抗人肝癌单克隆抗体的制备初步鉴定和导向研究

本文以人肝癌细胞株SMMC-7721免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与鼠Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合筛选获得1株抗人肝癌单克隆抗体,SM-5(IgG1),分子量约150 000kD。 纯化的抗人肝癌单克隆抗体SM-5,与多种人肝癌细胞株SMMC-7721,7404,     

抗人肝癌单克隆抗体HL2的制备及鉴定

用肝癌细胞株QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721以贯序法免疫BALB/c小鼠,获得一株分泌肝癌单抗的杂交窟株HL_2,其染色体数目为97—105。单抗HL_2系IgG_2b亚类。吸收实验及阻断实验证明HL_2抗原与CEA、AFP、HBsAg、HBcAg及HBeAg无免疫同源性。ABC法和ELISA法说明单抗HL_2与四株肝癌细胞、六例肝癌组织均呈明确阳性反应,除与SGC-7901、H_(128)、K_(562)、Hela细胞株及部分胚胎肝脏,胚胎结肠有较弱性反应外,与肝癌旁组织、正常肝脏、其它肿瘤组织和细胞株、二种正常人细胞及其它胚胎组织无反应。显示了单抗HL_2的特异性较好、阳性率较高,是一个有应用前景的单抗。     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

作者应用手术切除的新鲜肝癌标本制备细胞是液,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,共融合10次,10×96孔,其中1.778孔有杂交瘤生长,平均融合率为46.3％。抗体检测采用ABC免疫组织化学技术,检出与肝癌组织相关性较明     

分泌高效价抗-HBs单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为了进行肝癌的病因学研究,我们研制了抗HBs单克隆抗体。用HBsAg免疫BALB/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞在PEG作用下融合,经7次克隆化培养,获得三株能分泌抗-HBsMcAb的杂交瘤3G8、3H_9和2C_2。三个瘤株分泌的McAb在培养上清及腹水     

分泌抗H_(815)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

制备兔抗正常615小鼠肝癌细胞免疫血清,以此处理615小鼠肝癌细胞用处理过的瘤细胞免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0融合,以间接免疫荧光法和细胞ELISA二种方法检测,建立两株分泌抗615小鼠肝癌细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615小鼠的肝、脾、肺、肾、脑、心肌、横纹肌、胸腺组织细胞和多     

抗人肝细胞肝癌单抗的产生及体内定位研究

本文用临床肝癌手术标本,制备成细胞悬液,三次免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC法筛选单抗(肿瘤组织低温石蜡切片)。获得两株选择性较好的杂交癌-HH10、HD_2。抗体亚类为IgG_1。1.组织化学染色;肝癌阳性例数HH10 37/50;HD_(12)30/50。     

Sorcin在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达及定位

目的：研究抗药蛋白sorcin（又称可溶性抗药相关蛋白）在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F/Hca-cP中的定位及表达差异,进一步探讨其在肿瘤淋巴道转移中的作用。方法：以小鼠腹水肝癌高淋巴道转移株Hca-F和小鼠腹水肝癌低淋巴道转移株Hca-P为研究对象,采用实时定量PCR技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中基因水平的表达差异;采用Western免疫印迹技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中蛋白水平的表达差异;采用免疫荧光技术检测sorcin在细胞中的定位情况;采用细胞计数试剂盒-8检测肿瘤细胞的增殖能力;应用Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。结果：Hca-F细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力都明显高于Hca-P细胞;sorcin在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的1.5和1.8倍;sorcin在两种小鼠腹水型肝癌细胞株中的定位主要位于细胞质。结论： sorcin在Hca-F中呈高表达,主要定位于细胞质,可能在其增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,为进一步探讨其作用机制和功能奠定了基础。     

榄香烯处理瘤苗抗原致敏的树突状细胞的抗肿瘤效应研究

本文采用 β 榄香烯处理小鼠H2 2肝癌亚系HCa F ,提取榄香烯瘤苗可溶性上清作为粗制肿瘤抗原 ,制备抗原冲击(pulsed)的树突状细胞 ,研究其抗瘤作用及机制。结果表明榄香烯瘤苗抗原冲击的树突状细胞可诱导对HCa F瘤株的MHC非限制性免疫应答 ,继承性转输后对HCa F瘤株攻击有免疫保护效应 ;体外可激发脾不粘附细胞活化增殖和加强杀瘤细胞活性。     

狂犬病毒单克隆抗体的杂瘤细胞系的建立

《病毒学报》1985,1(2)105朱家鸿、曾毅报道,将感染狂犬病毒aG株(我国狂犬疫苗生产毒种)后发病的BALB/c乳鼠脑内病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞S_P2/0融合。融合率为95.7％(401/419),阳性克隆占26.8％,经克隆化后获得3株杂交瘤细胞,用免疫荧光、BLISA和双向免疫扩散试验证明,该3株细胞分泌抗狂犬病毒     

应用体外免疫的建立小鼠脾细胞抗大鼠肝癌杂交瘤细胞株

本文应用体外免疫方法,研究抗肝癌细胞抗体的产生,在胸腺细胞条件培养液存在下,用完整的、活的肝癌细胞,在体外培养中免疫BALB/c小鼠的脾细胞,结果发现小鼠脾细胞对活的肝癌细胞产生抗体反应,而对酒精处理的肝癌细胞不引起抗体反应,当缺乏条件培     

正常肝、肝癌及胎肝铁蛋白及其单克隆抗体

从尸检正常肝组织,原发性肝细胞肝癌及胎肝组织,采用先沉淀,再结晶,最后层析的办法提取纯化其铁蛋白。正常肝铁蛋白溶液里铁锈色,肝癌铁蛋白呈灰黄色,经免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞株Sp 2/0融合得单克隆抗体9株,其中正常肝铁蛋白及一株肝癌铁蛋白抗体与其它铁蛋白作琼脂双扩皆出现一条铁反应阳性的沉淀线,表明两株抗体可能针对一种共同的抗原决定簇。3株胎肝铁蛋白抗体在ELISA中与肝癌铁蛋白均无明确的阳性反应,与正常肝铁蛋白反应也不强,免疫放射检测也得到相似结果。作者认为在铁蛋白免疫放射系统中加入胎肝铁蛋白,有可能改进这种方法的效果。     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

本文报告应用人体手术切除的肝癌新鲜标本制备细胞悬液免疫近交系BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合。抗体检测采用酒精或中性福尔马林固定,石蜡包埋的肝癌组织和癌周肝组织制作复合抗原片,应用ABC免疫组化技术。 本研究共进行了10次融合,计40×96孔,其中1778孔有杂交瘤生长,检出与肝癌相关性较明显者8孔,其中1孔经重复检测证实与抗原片肝组织无交叉,经连续克隆化达100％阳性,该株抗体定名为Ab20,经琼脂双扩测定为小鼠IgM型。用此抗体在常规福尔马林固定、石蜡切片组织进行了相应抗原的免疫组化定位。结果为:肝癌29/35(阳性/总例数,下同),癌旁肝组织 2/24,肝硬化1/11,正常肝组织0/6,11～20周龄胚胎肝0/5,30～40周龄胎儿     

IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价

用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。     

抗血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇的单克隆抗体

<正> 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫BALB/c 小鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞按 Kennett 方法作细胞融合,用有限稀释法克隆化2～3次后,建立一株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(A6-B6),其培养上清经浓缩后作免疫球蛋白亚类签定为 IgM,杂交瘤诱生的小鼠腹水经 SEA 免疫     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研究

以新建立的人肝细胞癌细胞株PUMC-H1及PUMC-H3免疫BALB/c小鼠,利用小鼠B细胞杂交瘤技术,进行融合、克隆及亚克隆,采用酶标、免疫荧光及放免法(以酶标为主,包括新建立的一种检测抗细胞抗原单克隆抗体的ELISA法),筛选出一批抗人肝癌细胞单     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高特异性和高亲和力的抗人肝细胞肝癌(HCC)的单克隆抗体(MAb),为肝癌的靶向诊断及治疗提供依据.方法 用人肝细胞肝癌细胞株HepG-2经"尾静脉.脾脏联合方法"免疫BALB/c小鼠.取其脾脏细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,经ABC免疫组化初筛抗体、有限稀释法亚克隆化、染色体分析、免疫组化鉴定抗体特异性、共聚焦显微镜扫描技术(LSCM)进行组织定位、ELISA分析鉴定抗体的亚型及荷人肝癌裸鼠牛物分布等进一步鉴定其生物学特性.结果 (1)获得一株分泌抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的杂交瘤;该抗体与肝癌组织结合的特异性高达98.5%(67/68);(2)注射131I-MAb后瘤部位放射性分布有逐渐增加的趋势,血液、肝脏、肾脏和肺脏放射性有逐渐减低的趋势,72 h肿瘤/血液和肿瘤,肝脏比值分别为15.76±3.28和7.23±1.70.结论 成功制备抗人肝细胞肝癌的单克隆抗体,具有较好的肝癌特异性、靶向性,对原发性肝癌有潜在的诊断及治疗作用.     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高特异性和高亲和力的抗人肝细胞肝癌（HCC）的单克隆抗体（MAb）,为肝癌的靶向诊断及治疗提供依据.方法 用人肝细胞肝癌细胞株HepG-2经＂尾静脉.脾脏联合方法＂免疫BALB/c小鼠.取其脾脏细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,经ABC免疫组化初筛抗体、有限稀释法亚克隆化、染色体分析、免疫组化鉴定抗体特异性、共聚焦显微镜扫描技术（LSCM）进行组织定位、ELISA分析鉴定抗体的亚型及荷人肝癌裸鼠牛物分布等进一步鉴定其生物学特性.结果 （1）获得一株分泌抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的杂交瘤;该抗体与肝癌组织结合的特异性高达98.5%（67/68）;（2）注射131I-MAb后瘤部位放射性分布有逐渐增加的趋势,血液、肝脏、肾脏和肺脏放射性有逐渐减低的趋势,72 h肿瘤/血液和肿瘤,肝脏比值分别为15.76±3.28和7.23±1.70.结论 成功制备抗人肝细胞肝癌的单克隆抗体,具有较好的肝癌特异性、靶向性,对原发性肝癌有潜在的诊断及治疗作用.     

人丙氨酸氨基转移酶(ALT2)的表达、单克隆抗体制备及鉴定

目的:克隆、表达、纯化重组人丙氨酸氨基转移酶(ALT2),以此作为抗原免疫动物获得针对ALT2的单克隆抗体(mAb)株,用于ALT的免疫诊断。方法:通过RT-PCR从肝癌细胞中扩增丙氨酸氨基转移酶(ALT2)基因,并将其克隆至pET-28a表达载体中,带有组氨酸标签的ALT2蛋白经镍亲和层析纯化,纯化的ALT2作为抗原免疫小鼠制备mAb,通过Western blot和ELISA方法测定mAb的亲和力和特异性。结果:利用大肠杆菌成功表达ALT2蛋白,以镍亲和层析纯化获得ALT活性超过10 000 U/L的ALT2目的蛋白,以此蛋白免疫小鼠后得到5株mAb。结论:经过初步筛选获得2株高特异性的mAb,为研制ALT2蛋白定量检测试剂提供了重要工具。     

芒柄花黄素通过TLR4/NF-κB通路抑制肝癌荷瘤小鼠肿瘤免疫逃逸北大核心CSCD

目的:揭示芒柄花黄素对肝癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用不同浓度(50、100、200μg/ml)芒柄花黄素处理人肝癌细胞系HepG2 24 h,CCK-8检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。雄性C57BL/6小鼠皮下接种HepG2细胞(4×105个)建立荷瘤小鼠模型,10/50 mg(/kg·d)芒柄花黄素治疗28 d,计算抑瘤率。qRT-PCR、Western blot检测小鼠肝癌组织和HepG2细胞TLR4和NF-κB p65表达,ELISA检测小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平。结果:芒柄花黄素可提高HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率(P<0.05),降低荷瘤小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平(P<0.05),提高荷瘤小鼠抑瘤率(P<0.05),降低荷瘤小鼠肿瘤组织和HepG2细胞TLR4和细胞核NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:芒柄花黄素通过抑制TLR4/NF-κB通路介导的肿瘤免疫逃逸抑制肝癌发生发展。     

抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定

目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。