人肺癌中OPB7-1 cDNA片段的克隆定位

目的：寻找肺腺癌发生及转移的相关基因，探讨肺癌发生发展的分子机理。方法：应用细胞培养、逆转录－PCR、RH基因定位及RNA原位杂交方法研究确定肺癌相关基因。结果：OPB7－1 cDNA片段，经RH基因定位方法定位于1p31-1p34。在正常人肺cDNA文库、低转移能力肺腺癌细胞系AGZY83－a cDNA中存在的片段大小一致，但序列中存在个别碱基的差别。OPB7－1 cDNA片段（974bp）与GenBank中已知序列同源性差，但与其有同源性的3个毗连群克隆均位于1号染色体上（1p31-1p34）。24例临床病例分析发现，该片段在肺癌组织中均有不同程度的表达，在正常对照组织中未见明显表达，且在有淋巴结转移病例的肺癌组织中表达程度呈明显增高的趋势。结论：提示OPB7－1可能为新的基因，与肺癌的发生、转移可能有一定的相关性。     

血液透析患者IL－1β、IL－6及IL－8基因表达的研究

利用ＭｅｓｓａｎｇｅＡｍｐｌｉｆｌｃａｔｉｏｎＰｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ（ＭＡＰＰｉｎｇ）系统半定量测定了血液透析患者外周血淋巴细胞白介素１β（ＩＬ－１β）、白介素６（ＩＬ－６）和白介素８（ＩＬ－８）ｍＲＮＡ表达水平，结果发现，血液透析开始１ｈ患者ＩＬ－β、ＩＬ－６和ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达增强，其中ＩＬ－８ｍＲＮＡ的变化最明显。ＭＡＰＰｉｎｇ系统检测细胞因子基因表达具有敏感、可靠和快速的优点。     

逆转录PCR克隆L－选择素cDNA

本文为从转录水平研究Ｌ─选择素表达的调节机制，利用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件及ＥＭＢＬ数据库选出人与大鼠Ｌ─选择素高同源性但与其它细胞因子及其受体无高同源性的ｃＤＮＡ片段，设计ＰＣＲ引物，一步法分离Ｂ系Ｒａｊｉ细胞ＲＮＡ，逆转录ＰＣＲ扩增目的片段，ＨｉｎｆⅠ酶切初步确定后，将片段插入ＰＵＣ１９质粒ＨｉｎｃⅡ位点，转化ＪＭ１０９大肠杆菌，经测序证实扩增克隆片段与设计相符。     

抗人 IL－ 1β单克隆抗体的制备及初步应用

白细胞介素 1(interleukin-1, IL-1)是由多种细胞分泌的细胞因子,具有广泛的免疫调节作用,同时又具有致热和介导炎症的作用,是急性期反应的主要调节因子〔1〕。     

人类p73基因TAp73α cDNA片段克隆及鉴定

目的　构建真核表达重组质粒pcDNA3 1 /TAp73αcDNA ,克隆包含人类 p73基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA片段。方法　采用RT PCR方法获取TAp73αcDNA目的片段 ,构建pcDNA3 1 /TAp73αcDNA重组质粒 ,用构建的重组质粒转化大肠杆菌JM 10 9,通过酶切和测序进行相应的鉴定。 结果　包含人类 p73基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功插入真核表达载体 pcDNA3 1 质粒的多克隆位点 ,经鉴定与理论设计完全一致。结论　包含人类 p73基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA片段已被成功克隆。     

抗人重组IL－1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定；抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ｌｇＧｌ；免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带；ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α、ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无交又反应；放射免疫测定结果证实，３株抗体分别识别ＩＬ－１分子上两个不同的抗原决定簇。     

采用IL－6cDNA控针检测人IL－6基因表达

采用缺口平移技术对ＩＬ—６ｃＤＮＡ进行了生物素和同位素标记，证明两种标记的ＩＬ－６ｃＤＮＡ（３０ｎｇ／ｍｌ）均可检出低至５ｐｇ的同源ＤＮＡ，而模拟探针（５００μｇ／ｍｌ）对高达１００ｎｇ的同源序列无此反应。应用ＩＬ－６ｃＤＮＡ对富含ＩＬ－６ｍＲＮＡ的标本进行斑点杂交或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，证明人参三醇皂甙促进了淋巴细胞ＩＬ—６基因表达（４倍），人胎脾单个核细胞、人胎脑组织匀浆和人胎胰岛细胞内均含有高浓度ＩＬ—６ｍＲＮＡ。     

重组人IL—4 cDNA及纯化蛋白的鉴定

构建了和且人白细胞介素４（ｒｈＩＬ－４）表达质粒ｐＢＶ２２０／ｒｈＩＬ－４ａ，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。经核苷酸序列分析，测出ｒｈＩＬ－４ ｃＤＮＡ全序列与国外发表的ｈＩＬ－４ ｃＤＮＡ序列完全相同。其纯化蛋白产品经分子量测定，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析，等电点分析，Ｎ－端氨基酸序列测定，比活性等测定证明，均符合ｒｈＩＬ－４。     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6cDNA片段克隆、鉴定

根据家蝇CYP6A1,CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,从白纹伊蚊四龄期活体幼虫总RNA中扩增出与设计相符的基因片段。利用T-A克隆法,将获得的基因片段克隆入pGEM-Teasy载体。经限制性内切酶酶切和PCR鉴定证明重组成功。将筛选的阳性克隆经序列测定及同源性分析。表明共获得CYP6家族中9个的新cDNA序列。为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成的分子机制打下基础。     

人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及序列分析

目的：对国人神经生长因子β亚基（βＮＧＦ）ｃＤＮＡ 进行克隆及序列分析,为研究βＮＧＦ 的生理功能及其在临床应用提供基础与手段。方法：从人海马组织分离,纯化总ＲＮＡ,直接进行逆转录,用ＰＣＲ 扩增βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 得到６５０ｂｐ 的ＤＮＡ 片段,利用Ｔ－ Ａ 克隆载体法,制备重组质粒,克隆βＮＧＦｃＤＮＡ。结果：βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 全序列１０７４ ｂｐ ,其蛋白编码为６３０ ｂｐ ,由２１２ 个氨基酸组成,Ｎ 端为信号肽,中间区为前肽,Ｃ 端为成熟肽。结论：国人βＮＧＦ 序列分析结果与ｇｅｎｅ ｂａｎｋ 中的βＮＧＦ 序列完全一致,与外国人没有区别     

人β2GP1全长cDNA的分子克隆及重组质粒构建

采用逆转录ＰＣＲ技术自人胎肝细胞中克隆出人全长１０５９ｂｐ的β２ＧＰ１ｃＤＮＡ，经限制性内切酶图谱分析初步证实后，定向插入表达性载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，并筛选出带有插入片段的阳性克隆，为研究抗磷脂抗体所针对的抗原及表位奠定了基础。     

人单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）cDNA的克隆和序列测定

人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）是由多种细胞产生的一种趋化因子。它不但能趋化单核细胞还能激活单核细胞，在机体防御、炎症恢复和抗肿瘤等方面起重要作用。本文利用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了人ＭＣＰ－１ｃＤＮＡ，经核苷酸序列测定，除第１２位密码子为ＴＧＴ与国外报道的ＴＧＣ不同、但编码相同的氨基酸半胱氨酸外，其余序列完全相同。     

急性病毒性肝炎患者血清中IL－1α，IL－1β，IL－6和TNF－α水平

急性病毒性肝炎患者血清中ＩＬ－１α，ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＴＮＦ－α水平〔英〕／Ｔｏｒｒｅ…／／ＣＩＤ，－１９９４，１８．－１９４～１９８在急慢性肝脏疾病中，宿主细胞和体液应答是引起肝脏损伤的重要因素。肝脏是各种细胞因子主要的合成场所和清除器官。单核...     

人MBL相关丝氨酸蛋白酶-1 cDNA的克隆与鉴定

目的 获得人甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）相关丝氨酸蛋白酶－１（ＭＡＳＰ－１）基因。方法 以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ获取目的ｃＤＮＡ片段,克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体,进行酶切图谱分析和测序鉴定。结果 以ＲＴ－ＰＣＲ方法获得了含信号顺序的全长ＭＡＳＰ－１ｃＤＮＡ,将其与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,转化大肠杆菌ＴＧ１,建立了ＭＡＳＰ－１的ｃＤＮＡ克隆,酶切图谱与微机分析结果一致。序列分析表明。与     

IL－1和IL－2调控未成熟胸腺细胞的IL－2Rα和β链的表达

ＩＬ－１和ＩＬ－２调控未成熟胸腺细胞的ＩＬ－２Ｒα和β链的表达［英］／ＷｉｌｓｏｎＡ…／／ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．—１９９４，２４．—１７２９～１７３５功能性高亲和力ＩＬ－２Ｒ包含３个亚单位，ＩＬ－２Ｒα，β和γ。文章研究了ＩＬ－１和ＩＬ－２对未成熟...     

滑膜液中IL－1β和IL－1ra平衡与Lyme关节炎的恢复

滑膜液中ＩＬ－１β和ＩＬ－１ｒａ平衡与Ｌｙｍｅ关节炎的恢复［英］／ＭｉｌｌｅｒＬＣ…／／Ｌａｎｃｅｔ，－１９９３，３４１．－１４６～１４７Ｌｙｍｅ病时的关节症状常见，发生率为８０％。在感染早期，滑膜细胞和软骨细胞中均出现ＩＬ－１，后者参与炎症的免疫反...     

人单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）基因的PCR扩增、克隆及序列分析

本文报道用植物血凝素（ＰＨＡ）诱导健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ，包括单核细胞和淋巴细胞），提取细胞总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ第一链，再以其为模板进行ＰＣＲ，得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切后，回收含ＭＣＰ－１基因的长约２８０ｂｐ的ＤＮＡ片段，插入到经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切的ｐＵＣ１９载体中，进行序列分析。结果表明，ＭＣＰ－１中第１２个氨基酸的编码序列与国外报道的不同。由ＴＧＴ变成了ＴＧＣ，但编码相同的氨基酸即半胱氨酸，其余的编码序列则完全相同，说明ＭＣＰ－１的基因型可能存在着多态性。     

应用修饰性M13mp18T－载体进行PCR片段克隆

应用修饰性Ｍ１３ｍｐ１８Ｔ－载体进行ＰＣＲ片段克隆现已证明，ＰＣＲ产物对标准克隆程序有独特的阻抗作用，其主要原因有两点；第一，非修饰性的ＰＣＲ产物平头末端克隆效率非常低，这是由于Ｔａｑ聚合酶的模板非依赖性末端转移酶的活性，使ＰＣＲ片段的３’末端上加了...