A-NK 细胞对舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用的实验研究

目的：探讨 A-NK 细胞治疗裸鼠舌鳞癌移植瘤的效果。方法：分离培养人 A-NK 细胞;建立舌鳞癌 Tca8113-Tb 细胞皮下移植瘤模型,随机分为2组（n ＝7）对照组裸鼠瘤旁注射生理盐水,实验组裸鼠瘤旁注射 A-NK 细胞,观察33 d 后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤重,绘制肿瘤生长曲线。结果：治疗15～33 d 时实验组肿瘤体积均小于对照组（P ＜0．05）,观察33 d 后,实验组和对照组瘤重（g）分别是为0．96±0．38和3．74±1．22（P ＜0．05）。结论：A-NK 细胞在裸鼠体内具有抗肿瘤效应。     

人口腔鳞癌手术标本组织块裸鼠移植瘤模型的建立

目的：口腔鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，建立与人类口腔癌相似的动物模型，对进一步探讨口腔癌的发生、发展、治疗和预后具有重要意义。方法：选取新鲜的口腔鳞癌手术标本，制备成1mm^3组织块，植入BALB／cnu—nu裸鼠皮下．观察其成瘤情况．并对移植瘤的生长特性、组织形态和对化疗药物的反应进行检测。结果：收集了27例临床标本，成功建立了15个裸鼠皮下移植瘤模型，成瘤率为56％。所建立的口腔鳞癌移植瘤模型能够在裸鼠体内连续成瘤。与细胞系建立的移植瘤模型相比，其组织学特征与人口腔鳞癌标本极为相似。其中，20％（2／10）的移植瘤模型对传统化疗药物顺铂敏感。结论：成功建立了人口腔鳞癌手术标本组织块移植瘤模型。该模型为进一步研究口腔鳞癌提供了基础。     

Cal－27舌鳞癌动物模型的建立及其意义

目的：建立Cal－27舌鳞癌动物移植瘤模型,研究肿瘤细胞的生物学行为及转移瘤的特性。方法：将107／0．2 mL Cal－27细胞悬液通过在裸鼠左腋背部皮下注射接种,建立移植瘤模型。达到成瘤标准后,定期测量肿瘤大小并记录体质量变化,4周后处死裸鼠,通过组织切片HE染色法观察组织结构异型性和细胞异型性,并观察肺、肝有无转移。结果：实验裸鼠在接种后平均14天达到成瘤标准,24只裸鼠移植瘤中,成瘤率100%。未见有肺、肝脏的转移。结论：在细胞接种的数量、肿瘤接种的部位、实验动物的周龄及状态等内外部条件都适宜的情况下,成瘤率可以达到100%。该模型较客观地反应了人舌鳞癌的生物学行为,为以后的动物模型研究提供了较为适宜的注射剂量,为实验研究提供了理想的动物模型。     

微小核糖核酸-21反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞生长抑制的体内研究

目的研究微小核糖核酸-21（miR-21）反义寡核苷酸（AS-miR-21）对人舌鳞癌生长的抑制作用。方法采用稳定转染pGL6荧光素酶报告基因质粒的舌鳞癌细胞Tca8113-luc接种裸鼠,建立移植瘤动物模型,瘤体内注射ASmiR-21,应用活体成像和TUNEL等实验技术进行AS-miR-21对人舌鳞癌细胞系生长抑制的体内研究。结果通过转染pGL6荧光素酶报告基因质粒构建了稳定表达荧光素酶活性的Tca8113-luc细胞株。裸鼠皮下荷瘤模型成瘤率高,肿瘤生长稳定。在瘤体内注射AS-miR-21后肿瘤生长减慢,活体成像中光子数偏低,肿瘤标本中坏死灶少见,细胞核变小,染色变浅,异型性减低,新生血管数减少。肿瘤组织中miR-21表达明显下降,凋亡指数升高。结论肿瘤内注射AS-miR-21可以降低舌鳞癌细胞中miR-21的表达,促进舌鳞癌肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长。     

人口底鳞癌裸鼠原位移植模型的建立及其生物学特性

目的：建立一种与临床更为相关的人口底鳞癌动物模型。方法：30只6周龄裸鼠,雌雄各半。对人口底鳞癌细胞HSC-2传代培养、消化、离心后调整细胞浓度达4×108。口底黏膜下注射细胞悬液0.1mL。4周后切除移植瘤并剪成1mm3瘤块,植入裸鼠口底一瘤块,共传5代。观察记录移植成功率,生长潜伏期,每周2次测量瘤体体积。对每代移植瘤和裸鼠口底,颌下组织,肉眼可见的淋巴组织以及下颌骨进行病理学检查,透射电镜观察第5代瘤体,制备染色体标本进行染色体分析。结果：移植成功率为93%。移植瘤病理检查结果符合鳞状细胞癌典型特征,染色体检查表明其属于人类染色体。7只裸鼠发生口底和颌下浸润,其中一只转移至颌下淋巴结。癌细胞呈侵袭性生长,浸润肌肉,神经和周围血管。透射电镜观察：肿瘤成巢状生长,细胞分化高,核成圆形,细胞器发达。结论：本模型客观的反应了人口底鳞癌的生物学行为,为口底鳞癌的生物学及实验治疗的研究提供了较为理想的动物模型。     

人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜成釉细胞瘤组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。然后将纯化的成釉细胞瘤细胞接种于裸鼠颈背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织大体生长情况以及常规病理切片观察瘤细胞的侵袭生长情况。结果成釉细胞瘤细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第23天见有移植瘤形成,成瘤率为25%。病理切片显示瘤细胞可向裸鼠肌间生长,保持了其侵袭性生长的特性。结论初步建立了人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究成釉细胞瘤的侵袭生长特性奠定了基础。     

口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶裸鼠移植瘤模型的建立

目的:建立口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶移植瘤原代模型,探讨建立模型的方法.方法:将口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移组织,通过组织块皮下接种法建立颈部淋巴结转移灶模型.观察其生长状况,对移植瘤、裸鼠肝、肾、肺及淋巴结行系列检查并与来源肿瘤组织进行比较.结果:成瘤率87.5%(7/8),移植瘤具有来源肿瘤组织类似的形态学特征,肝、肾、肺未见转移,腋下及腹股沟淋巴结反应性增生.结论:通过组织块皮下接种法,成功建立了口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶移植瘤原代模型.     

裸鼠脊髓转移灶粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及生物学特性

目的：建立Mc3细胞的脏器转移细胞系。方法：采用瘤细胞尾静脉注射法、组织块细胞培养法．从裸鼠体内获得Mc3细胞系脊髓转移细胞亚系。用染色体最示、细胞形态及细胞致瘤性观察证明其性质；用细胞生长曲线、流式细胞仪测定增值速度。结果：从50只受试课鼠中获得一只截瘫的裸鼠．取其脊髓组织行原代及传代培养获得细胞并建立细胞系．传代50次以上．生长稳定．倍增时间为13 h．s期细胞占22．7％．染色体众数为61，保持人类染色体形态、细胞形态与其母细胞相似．相差显微镜观察活细胞晕”铺路石”样外观。裸鼠肺内转移肿瘤组织切片显示为粘液表皮样癌．将该细胞命名为Ms。结论：Ms细胞系是Mc3细胞系在裸鼠体内的脊髓转移细胞亚系．其生物学性质与Me3细胞小不同     

肿瘤靶向性沙门氏菌联合环磷酰胺治疗裸鼠Tca8113移植瘤的实验研究

目的：探讨肿瘤靶向性沙门氏菌VNP20009与环磷酰胺联合应用抑制人舌鳞癌细胞移植瘤的效应与毒副作用。方法：建立舌鳞癌Tca8113裸鼠皮下移植瘤模型64只,随机分为4组,治疗后测量肿瘤体积计算抑瘤率,检测血清VEGF、ALT、AST及肿瘤与肝脏内细菌浓度。结果：沙门氏菌与环磷酰胺联合比单用沙门氏菌或环磷酰胺能更有效地抑制Tca8113移植瘤的生长（P〈0.01）。结论：减毒沙门氏菌VNP20009与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用,联合治疗可以增强抗肿瘤效果。     

大鼠颊黏膜鳞状细胞癌单克隆细胞系Rca-B的建立及其生物学特性研究

目的：建立大鼠颊黏膜鳞癌单克隆细胞系，并观察其生物学特性，为口腔癌的研究提供大鼠来源的恶性肿瘤细胞系、移植瘤和转移动物模型。方法：将4-硝基喹啉-1-氧化物诱发的SD大鼠颊黏膜鳞癌组织标本进行体外传代培养，利用有限稀释法获得单克隆细胞。光学和电子显微镜观察该细胞的形态变化，细胞计数和四唑盐比色法观察细胞的增殖能力，染色体分析确定细胞核型特点，流式细胞仪检测其细胞周期；动物实验观察细胞裸鼠皮下接种成瘤率及实验性肺转移能力。结果：成功得到单克隆细胞系，细胞形态和生物学观察结果表明，该细胞系符合鳞癌细胞的基本特征，65代细胞群体倍增时间为25．44h，平板克隆形成率为56．30％。细胞周期分布S期占20．13％；染色体为四倍体核型。角质蛋白和波形蛋白免疫组织化学染色均为阳性。细胞系裸鼠皮下接种成瘤为16／16；细胞系行裸鼠尾静脉注射后，其实验性肺转移为10／10；该单克隆细胞系SD大鼠同种异体皮下接种不能成瘤。结论：成功建立SD大鼠颊黏膜鳞癌细胞系Rca—B，细胞系具有高转移鳞癌细胞的典型生物学特征；该细胞系是研究口腔鳞癌分子发生机制和防治策略的又一理想模型。     

人舌鳞癌裸鼠原位移植模型及其主要生物学特性的研究

目的建立一种与临床更相关的人舌鳞癌动物模型。方法将人舌鳞癌Ｔｃａ８１１３细胞行裸鼠原位移植并连续传代。对每代移植瘤和裸鼠口底、颌下组织、肉眼可见的颈部淋巴结以及下颌骨进行病理学观察。对第５代移植瘤进行超微结构观察。第４代移植瘤及裸鼠骨髓细胞进行染色体检查。结果移植成功率为９０％，液氮冻存复苏移植成功率为１００％。移植瘤符合鳞状细胞癌特征，染色体检查表明其属人类染色体。４只裸鼠发生了口底和颌下浸润。１只转移至颌下淋巴结。癌细胞浸润肌肉，神经和周围血管。结论本模型较客观地反映了人舌鳞癌的生物学行为，为舌癌的生物学及实验治疗的研究提供了较理想的动物模型。     

沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC50的影响

目的:评价LASP1 对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析。方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系。RT-PCR 和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达。慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8 法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化。建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤。CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC₅₀变化。采用SPSS 11.0 软件包对数据进行统计学分析。结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关。LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡。沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC₅₀显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC₅₀无显著变化。结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药。     

病人源性头颈部黏膜恶性黑色素瘤细胞模型的构建及鉴定

目的：构建及鉴定头颈部黏膜恶性黑色素瘤（mucosal melanoma of head and neck, HNMM）病人源性肿瘤细胞（patient derived tumor cell, PDC）模型。方法：通过肿瘤组织块原代培养、分离肿瘤细胞,利用免疫荧光染色鉴定分离的肿瘤细胞;以PDC皮下成瘤,通过组织切片染色和免疫组织化学染色对比病人原发灶和PDC成瘤组织的细胞学形态。结果：头颈黏膜恶性黑色素瘤患者移植瘤组织块分离出的细胞细胞膜和细胞质HMB-45和Melan-A免疫荧光染色呈阳性。PDC可以在裸鼠皮下成瘤,成瘤组织与患者组织细胞形态一致。结论：头颈部黏膜恶性黑色素瘤构建的PDC模型能够反映患者的组织学特征,PDC模型能够为头颈部黏膜恶性黑色素瘤的研究提供可靠的模型。     

黄芪对鳞癌细胞株GNM荷瘤裸鼠的免疫增强及抑瘤作用的研究

目的：本研究的目的是探讨黄芪在裸鼠体内的免疫增强及抑瘤作用．方法：将体外培养的人鳞癌细胞株ＧＮＭ接种于２０只裸鼠皮下,建立移植瘤模型,观察黄芪和平阳霉素及两者联合应用时对ＧＮＭ细胞移植瘤的抑瘤效果,并对结果用免疫组化方法检测．结果：黄芪、平阳霉素、联合用药的抑瘤率分别为６０．４％、７５．３％、８４．５％,用药组与对照组移植瘤体积变化有显著性差异（ｐ＜０．０１）．黄芪及联合用药组的脾细胞密度和ＮＫ细胞活性高于平阳霉素及对照组（ｐ＜０．０１）．结论：黄芪对ＧＮＭ细胞株有明显的抑瘤作用,与平阳霉素合用具有免疫增强和增效作用;黄芪促进ＮＫ细胞活性,参与机体免疫。     

Establishment and characterization of metastasizing cell lines from a heterotransplanted human adenoid cystic carcinoma

Adenoid cystic carcinoma (ACC) is a rare malignant tumor of the head and neck occurring in the salivary glands. We established a human ACC line which is serially transplantable in nude mice and designated it as KOA-1. The KOA-1 tumor doubled in 9.3 days and retained the histologic characteristics of a solid pattern of ACC even after 22 serial passages. The KOA-1 metastasized to the lung 2 months after subcutaneous transplantation into nude mice. We further established a subline of KOA-1 by an in vivo selection method and named it KOA-1L3. The KOA-1L3 doubled in 1.3 days and metastasized to the lung within 1 week after subcutaneous transplantation. These tumor lines may serve as a useful model for exploration of the biological behavior and treatment of human ACC.