高效液相色谱法测定天然冬虫夏草和蛹虫草及其人工培养物中3个核苷类化合物含量

目的:建立快速分析天然冬虫夏草、蛹虫草及其发酵制品中核苷类化合物成分的高效液相色谱法,比较天然冬虫夏草和蛹虫草及其发酵制品中核苷类化合物的含量。方法:采用超声提取的方法,制备供试品溶液。色谱柱为Hypersil C₁₈柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为 pH 6.5磷酸盐缓冲液-甲醇(85:15),检测波长为260 nm。结果:天然冬虫夏草和蛹虫草及其人工培养物中的3种核苷类成分在25 min内达到基线分离;腺苷在5.0~80.0 μg·ml^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 3,样品回收率为99.4%;虫草素在4.37~70.0 μg·ml^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7,样品回收率为98.3%;腺嘌呤在6.75~108.0 μg·ml^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7, 样品回收率为98.9%。结论:天然虫草与人工虫草培养物有相似的核苷类化合物,但在含量上有较大差异。此方法简便、准确,重复性好,可作为判定天然虫草及其培养物质量的一种方法。     

虫草头孢菌粉的质量标准

目的 建立虫草头孢菌粉的质量标准。方法 采用薄层色谱法对核苷类和氨基酸类成分进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定腺苷的含量。结果 腺苷在0．1-0．8μg范围内，线性关系良好(r=0．9999)，加样回收率99．7％，RSD=1．14％(n=6)。结论 所用方法简便易行、可作为控制质量的标准。     

人工培养蛹虫草子座中核苷类化合物的提取工艺研究

目的: 研究人工培养蛹虫草子座中核苷类化合物的提取条件和分离方法.方法: 采用正交设计法优化核苷类化合物的提取条件,用色谱方法分离核苷类化合物.结果: 最佳的提取条件为蒸馏水80 ℃水浴温浸提取2次,每次5 h.结论: 本法从人工培养蛹虫草子座中提取、分离得到腺苷和虫草素两种核苷类化合物.     

RP-HPLC测定不同产地人工蛹虫草中虫草素的含量

目的RP-HPLC分析测定国内不同产地的人工蛹虫草中虫草素的含量。方法采用Symmetry C18柱(150mm×4.6mm,5μm),磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(pH6.8,加1%四氢呋喃)为流动相,流速为1.8mL·min-1,检测波长为260nm。结果在2~10μg之间线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为99.63%,RSD为1.98%。结论通过比较确定了人工蛹虫草的良好菌株,为今后人工培养开发利用虫草素提供了依据。     

高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草子实体中核苷类成分的含量

目的:建立高效液相测定人工培养蛹虫草子实体中核苷类成分含量的方法。方法:采用KNAUER Eurospher-100 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-50mmol.L-1磷酸二氢钾(7∶93)为流动相,检测波长为260nm。结果:测定3批人工培育蛹虫草中核苷类成分的含量,腺苷、腺嘌呤、虫草素的平均含量分别为0.14%,0.0095%,0.42%。结论:本方法能同时测定人工蛹虫草中多种核苷类成分的含量,具有较高的灵敏度,操作简单,可用于人工蛹虫草的质量评价。     

HPLC法同时测定人工蛹虫草不同部位中5种核苷类成分的含量

目的:建立同时测定人工蛹虫草不同部位中5种核苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为InertSustain C18,流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为0.6 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素检测进样量线性范围分别为0.568~3.408μg(r=0.999 9)、0.284~1.704μg(r=0.999 9)、0.264~1.584μg(r=0.999 9)、0.232~1.392μg(r=0.999 9)、1.672~10.032μg(r=0.999 8);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率分别为98.2%~103.9%(RSD=1.97%,n=9)、96.2%~101.6%(RSD=1.76%,n=9)、96.7%~102.0%(RSD=1.94%,n=9)、95.1%~99.4%(RSD=1.43%,n=9)和95.6%~101.3%(RSD=1.82%,n=9)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于人工蛹虫草中5种核苷类成分含量的同时测定,蛹虫草不同部位中所含核苷类成分含量不同。     

HPLC法测定虫草被孢菌胶囊中腺苷的含量

目的 建立虫草被孢菌胶囊中腺苷含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定虫草被胞菌胶囊中腺苷的含量.采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:磷酸二氢钾溶液(0.05 mol·L-1)-甲醇(85∶15)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长为260hm.结果 腺苷在1.011～ 50.55μg·mL-1范围内线性关系良好,线性方程为:A=60901C-2347.7,r=1;平均回收率为100.49％(n=6,RSD=1.1％).结论 本法操作简便,不受杂质干扰,精密度好,结果准确可靠,可用于虫草被孢菌胶囊的质量控制.     

不同产地人工蛹虫草子实体及冬虫夏草中核苷类成分的比较

目的 测定不同产地人工蛹虫草子实体与天然冬虫夏草中核苷类成分的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据. 方法 以尿苷、腺苷、虫草素为主要评价指标,采用高效液相色谱法测定9个厂家11批人工蛹虫草样品和4种来源天然冬虫夏草中核苷类成分的含量. 结果 不同产地人工蛹虫草的核苷含量为0.265%～0.870%,冬虫夏草核苷含量为0.168%～0.250%,其中虫草素含量变化较大,而天然冬虫夏草中几乎不含或含有少量虫草素. 结论 产地不同,人工蛹虫草中核苷类成分含量不同,但明显高于天然冬虫夏草中核苷类成分含量,其中腺苷、尿苷含量较为稳定,可为人工蛹虫草的合理开发利用和质量评价提供依据.     

蛹虫草胶囊虫草素定量分析

目的 制定蛹虫草胶囊质量标准,建立高效液相色谱法进行虫草素定量分析.方法 采用高效液相色谱法测定蛹虫草胶囊中虫草素的含量.结果 蛹虫草胶囊虫草素含量为10.51 mg/g,平均加样回收率为100.43%,RSD为2.399%,精密度RSD为0.300%,重现性RSD为1.197%,稳定性RSD为0.637%.结论 可见高效液相色谱法测定虫草素含量结果准确、方法科学可行.     

用色谱技术测定人工蛹虫草中有效成分的含量

目的:建立人工蛹虫草中有效成分虫草素、腺苷、次黄嘌呤、鸟苷、腺嘌呤的含量测定方法.方法:用高效液相色谱法,以C18(250mm×4.0 mmI.D.,5μm)为色谱柱;以甲醇(10%～60% in 30 min)-水(90%～40% in 30 min)体系为流动相,在流速l ml/min,柱温25℃,检测波长260 nm,进样量10μl的条件下对样品中有效成分的含量进行分析测定.结果:人工蛹虫草中上述5种含量分别为725.64,1125.58,382.05,26.77,22.32μg/g.结论:该法快速简便、重现性好,能有效测定样品中有效成分.     

Effects of sample preparation methods on the quantification of nucleosides in natural and cultured Cordyceps

Sample preparation is the first and very important step, which can greatly influence the repeatability and accuracy of the analysis. To date, several sample preparation methods with different solvents have been used for quantitative determination of nucleosides in Cordyceps, but their data are greatly various. In this study, five nucleosides, including adenosine, guanosine, inosine, uridine and cordycepin, in Cordyceps were determined using three extraction methods i.e. organic solvent pressurized liquid extraction, boiling water extraction and ambient temperature water extraction and high performance liquid chromatography (HPLC)-diode array detection (DAD). The similar results were obtained when organic solvent pressurized liquid extraction and boiling water extraction were applied. However, the amounts of nucleosides in natural C. sinensis and cultured C. militaris extracted with ambient temperature water were greatly increased except those of adenosine in natural C. sinensis and cordycepin in cultured C. militaris. In addition, the amount of investigated nucleosides in cultured C. sinensis had no obvious variation among the three extraction methods. The results suggest that sample preparation has significant effect on the quantification of nucleosides in Cordyceps.     

山东不同产地北虫草中麦角甾醇提取工艺与含量测定的研究

目的：建立北虫草子实体质量评价的HPLC方法,研究和比较山东区域不同产地的北虫草子实体中麦角甾醇的提取工艺和含量。方法：采用正交试验设计筛选北虫草中麦角甾醇最佳提取工艺,利用HPLC法定量分析10个不同产地北虫草子实体中麦角甾醇的含量;采用色谱柱为Promosil-C18柱,流动相为甲醇,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为282 nm。结果：北虫草中麦角甾醇的最佳提取最佳工艺为A2B3C2,即料-液比为1∶40,40℃时超声提取75 min;不同产地的北虫草中麦角甾醇含量范围为0.25%~0.68%。结论：本方法操作简便,结果准确可靠,可用于北虫草子实体中麦角甾醇的含量测定,为北虫草的质量评价提供了参考。     

Identification and determination of nucleosides in Cordyceps sinensis and its substitutes by high performance liquid chromatography with mass spectrometric detection

Cordyceps sinensis (Cs) is a well-known traditional Chinese medicine (TCM) and Cordyceps mycelia (Cm), a cultured Cordyceps, is a substitute for Cordyceps sinensis. The most important active components in them are nucleosides. A high selective, sensitive and accurate high performance liquid chromatography method with photodiode array detection (DAD) and mass spectrometric detection has been developed for simultaneous separation, identification and quantification of nucleosides in Cs and Cm using a mobile phase including (A) ammonium acetate (40 mM, pH 5.2) and (B) methanol with a gradient system on a 2.0 mm x 150 mm Shimadzu VP-ODS column. The presence of each nucleoside in Cs and Cm was ascertained by comparison of MS data, UV spectra and retention time with standards. LC/ESI-MS in selective ion monitoring (SIM) mode were used for the quantification of nucleosides in Cs and Cm. 2-Chloroadenosine was used as internal standard for this assay. The precisions and accuracies were in the range of 1.5-5.3% and -3.5 to 5.0%, respectively. The limits of detection and quantification for nucleosides were in the order of 0.1-0.6 microg ml(-1) and 0.5-2.0 microg ml(-1), respectively. The recoveries were in the range of 92.0-107.0%. With the developed method, the concentrations of nucleosides in Cs and Cm from different sources were determined. Cs, characterized with far lower concentration of adenosine and cordycepin than Cm, can be very easy to distinguish from Cm. This reliable method would be useful for the study and quality control of Cordyceps sinensis and its substitutes.     

HPLC 测定虫草破壁灵芝孢子粉中虫草素与腺苷含量

目的 建立虫草破壁灵芝孢子粉中腺苷虫草素含量测定方法.方法采用 HPLC 法测定虫草破壁灵芝孢子粉中腺苷、虫草素的含量,色谱柱为LK PN C18 柱,流动相为甲醇-水 （12：88） 流速为 1 ml/ min,检测波长为 260 nm.结果 腺苷和虫草素进样量与峰面积在 10 μg/ min~80 μg/ min 范围内均呈良好线性关系,相关系数r 分别为0.9988 和0.9992;平均回收率分别为99.6% 和99.9%.RSD 分别为0.54%,0.58% （n=6）.结论 本方法操作简便、快速、结果准确,可作为该制剂中腺苷和虫草素的质量控制监测.     

工厂化培育北冬虫夏草子实体替代野生虫草的药效学研究

目的探讨工厂化培育的北冬虫夏草子实体的动物体内药效学参数。方法健康ICR小鼠或Wistar大鼠分成空白对照组、模型组和给药组,予北冬虫夏草子实体和野生虫草持续给药后,分别检测各组负重持续游泳时间和常压耐缺氧时间、小鼠脾淋巴细胞增殖和NK细胞活性、对CCl4引起的小鼠急性肝损伤的保护作用、对庆大霉素引起的大鼠急性肾损伤的保护作用。结果高剂量北冬虫夏草子实体可延长小鼠持续游泳和常压耐缺氧的平均存活时间至29.05%和31.08%;增加小鼠脾淋巴细胞增殖和NK细胞的活性;明显降低庆大霉素诱发的小鼠肾损伤导致的尿液异常,对BUN和Cr的缓解率分别为71.09%和44.96%,对CCl4诱发的小鼠转氨酶升高,特别是ALT的缓解率为37.82%。结论工厂化培育的北冬虫夏草子实体在保护肝、肾损伤、耐缺氧、抗疲劳以及增强免疫力方面与同剂量野生冬虫夏草相当,值得进一步开发。     

天然与发酵培养冬虫夏草中核苷类成分的含量及其变化

目的 比较天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量,并对其变化进行考察。方法 采用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量;考察湿热对冬虫夏草中核苷类成分含量的影响。结果 人工冬虫夏草的核苷含量明显高于天然冬虫夏草;新采集的天然冬虫夏草中核苷类物质含量极低,而采集日久者核苷类成分含量却较高;湿热可明显增加天然冬虫夏草中核苷类物质的含量,但对人工冬虫夏草中核苷类成分的含量无明显影响。结论 天然和人工冬虫夏草中核苷类成分存在一定差异,天然冬虫夏草中核苷类物质可能主要来源于大分子核苷(酸)的降解,腺苷在天然冬虫夏草质量控制中的应用价值尚值得进一步研究。     

Determination of purine and pyrimidine bases in natural and cultured Cordyceps using optimum acid hydrolysis followed by high performance liquid chromatography

A method based on optimum acid hydrolysis followed by high-performance liquid chromatography (HPLC) with diode array detection was developed for quantitative determination of bio-available nucleosides, present as purine and pyrimidine bases including adenine, cytosine, guanine, hypoxanthine, thymine and uracil, in natural and cultured Cordyceps. It was found that the optimum conditions was hydrolyzing Cordyceps sample in eight folds of pure commercial perchloric acid for 1h at 95-100 degrees C. The determination was achieved by using a Zorbax SB-AQ analytical column (250 mm x 4.6 mm i.d., 5 microm) at gradient elution with diode-array detection. All calibration curves showed good linearity (r2>0.999) within test ranges. The developed method showed good repeatability for the quantification of six investigated nucleobases in Cordyceps with intra- and inter-day variations of less than 9.0 and 9.1%, respectively. The validated method was successfully applied to quantify bio-available nucleosides in natural and cultured Cordyceps, which is helpful to control their quality.     

天然与发酵培养冬虫夏草中核苷类成分的含量及其变化

目的比较天然和人工培养冬虫夏草中核苷类成分的含量,并考察其变化.方法用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量;考察湿热对冬虫夏草中核苷类成分含量的影响.结果人工冬虫夏草的核苷含量明显高于天然冬虫夏草;新采集的天然冬虫夏草中核苷类物质含量极低,而采集日久者核苷类成分含量较高;湿热可明显增加天然冬虫夏草中核苷类物质的含量,但对人工冬虫夏草中核苷类成分的含量无明显影响.结论天然和人工冬虫夏草中核苷类成分存在一定差异,天然冬虫夏草中核苷类物质可能主要来源于大分子核苷(酸)的降解.     

九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布

目的快速测定九州虫草中的部分核苷类成分及其主要活性成分虫草素与腺苷的含量，并考察九州虫草不同部位虫草素和腺苷含量的分布。方法用高效毛细管区带电泳法确定野生和人工九州虫草中的核苷类成分,测定虫草素和腺苷的含量，并比较它们在九州虫草不同部位含量的分布。结果蒙山九州虫草中含有至少8种核苷或碱基，其中抗肿瘤活性成分虫草素的含量远高于冬虫夏草和蛹虫草,且人工栽培九州虫草中虫草素的含量又显著高于野生九州虫草。腺苷主要存在于九州虫草子座中，而虫草素则不仅在九州虫草子座中含量甚高，人工栽培九州虫草虫体中虫草素含量也较高。结论天然和人工九州虫草及其不同部位的核苷和碱基成分存在一定差异，九州虫草中的虫草素含量高，具有良好的栽培、药用与开发前景。