联合应用p38MAPK抑制剂对降低结肠癌阿霉素耐药性的影响

目的:探讨p38 MAPK抑制剂通过Akt(蛋白激酶B)有关的信号途径对结肠癌细胞阿霉素(Doxorubicin)化疗敏感性的影响.方法:应用阿霉素(Dox)和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580及两者联合应用去处理结肠癌HCT-116细胞株.采用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测化疗药物对肿瘤细胞的生存抑制率,Western blot蛋白免疫印迹技术检测化疗药物处理后癌细胞Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果:MTT显示阿霉素和抑制剂SB203580对结肠癌细胞均有抑制作用(26.60%,33.87%),后者大于前者,两者相同用量联合后癌细胞抑制率更明显(56.04%).Western blot显带说明阿霉素处理组较联合组的Akt表达水平并无明显差异,而磷酸化的Akt水平较SB203580组和联合组显著升高.亦即抑制剂组和联合组方案可降低结肠癌细胞磷酸化Akt的表达水平.结论:p38 MAPK抑制剂SB203580可能通过阻断P13K/Akt信号途径或其他有关Akt的通路以提高结肠癌细胞阿霉素化疗的敏感性.     

p38MAPK信号通路的抑制减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法心肌细胞H9C2分为对照组(Con组)、缺氧复氧组(H/R组)、p38MAPK信号通路抑制剂SB203580组(SB203580组),Con组细胞正常培养,H/R组、SB203580组进行缺氧复氧处理,SB203580组细胞在缺氧前用p38MAPK信号通路抑制剂SB203580预处理24 h。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用硫代巴比妥酸比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot检测细胞中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 H/R组、SB203580组细胞存活率低于Con组,凋亡率高于Con组,细胞中MDA、ROS含量高于Con组,培养液上清中LDH高于Con组,细胞中SOD含量低于Con组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平高于Con组。SB203580组细胞存活率高于H/R组,凋亡率低于H/R组,细胞中MDA、ROS含量低于H/R组,培养液上清中LDH低于H/R组,细胞中SOD含量高于H/R组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平低于H/R组。结论 p38MAPK信号通路抑制剂能够减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡和氧化损伤。     

硫化氢在外源性SB203580预处理人卵巢癌细胞增殖与凋亡中的作用

目的探讨硫氢化钠(Na HS,H2S供体)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对人卵巢癌细胞(SKOV3细胞株)增殖与凋亡的调控作用。方法体外培养人卵巢癌细胞,随机分为正常对照组、Na HS (0. 01 mol/L)组、SB203580(0. 1 mol/L)组、Na HS联合SB203580组,每组均经药物干预处理48 h后收集细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测,细胞周期分布与细胞凋亡率均采用流式细胞术检测。结果 (1)与正常对照组比较,Na HS组、SB203580组、Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率均显著升高,G1期细胞比例均明显增加,S期细胞均明显减少,且细胞凋亡率均明显增加,差异有统计学意义(均P0. 01)。(2)SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率、细胞周期各时相分布、细胞凋亡率均与Na HS组比较差异无统计学意义(P0. 05),而与Na HS组比较,Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率明显增加,G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少,且细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(均P0. 01)。(3)与SB203580组相比,Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率明显增加,G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少,且细胞凋亡率显著增高,差异有统计学意义(均P0. 01)。结论 H2S可能通过抑制p38MAPK信号通路抑制人卵巢癌细胞的增殖,促进人卵巢癌细胞凋亡,且H2S可协同SB203580调节人卵巢癌细胞的增殖与凋亡。     

P38MAPK磷酸化对HepG2细胞耐药的影响及其意义

目的 探讨p38MAPK磷酸化对HepG2细胞耐药的影响及其意义.方法 采用浓度递增法,建立动态HepG2/顺铂(CDDP)耐药模型,Western blot检测磷酸化p38的表达;予以p38MAPK特异性抑制剂SB203580分别处理24、48、72 h后,流式细胞仪动态分析HepG2/CDDP耐药细胞周期、四甲基偶氮唑盐法检测顺铂对HepG2/CDDP耐药细胞的半数药物抑制浓度(IC50)、Western blot检测HepG2/CDDP耐药细胞凋亡分子Bcl-2、Bax及P-gp蛋白的表达.动态耐药模型磷酸化P38的检测行单因素方差分析; SB203580处理后计量资料行3×3析因设计方差分析,率的比较采用x2检验.结果 成功建立HepG2/CDDP耐药细胞株,其对CDDP的IG50值与对照HepG2细胞差异具有统计学意义(t=99.30,P<0.01);随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,P38MAPK活化水平逐渐增强(F=69.39,P<0.01).P38MAPK特异性抑制剂SB203580可逐渐降低HepG2/CDDP对顺铂的IC50值(F=2350,P<0.01)、G0/Gl期细胞比例(x2=520,P<0.01)、Bcl-2/Bax表达比值(F=83.8,P<0.01)及细胞膜药物转运相关蛋白P-gP的表达(F=107,P<0.01).结论 P38活化水平随着肝癌耐药细胞株耐药表型的增强而逐渐升高;抑制P38的活化可有效逆转肝癌HepG2/CDDP耐药细胞株的耐药性.     

复方接骨中药介导MAPK信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化

目的探讨复方接骨中药介导MAPK信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的促进作用。方法取健康雄性SD大鼠60只,随机平均分为实验组和对照组,实验组灌喂复方接骨中药煎剂,对照组灌喂等体积自来水,处理10 d后提取各组大鼠血清。分离BMSCs,利用体积分数为0.1的含药血清及非含药血清单独处理BMSCs 24、48、72 h及联合10μmol/L p38MAPK抑制剂SB203580处理BMSCs 72 h后,MTT检测细胞增殖;RT-PCR及Western印迹检测两组血清单独处理及联合SB203580处理BMSCs 72 h后成骨细胞分化标记基因ALP、BGP、BMP-2的表达;Western印迹检测两组血清处理BMSCs 72 h p38蛋白表达及磷酸化。结果含药血清处理24、48 h,细胞OD值与非含药血清组及对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),第72小时含药血清组细胞OD值显著高于对照组及非含药血清组(P<0.01),非含药血清组细胞OD值与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。两组血清处理72 h后,含药血清处理组ALP、BGP、BMP-2表达及p38磷酸化明显高于对照组及非含药血清组(P<0.01),非含药血清组ALP、BGP、BMP-2表达及p38磷酸化与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),p38总蛋白表达三组差异无统计学意义(P>0.05)。SB203580联合两组血清处理72 h后,非含药血清+SB203580组与SB203580组细胞增殖及ALP、BGP、BMP-2表达差异无统计学意义(P>0.05),明显低于对照组(P<0.01),含药血清+SB203580组细胞增殖及ALP、BGP、BMP-2表达显著高于SB203580组(P<0.01),与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方接骨中药可能通过促进MAPK信号通路促进BMSCs的增殖及成骨分化。     

Preptin对成骨细胞结缔组织生长因子表达的影响及其机制研究

目的 探讨Preptin对成骨细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响及其机制.方法采用人重组preptin干预人原代成骨细胞,CTGF蛋白水平用Western印迹法检测.丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化水平用Western印迹法检测.在preptin干预前用细胞信号阻断剂(PD98059、SP600125或SB203580)预处理阻断人成骨细胞MAPK信号转导,以分析preptin诱导人成骨细胞CTGF表达的作用机制.结果 Preptin可呈时间和剂量依赖性地促进人成骨细胞CTGF的分泌,并且preptin可诱导人成骨细胞ERK的活化,对p38MAPK或JNK无激活作用;人成骨细胞用ERK抑制剂PD98059预处理可使preptin诱导的CTGF分泌降低.结论Preptin增加CTGF的表达,并通过ERK/MAPK信号途径来介导.     

吡非尼酮抑制转化生长因子β1诱导肺成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的:探讨吡非尼酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞胶原合成的影响及机制。方法 :以人胚胎肺成纤维MRC-5细胞为研究对象,用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号抑制剂SB203580和吡非尼酮处理TGF-β1诱导的肺成纤维细胞,MTT检测细胞增殖, Western blot检测细胞中Ⅲ型胶原酶(ColⅢ)、I型胶原酶(ColⅠ)蛋白表达和p38MAPK磷酸化水平。结果:TGF-β1诱导处理后的肺成纤维细胞增殖能力升高,细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化水平升高。吡非尼酮处理可以降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖能力,减少细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化蛋白表达。p38MAPK信号抑制剂SB203580处理具有协同吡非尼酮降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和表达蛋白ColⅢ、ColⅠ及p38MAPK磷酸化水平的作用。结论:吡非尼酮通过抑制p38MAPK信号,从而抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞胶原合成。     

Preptin对人成骨细胞增殖和分化的影响及机制研究

目的 探讨preptin对人成骨细胞增殖和分化的影响及其信号途径.方法 体外培养人成骨细胞,用10-10、10-9、10-8和10-7mol/L preptin干预24 h,以[3H]脱氧胸腺嘧啶苷掺入法分析细胞增殖,用分光光度计法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性判断细胞分化程度.Western印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平.并在preptin干预前以ERK抑制剂(PD98059)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)预处理,观察preptin诱导人成骨细胞增殖和分化的途径.结果 Preptin剂量依赖地增加人成骨细胞的增殖和ALP活性,10-9mol/L浓度时达最大效应(均P<0.01).Preptin刺激人成骨细胞ERK的磷酸化,对p38MAPK和JNK无作用.PD98059阻断preptin刺激的成骨细胞增殖及ALP活性增加(均P<0.05),而SP600125和SB203580无此效应.结论 Preptin通过ERK途径促进人成骨细胞的增殖和分化.     

MS-275抑制肝癌细胞HepG2增殖及其相关信号传导机制的体外实验研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂MS-275诱导人肝癌细胞株HepG2细胞周期阻滞作用,并对其信号传导机制进行初步探讨。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2;应用MTT比色法观察MS-275对HepG2的生长抑制作用,应用流式细胞仪检测MS-275对细胞周期的影响;Western印迹分析细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p-p38MAPK三种蛋白表达的差异。结果HDAC抑制剂MS-275能抑制肝癌细胞生长,具有时间和剂量的依赖性。可以引起细胞周期G0-G1期阻滞。MS-275可以使HepG2细胞p21蛋白表达提高,CyclinD1蛋白表达降低,在SB203580组两蛋白的表达又恢复到对照组水平。p-p38MAPK蛋白在两组表达均提高。结论MS-275能诱导肝癌细胞株的细胞周期阻滞,这种作用可能是通过p38MAPK信号传导途径介导的,与下调CyclinD1的表达、上调p21的表达有关。     

特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580对小鼠感染肺炎衣原体后细胞因子变化的影响

目的 探讨特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对小鼠感染肺炎衣原体后细胞因子变化.方法 使用TLR4基因缺失(C3H/HeJ)小鼠90只,随机分为正常组、感染组和SB203580组,每组再分别按0、1、4、7、14 d分成5小组.正常组鼻内接种二磷酸蔗糖缓冲液,感染组鼻内接种肺炎衣原体约4.0×106 IFU/ml,SB203580组在感染肺炎衣原体后腹腔注射SB203580(100 mg/kg).分别在接种后第0天,第1天、第4天、第7天、第14天预定的时间处死小鼠,取肺组织分别采用Western blot法测p38 MAPK蛋白的表达,用酶联免疫吸附法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)的表达,同时观察各组小鼠肺组织病理变化.结果 感染组肺组织中TNF-α、IL-1的表达水平在各时间点均高于正常组(P＜0.05或P＜0.01),并在第4天出现高峰,14天以后开始下降.SB203580组肺组织中细胞因子TNF-α、IL-1的表达水平在各时间点均低于感染组(P＜0.05或P＜0.01).同时,SB203580组p38 MAPK蛋白表达强度弱于感染组.结论 p38 MAPK参与小鼠感染肺炎衣原体的炎症反应,特异性p38 MAPK抑制剂SB203580能抑制小鼠感染肺炎衣原体后的细胞因子表达,减轻炎症反应.     

脂联素调控人成骨细胞OPG/RANKL表达的信号转导机制

目的 研究脂联素调控人成骨细胞护骨素(OPG)和NF-кB受体活化凶子配体(RANKL)表达的作用机制.方法 人成骨细胞OPG和RANKL mRNA的表达以实时PCR检测,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化水平用Western印迹法检测.廊用小分子RNA干扰技术(siRNA)阻断脂联素受体(AdR)表达,并以p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)干预,以观察脂联素对人成骨细胞OPG/RANKL作用的调节机制.结果 用siRNA沉默AdRl的表达可消除脂联素促进人成骨细胞RANKL表达和抑制OPG表达的作用;脂联素干预前予SB203580阻断p38 MAPK后,也可消除脂联素对成骨细胞RANKL和OPG的作用,而SP600125并无作用.结论 在人成骨细胞中,脂联素通过AdR1/p38 MARK途径促进RANKL表达和抑制OPG的表达.     

SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路对α7尼古丁受体蛋白水平的影响

目的研究p38 MAPK信号传导通路激动及抑制对SH-SY5Y细胞α7神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白水平的影响并探讨受体蛋白与p38通路之间的关系。方法分别用p38 MAPK激活剂Anisomycin和p38 MAPK阻断剂SB203580激动和阻断SH-SY5Y细胞p38 MAPK通路蛋白的活化及其表达,Western印迹方法检测α7 n AChR蛋白水平。结果细胞经Anisomycin处理后,p38 MAPK蛋白表达不变,p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平升高了71%(P<0.01),同时细胞α7 n AChR蛋白表达升高了80%(P<0.01).细胞经SB203580处理后,p38 MAPK蛋白表达不变,p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平降低了62%(P<0.01),提示p38 MAPK信号通路被抑制,同时细胞α7 n AChR蛋白表达降低了80%(P<0.01)。结论 Anisomycin能激动SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路,引起α7 n AChR蛋白表达明显增强;SB203580能阻断SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路,引起α7 n AChR蛋白水平显著降低。     

联合应用活性氧抑制剂对降低胃癌顺铂耐药性的影响

目的探讨活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)通过Akt(蛋白激酶B)有关的信号途径在胃癌细胞中对顺铂化疗敏感性的影响。方法应用化疗药物顺铂以一系列梯度浓度处理对数期生长的胃癌BGC-823细胞,通过MIT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,应用顺铂和活性氧抑制剂NAC单独及联合应用处理胃癌BGC细胞后测定细胞的活性氧水平以及Akt及磷酸化Akt的表达水平。结果顺铂对胃癌细胞有明显的抑制作用,呈浓度依赖性。单用顺铂组活性氧水平高于联合用药组;顺铂联合应用活性氧抑制剂NAC组与单用顺铂或活性氧抑制剂组的Akt表达无统计学意义(P>0.05),而磷酸化Akt的表达下调(P<0.05)。结论活性氧抑制剂NAC可能通过阻断P13K/Akt信号途径或其他有关Akt的信号通路以提高癌细胞对顺铂化疗的敏感性。     

硫化氢在外源性SB203580预处理人卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(Na HS)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及可能机制。方法体外培养SKOV3细胞,随机分为正常对照组、Na HS组、SB203580组、Na HS+SB203580组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组SKOV3细胞增殖,流式细胞术检测各组SKOV3细胞周期分布,Western印迹检测各组SKOV3细胞中P-p38MAPK蛋白表达。结果与正常对照组比较,Na HS组SKOV3细胞增殖明显增加,G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,且p-p38MAPK表达明显增加(均P<0.01);SB203580组、Na HS+SB203580组SKOV3细胞增殖均明显减少,G1期细胞均明显增加,S期细胞均明显减少,且p-p38MAPK表达均明显降低(均P<0.01)。而与Na HS组比较,SB203580组、Na HS+SB203580组SKOV3细胞增殖均明显减少,G1期细胞均明显增加,S期细胞均明显减少,且p-p38MAPK表达均明显降低(均P<0.01);与SB203580组比较,Na HS+SB203580组SKOV3细胞的增殖明显增加,G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,且p-p38MAPK表达明显增加(均P<0.01)。结论 H2S可能通过活化p38MAPK信号通路促进SKOV3细胞增殖。     

山豆根通过MAPK信号通路调节乳腺癌细胞增殖、凋亡

目的 探究山豆根对乳腺癌细胞生长的影响，并从调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的角度探讨其可能的机制。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞，采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测山豆根提取液对MCF-7细胞增殖的影响；并设置对照组、20 mg/ml山豆根组、SP600125(JNK抑制剂)+山豆根组、PD98059(ERK1/2抑制剂)+山豆根组、SB203580(p38MAPK抑制剂)+山豆根组(20 mg/ml山豆根+10μmol/L抑制剂),分别采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖与凋亡情况，Western印迹检测MAPKs通路相关调控蛋白[c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、p38 MAPK及其磷酸化蛋白]的表达。结果 不同浓度的山豆根提取液呈浓度依赖性地抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的生长；与对照组相比，20 mg/ml山豆根组细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P<0.05);与20 mg/ml山豆根组相比，联用相应的抑制剂后，细胞增殖抑制率、凋亡率明显降低(P<0.05);且p-JNK/...     

P38 MAPK信号通路在金黄色葡萄球菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡模型,探讨p38 MAPK信号转导通路在此凋亡过程中的作用。方法采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测金黄色葡萄球菌感染不同时间时U937细胞的凋亡率;利用Western blotting检测p38MAPK的磷酸化水平;预先用不同浓度的SB203580(p38 MAPK途径抑制剂)处理U937细胞,采用Annexin V FITC/PI双染分析感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果金黄色葡萄球菌可以诱导U937细胞凋亡,并且随着感染时间的延长,细胞凋亡率也逐渐增高。p38 MAPK在加入金黄色葡萄球菌15min后表达明显增高,30min时达高峰,随后,逐渐降低。总的p38 MAPK水平在整个实验期间内几乎无变化。用SB203580抑制p38 MAPK通路,引起抑制剂浓度依赖性的细胞凋亡率降低。结论金黄色葡萄球菌呈时间依赖性诱导U937细胞凋亡,p38 MAPK信号转导通路的激活在金黄色葡萄球菌诱导的U937细胞凋亡过程中起到了重要的作用。     

p38 MAPK在阿尔茨海默病患者中的表达及作用机制

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在阿尔茨海默病(AD)患者中的表达及作用机制。方法收集82例AD患者及20例健康志愿者外周血,采用Western印迹检测p38 MAPK表达及激活情况;将PC12细胞随机分为正常组、模型组、SB203580组、模型组及SB203580组采用20μmol/L的β淀粉样蛋白(Aβ25~35)构建PC12细胞损伤模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI流式双染法检测细胞凋亡,紫外分光光度法检测细胞中天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3活性,Western印迹检测B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、酶切Caspase 3蛋白表达。结果 p38MAPK在AD患者及健康志愿者外周血淋巴细胞中的表达量差异无统计学意义(P>0.05);而pp38 MAPK在AD患者外周血淋巴细胞中的表达量显著高于健康志愿者(P<0.01)。与正常组比较,模型组细胞活力降低,细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、Caspase3活性均显著提高,Bax、p53、酶切Caspase3表达量上调,Bcl-2表达量下调(均P<0.01)。与模型组比较,SB203580组细胞活力上升,细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、Caspase 3活性均显著降低,Bax、p53、酶切Caspase 3表达量上调,Bcl-2表达量下调(均P<0.01)。结论pp38 MAPK在AD患者外周血中高表达,pp38 MAPK抑制剂SB203580能通过调控细胞凋亡相关蛋白表达抵抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡。     

p38蛋白激酶抑制剂SB203580对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)抑制剂SB203580对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用。方法健康雄性SD大鼠60只,随机均分为3组:假手术组、重症胰腺炎组(模型组)、p38MAPK抑制剂SB203580+重症胰腺炎组(抑制剂组),12 h后取左肺下叶测组织湿/干重比,用Western印迹法检测右肺上叶环氧合酶(COX)-2、基质金属蛋白酶(MMP)9、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和磷酸化p38(p-p38)蛋白的表达,右肺下叶行病理学观察。结果与假手术组比较,模型组肺组织湿/干重比明显增加(P<0.05),肺组织p-p38、i NOS、MMP9、COX-2蛋白表达明显增高(P<0.05),与模型组比较,抑制剂组肺组织湿/干重比明显降低(P<0.05),p-p38、i NOS、MMP9、COX-2蛋白表达量明显(P<0.05)。结论 P38抑制剂SB203580通过减轻肺组织中p-p38、MMP9、i NOS和COX-2的表达,从而减轻肺组织的损伤。     

应用P38抑制剂降低结肠癌细胞AKT的表达

目的探讨P38抑制剂SB203580对顺铂杀伤作用及耐药性产生的影响。方法以结肠癌细胞HCT-116为实验对象。设定P38MAPK特异性抑制剂SB203580的浓度20 mg/L、顺铂的浓度100μmol/L,两者合用处理结肠癌HCT-116细胞株。MTT法和流式细胞术检测顺铂(Ⅰ组)和SB203580+顺铂(Ⅱ组)对结肠癌细胞株HCT-116生长及凋亡的影响,RT-PCR检测顺铂和SB203580+顺铂在转录水平上AKT的表达。结果顺铂与SB203580联合后对HCT-116细胞增殖的抑制及致凋亡作用显著增强;顺铂与SB203580联合后可以显著降低AKT的表达水平。结论 SB203580提高顺铂对结肠癌细胞株HCT-116的杀伤效果及降低顺铂耐药性的产生。     

吡格列酮对L6肌细胞脂联素和葡萄糖转运蛋白4表达的影响及其机制研究

建立棕榈酸诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型后,以吡格列酮、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580进行干预.应用Western 印迹法检测脂联素、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达和JNK、p38MAPK磷酸化水平.结果显示,吡格列酮可显著增加胰岛素抵抗状态下L6细胞p38MAPK磷酸化、脂联素和GLUT4蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),降低JNK磷酸化水平(P＜0.01).阻断p38MAPK信号通路后,吡格列酮上调L6细胞GULT4蛋白表达的效应显著降低(P＜0.01),而阻断JNK信号通路却无显著影响(P＞0.05).