siRNA介导δ-catenin沉默对肺腺癌细胞的影响

目的探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默δ-Catenin基因对人肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响及可能机制。方法首先合成si-δ-Catenin,用Lipofectamine 2000转染至A1549细胞,同时设立阴性对照(negative control, NC)和空白对照(Blank),qRT-PCR检测转染效率。分别采用划痕实验和Transwel侵袭实验检测下调δ-Catenin表达对人肺腺癌A549迁移及侵袭的影响,并检测WNT通路相关蛋白的表达。结果转染si-δ-Catenin 24h、48h及72h后,A549细胞中δ-Catenin表达水平下降(P0.01)。A549细胞穿膜细胞数si-δ-Catenin组显著低于NC组,降低δ-Catenin表达水平能够降低A549细胞的侵袭能力。si-δ-Catenin组A549细胞迁移能力明显低于NC组(P0.01)。结论沉默δ-Catenin表达抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力,δ-Catenin有望成为肺腺癌基因治疗的潜在靶点。     

RAB5A反义RNA对人肺腺癌细胞系侵袭转移影响的体外研究

目的　已知RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌恶性表型形成相关,本研究在此基础上进一步探 讨该基因过表达在人肺腺癌恶性演进中的作用。　方法　将RAB5A反义表达载体稳定转染入高浸润人肺腺癌细 胞系L18和高转移人肺腺癌细胞系95D中,采用重组基底膜侵袭、与基底膜成分黏附能力测定、趋化运动能力测 定、明胶酶分泌与活性检测等体外实验方法观察转染前后细胞生物学特性的改变。　结果　RAB5A反义RNA稳 定转染后L18细胞趋化运动和侵袭基底膜能力显著降低(P<0.05),明胶酶活性检测发现转染后细胞MMP 2的分 泌能力明显减弱;稳定转染后95D细胞趋化运动和侵袭基膜能力显著降低(P<0.05)。　结论　体外实验显示, RAB5A基因过表达对肿瘤细胞的趋化运动能力和侵袭重组基底膜能力起重要作用,进一步提示RAB5A基因过表 达在人肺腺癌的侵袭转移过程中发挥一定作用。     

siRNA特异性沉默septin 2基因抑制大肠癌LoVo细胞迁移

目的:检测新型骨架蛋白septin2在不同转移能力的人结直肠癌细胞株中的表达水平,探究其在结直肠癌细胞迁移中的作用。方法:采用实时荧光定量RT-PCR及Westernblotting检测septin2基因及其蛋白在高转移潜能细胞株LoVo和低转移潜能癌细胞株HT-29、SW480、HCT-116中的表达;用siRNA干扰方法沉默高表达的septin2基因,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效率,免疫荧光共聚焦实验观测干扰前后septin2蛋白表达的变化,划痕实验检测干扰前后细胞的迁移能力。结果:septin2在LoVo细胞的表达水平显著高于HT-29、SW480及HCT-116细胞(P<0.05)。沉默septin2基因后,LoVo细胞septin2mRNA表达降低(P<0.05);septin2与纤维状肌动蛋白(F-actin)存在共表达;F-actin表达减弱,应力纤维减少,片状伪足细而短;细胞迁移能力减弱。结论:septin2基因在LoVo细胞高表达,干扰其表达能导致细胞骨架重构,从而降低细胞迁移能力。     

沉默Ku70后人耐药肺癌细胞凋亡基因组表达变化及临床意义

目的:探讨沉默Ku70(siRNA-Ku70)后人耐药肺腺癌(A549DDP)细胞系凋亡基因组表达变化及临床意义。方法:应用RT-PCR方法比较Ku70mRNA在人肺腺癌A549细胞系及其耐药肺癌A549DDP细胞系的表达水平;应用PCR-Array方法比较沉默Ku70前后A549DDP细胞凋亡基因组表达水平变化。结果:Ku70mRNA在A549DDP细胞系表达水平显著高于A549细胞系;沉默Ku70后A549DDP细胞促凋亡基因组中BAX、TP53、TP73等呈高表达,抗凋亡基因BFAR及具有双向调节功能的凋亡基因肿瘤坏死因子受体家族成员(TNFRSF 1A)呈低表达(P0.05)。结论:Ku70mRNA在人耐药非小细胞肺癌细胞系呈现高表达;提示Ku70参与非小细胞肺癌耐药的发生;封闭Ku70可改变耐药肺癌细胞的促/抗凋亡基因组的表达呈促细胞凋亡效应,提示Ku70可能作为上游调控点参与调控部分促/抗凋亡基因组的表达,通过促凋亡表达效应而逆转细胞耐药。     

神经节苷脂GD2可作为肺癌干细胞一个潜在的候选标志物

目的 探索神经节苷脂GD2作为肺癌干细胞(LCSCs)标志物的可行性。方法 用成球培养的方式在体外富集肺癌细胞系的肿瘤干细胞(CSCs);用实时定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测LCSCs中干性相关基因以及GD3合成酶(GD3S)的表达；用流式细胞测量术检测肺腺癌细胞系A549中GD2及其他干性表型的表达；用CCK8法检测细胞增殖；用Transwell小室法和细胞划痕愈合实验检测细胞的体外侵袭和迁移；用肺癌移植瘤模型比较细胞系A549中不同亚群的致瘤性。结果 体外成球培养能够成功富集到A549细胞的肿瘤干细胞，贴壁培养时，GD2⁺细胞的比例为0.57%,成球培养后GD2⁺细胞比例能够上升至20.4%。与GD2^- A549细胞相比，GD2⁺ A549细胞的体外增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)均显著提高。GD2与另外两种肺癌干细胞表型之间有密切联系，其表达水平与CD44(P<0.01)及EpCAM(P<0.001)的表达呈正相关。体内的结果...     

在不同转移潜能人肺癌细胞移植瘤中血管性血友病因子的表达

目的探讨血管性血友病因子(vWF)在不同转移潜能人肺癌裸鼠移植瘤中的表达。方法体外培养低转移及高转移人肺癌细胞系A549和D95,Transwell小室法检测肿瘤细胞体外侵袭和迁移能力;10只Balb/c裸小鼠随机分为A549组和D95组(n=5)。0. 2 mL两种肿瘤细胞悬液(浓度约为1×10^7/mL)分别皮下注入A549组及D95组裸小鼠左上肢,构建人肺癌裸鼠移植瘤模型。观察vWF对裸小鼠移植瘤生长的影响;ELISA检测外周血vWF水平;免疫组化检测移植瘤vWF蛋白表达;免疫印记检测移植瘤、肺和肝vWF蛋白表达。结果 D95肺癌细胞体外侵袭和迁移细胞数多于A549肺癌细胞(P<0. 05);D95组裸小鼠于皮下接种后第5天全部出现瘤结节,A549组于第7天全部出现;与A549组相比,D95组裸小鼠移植瘤质量及肺转移瘤结节数显著增多(P<0. 05),D95组移植瘤、肺及肝组织vWF蛋白的表达显著高于A549组(P<0. 01)。结论 vWF与人肺癌细胞的转移潜能密切相关。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

HMGB2对肺腺癌细胞周期和增殖的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B2(HMGB2)对肺腺癌细胞周期和增殖的影响。方法:从Cancer RNA-Seq Nexus (CRN)数据库分析肺腺癌组织HMGB2表达情况;从OncoLnc数据库分析HMGB2与肺腺癌患者预后的相关性;从肿瘤单细胞数据库(CancerSEA)分析HMGB2与肺腺癌细胞14种功能状态的相关性;利用siRNA技术下调人肺腺癌A549细胞中HMGB2表达,通过real-time PCR和Western blot验证沉默效果,CCK8和EdU实验检测细胞的增殖。结果:HMGB2在肺腺癌中高表达;HMGB2高表达组肺腺癌患者的总生存期明显低于HMGB2低表达患者(log-rank检验P=0.017 3);HMGB2表达与肺腺癌细胞周期和增殖呈正相关;敲减HMGB2表达后A549细胞的活力和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论:HMGB2的表达与肺腺癌细胞周期和增殖显著正相关,可以作为潜在的评估肺腺癌患者预后的标志物和治疗靶标。     

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

 目的: 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法: 利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果: Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论: miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。     

ALYREF对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的 探讨ALYREF在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 利用TCGA数据库分析ALYREF在肺腺癌中的表达及其与预后的关系;应用免疫组化验证肺腺癌及其癌旁组织中ALYREF的表达水平。构建沉默ALYREF的A549和H1299稳转细胞株;通过RTCA和克隆形成实验检测细胞增殖,采用Transwell实验评估细胞迁移,运用Western blot检测增殖、迁移及EMT相关蛋白的表达水平。RNA-seq测序沉默ALYREF的A549细胞及对照细胞,进行GO/KEGG通路富集分析,分析ALYREF可能参与的功能通路,并通过功能回复实验进行验证。结果 TCGA数据库分析结果显示：ALYREF在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.001);高表达ALYREF患者的总生存期(overall survival, OS)更短(P<0.05)。沉默ALYREF可以抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和EMT进程。RNA-seq测序显示：差异表达基因在TGF-β通路富集最明...     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.