生长法及酶耦联法 ,其中放射化学法用于检测组织粗提蛋白中的HPT活性 ,而其他两种方法适用于纯化过的HPT蛋白活性的检测     

酶联免疫吸附试验和微粒子酶免疫分析法检测血清甲型肝炎总抗体的比较研究

目的评估酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清甲型肝炎(甲肝)总抗体的检测性能,从而说明两种方法在各自实际应用中的区别。方法用ELISA和MEIA法检测血清甲肝总抗体,再进行两种方法的互相比较。结果检测同一批血清甲肝总抗体样品,定量检测时ELISA法试剂盒敏感度为57.57毫国际单位/毫升(mIU/ml),变异系数(C V)为10.65%,其结果比MEIA法高;两种方法抗体几何平均浓度(GMC)分别为125.8mIU/ml、58.8mIU/ml;定性检测时,41例标本中ELISA法检测39例阳性,MEIA法40例阳性,两法的符合率为97.56%(40/41)。结论定量检测时,MEIA法比ELISA法更精确;定性检测时,ELISA法试剂盒能客观反映疫苗的免疫原性和保护效果,与MEIA法结合能大大提高敏感性。     

蛋白芯片技术及免疫印迹技术检测抗核抗体的比对研究

目的通过比对免疫印迹法与蛋白芯片法对血清标本中抗核抗体的检测结果,验证这两种方法是否具有等效性。方法分别用免疫印迹技术和蛋白芯片技术检测70例临床标本的抗核抗体,记录检验结果,并对检查结果进行统计学分析。结果经配对资料卡方检验分析,两种方法测定SSA、SSB、SM、Scl-70、Jo-1和CENP时结果差异无统计学意义(P>0.05)。仅在测定RNP时结果差异有统计学意义(P=0.04)。结论两种检测方法所测抗核抗体的结果一致性较好,蛋白芯片技术可用于临床抗核抗体的检测。     

宫颈中人乳头瘤病毒检测的研究进展

人乳头瘤病毒与宫颈癌及其癌前病变密切相关,高危型HPV的感染是导致宫颈癌的必要条件,宫颈HPV的检测对于宫颈癌前病变、宫颈癌的筛查及判断预后极其重要,现就国外对宫颈HPV的检测方法及临床应用的研究现况作以综述。