多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子／睾丸特异性抗原SP17、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架，按一定连接方式设计、合成新抗原35肽，并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB／C小鼠。结果 在430A固相自动肽合成仪上成功地合成35肽，并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95％以上；免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达1：6000，阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达1：300；小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达50％左右，淋巴细胞分泌的INF－γ和IL－4分别为60、108μg/ml；实验组BALB／c雌鼠妊娠率平均降至60％，每胎产仔数平均降低58％－71％。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫，并使小鼠受孕率下降，为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础。     

应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究

目的：从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据.方法：用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库.经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较.结果：经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性.结论：所得肽段可能是Em18抗原模拟表位.     

一种避孕免疫原的设计、合成及免疫原性研究

目的探讨如何将人滋养层细胞促融合表位模拟肽构建成有效的避孕免疫原。方法选择人滋养层细胞促融合表位模拟肽与一种通用辅助T细胞表位（PADRE）作为骨架,设计、合成多抗原肽（MAP）多肽和线性嵌合肽两种结构免疫原,并分别与等量弗氏佐剂混悬后免疫雌性C57BL／6小鼠,观察体液免疫反应的特点。结果在小鼠的血清和子宫黏膜冲洗液中,MAP多肽均比线性嵌合肽诱发出更高的抗体滴度;同时,经免疫组化法特异性抗体可以特异识别滋养层细胞相关抗原表位。结论辅助T细胞表位引入及增加多肽免疫原结构复杂性可提高其免疫原性,显著增强免疫反应强度。在以模拟表位肽为基础肽苗设计中,MAP结构是一种较好的结构。     

噬菌体展示肽表位的免疫原性研究

目的研究模拟表位TAPDLRP的噬菌体展示肽的免疫原性.方法用我们筛选获得的展示MUC1抗原模拟表位的噬茵体阳性克隆免疫小鼠.以最大OD450值之纯化血清做为一抗行蛋白印迹分析.检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖率.结果3次免疫小鼠后,血清(1:1000)中能检测到较强的MUC1抗体阳性.纯化血清可识别MUC1蛋白.噬菌体展示肽表位可在无佐荆存在情况下,大大促进小鼠的脾淋巴细胞的增殖.结论噬茵体是一种较好的生物载体.该模拟抗原免疫小鼠后能激发体液及细胞免疫应答,具有良好的免疫原性.     

细胞程序性死亡配体1表位肽疫苗的设计及抗肿瘤活性

目前已有多款细胞程序性死亡受体1(PD-1)和其配体（PD-L1）免疫检查点阻断抗体用于临床治疗,但只有部分患者表现出临床反应,因此需要一种替代的肿瘤免疫治疗策略。以PD-L1为靶点的治疗性肿瘤疫苗是一种有意义的尝试。本研究设计了以PD-L1为靶点的表位肽疫苗,然后基于人源化免疫系统（HIS）小鼠模型筛选,具有免疫原性的PD-L1表位肽,进一步研究其抗肿瘤活性。结果显示,设计并筛选得到的PD-L1-B1表位肽疫苗不仅成功诱导了PD-L1特异性的体液免疫和细胞免疫,还表现出抗肿瘤活性。此外,免疫治疗还增加了肿瘤的T淋巴细胞浸润,重塑了肿瘤免疫抑制微环境。综上所述,PD-L1-B1表位肽疫苗表现出强效的抗肿瘤活性,对PD-1/PD-L1阻断不敏感的患者可能是一种有效的替代免疫治疗策略。     

用抗HCV多抗从随机12肽库中筛选抗原表位

目的：用丙型肝炎患者血清中抗丙型肝炎病毒（HCV）抗体从噬菌体随机12肽库中筛选HCV抗原表位。方法：将丙型肝炎患者血清混合,提取纯化的IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增的淘洗过程进行3轮筛选,随机挑取噬菌体克隆用ELISA法检测其特异性,对4个克隆进行测序。并用ELISA法检测噬菌体克隆的诊断价值。结果：3轮筛选的投入产出比逐轮升高,回收率从(4.6×10-4)%增加到(5.3×10-2)%,具有良好的富集效果。对从第3轮洗脱物中挑选出的18个克隆进行结合试验,发现所挑的克隆与丙型肝炎患者的多克隆抗体有较强的结合力。其中4个克隆测序显示为同一克隆（命名为C1）,其外源插入肽为GSMSPYVRWYTP。用C1检测20例丙型肝炎患者血清的检出率为85.0%。结论：成功地用噬菌体12肽库对丙型肝炎患者血清进行了模拟肽筛选,且得到的模拟肽分子C1具有一定的诊断价值。     

基于抗原表位预测的MUC1模拟肽表位筛选

目的:预测粘蛋白1(Mucin1,MUC1)抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位.方法:对MUC1的二级结构及免疫原性进行分析,预测MUC1的抗原表位.利用纯化获得的Ma695抗体筛选噬菌体随机12肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆.结果:MUC1存在有17个潜在的抗原表位区域.经3轮筛选,获得了14个阳性克隆,DNA序列分析并推导出其氨基酸序列:KHYDPFHHRMPQ,QADTARS VALAG,VPSKPDLHVRSI及MTPIHYWNHNRV;4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上.结论:预测MUC1抗原B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能奠定了基础.所得序列KHYDPFHHRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI及MTPIH YWN HNRV能模拟MUC1抗原表位.     

结核分枝杆菌抗原模拟表位肽的筛选及免疫活性鉴定

目的：从噬菌体随机12肽库中筛选结核分枝杆菌模拟抗原表位,并初步研究其免疫活性。方法：以鹿结核阳性血清纯化多克隆抗体IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增过程进行3轮筛选,随机挑取20个单克隆进行特异性鉴定,将筛选后得到的阳性克隆扩增后免疫BALB/c小鼠作为实验组;以TBS为阴性对照组,BCG为阳性对照组,采用间接ELISA方法检测抗体效价,MTT法检测淋巴细胞增殖能力。每组小鼠免疫3周后再鼻腔接种BCG,3周后无菌取左全肺研磨计算肺脏荷菌量,取右全肺制备病理切片观察肺脏病理变化。结果：经三轮筛选后阳性克隆得到富集,ELISA鉴定20个单克隆中有15个阳性克隆阳性率为75%。免疫后实验组小鼠抗体水平高于BCG组(P<0.01)。小鼠脾淋巴细胞增殖实验,经ConA、LPS、PPD刺激后实验组SI值均高于BCG组,但差异无显著性(P>0.05),与TBS组比较差异有显著性(P<0.01)。实验组、BCG组均观察到少量的淋巴细胞浸润,而TBS组肺泡结构消失,组织发生实变。肺脏荷菌量实验显示实验组肺脏荷菌量［(4.080±0.035)log CFU·mg^-1)］ 低于TBS组［（4.360±0.110)log CFU·mg^-1］　(P<0.01),但高于BCG组荷菌量［(3.980±0.023)log CFU·mg^-1］(P>0.05)。结论：成功筛选得到含有结核分枝杆菌抗原模拟表位的阳性克隆,这些阳性克隆能有效诱导小鼠产生比BCG更高的抗体效价和保护效应,对其进行进一步序列测定和功能分析将有助于结核病疫苗的开发。     

应用噬菌体肽库筛选胃癌相关抗原模拟表位

目的 利用噬菌体递呈随机肽库筛选技术,进行胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ模拟表位的研究,方法 应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗胃癌单克隆抗体ＭＧ７Ａｂ,细胞ＥＬＩＳＡ方法检测其活性,以ＭＧ７ｍＡｂ作为筛选分子,生物淘洗噬菌体递呈随机７肽库,经３次淘洗后将筛选所得的噬菌体克隆进行ＤＮＡ测序,递呈随机７肽氨基酸序列同源性分析,结果 对阳性噬菌体进行递呈肽氨基酸序理分析,获得一侯选模拟表位（ＫＰＨＸＨＸ     

早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物，但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞，而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除角蛋白外，细胞滋养层细胞免疫组化染色均阴性。结论；早孕时三种滋养层细胞在免疫组化方面有其共性，也有各自不同的特点。     

旋毛虫抗原模拟表位抗原的筛选及序列分析

目的 分析旋毛虫抗原模拟表位的抗原性及其序列。方法 利用旋毛虫病患者血清免疫球蛋白(Ts-Ig)筛选噬菌体12肽库,以旋毛虫幼虫抗原(TsA)为对照,通过ELISA鉴定筛选所获抗原模拟表位(T1-T6)的抗原性,同时检测这些模拟抗原的DNA序列并分析其氨基酸组成。结果 T1-T6灵敏性及特异性与TsA无明显差异(P>0.05),其中T3,T6与肺吸虫病患者血清无交叉反应,特异性高于TsA(P<0.05),T6与日本血吸虫病患者血清无交叉反应,特异性亦高于TsA(P<0.05)。T1-T6编码的氨基酸序列有同源性,其末端三个氨基酸残基均相同,依次为:苯丙氨酸(F),天冬酰胺(N),脯氨酸(P)。结论 筛选噬菌体12肽库获得的旋毛虫抗原模拟表位具有较好的抗原性,有望发展成为新型旋毛虫病诊断抗原,而F,N,P三个氨基酸残基可能与其较好的抗原性有关。     

应用PEPSCAN技术研究单克隆抗体L13F3识别的抗原表位

目的 分析汉滩病毒核宙蛋白（ＮＰ）主要线性表位免疫学反应的最小抗原多肽的组成,方法 在应用多株国产单克隆抗体和噬菌体库技术基本确定了病毒ＮＰ氨基端的一个主要的Ｂ细胞线性抗原表位的基础上,进一步应用单克隆抗体Ｌ１３Ｆ３对６肽或１５肽随机多肽库进行筛选,并根据毒ＮＰ氨基端ａａ１５－６７的氨基酸序列,在纤维毒膜上每间隔１或２个氨基酸合成了１５肽和８肽的阵列,用Ｌ１３Ｆ３对这两组多肽阵列进行免疫学检测     

人早孕胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养

目的: 培养纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞, 为胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制研究提供细胞学基础.方法: 胰蛋白酶-DNase消化法培养人绒毛膜滋养层细胞,间接免疫染色进行细胞纯度检测,透射电镜观察细胞内部结构.结果: 倒置显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长.细胞角蛋白染色阳性,波型蛋白染色阴性,表明不含污染细胞.透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构.结论: 该法简便易行,可获得合乎试验要求的人绒毛膜滋养层细胞.     

HCV高变区1串联模拟表位基因免疫研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)串联模拟表位基因免疫在BALB/c小鼠体内引起抗体产生的特点.方法针对中国人群HCV HVR1位中6个较保守的AA位点设计并合成多肽表位,从中筛选活性最好的肽1、5、6、7构建含4条多肽编码基因的表达载体.将HCV HVR1串联模拟表位表达载体对小鼠股四头肌直接免疫,采用ELISA法检测小鼠血清内抗体的产生,并将免疫血清与一系列基于本室对HVR1氨基酸序列的分析结果合成的多肽进行反应,分析免疫血清对这些多肽的交叉反应性.结果免疫血清同编码的各合成肽都有较好的反应性,其中对肽1反应最好.免疫血清同合成的4条HVR1全序列多肽及其他非编码HVR1多肽有较好的反应性.结论基因免疫能够在小鼠体内引起表位特异性抗体的产生.此串联表位设计引起的体液免疫反应对HCV HVR1合成肽有较好的交叉免疫反应.     

合成环肽抑制HIV-1病毒介导的细胞融合的初步研究

目的鉴定合成环肽FJ-08是否抑制HIV-1病毒介导的细胞融合。方法固相合成环肽FJ-08(SACYWWHRLHCGGGS),将合成肽与BSA载体交联,ELISA检测交联物与源于HIV-1gp41N螺旋的合成肽N36结合,细胞融合抑制实验检测FJ-08抑制H9/HIVIIIB细胞与MT-2细胞的融合。结果ELISA鉴定表明FJ-08-BSA与N36肽结合。与无关肽比较,细胞融合抑制实验显示在2h内,80#g/ml的FJ-08肽具有抑制融合作用,呈现浓度依赖效应。结论FJ-08合成肽可抑制HIV-1介导的细胞融合。     

妊娠高血压综合征患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1的表达

目的 观察正常晚孕妇女（NTP）及妊娠高血压综合征（PIH）患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1（HO-1）的表达.方法 取15例NTP和PIH患者剖宫产术的胎盘绒毛小叶进行培养,应用免疫印迹法（Western Blot）检测胎盘组织中HO-1的蛋白含量.取正常早孕妇女胎盘绒毛小叶进行细胞培养,然后分别加入NTP血清（NTP组）及中重度PIH患者血清（PIH组）,进行分组培养.应用Western Blot检测HO-1的蛋白含量.结果 PIH组胎盘组织中HO-1的蛋白含量与NTP组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;PIH患者血清培养的滋养细胞中HO-1的蛋白含量低于正常组.结论 PIH患者胎盘滋养细胞中HO-1的蛋白表达明显减少.     

噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。