探讨非对称二甲基精氨酸诱导心肌细胞肥大的作用机制

目的探讨非对称二甲基精氨酸（ADMA）诱导心肌细胞肥大的作用机制。方法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞。用不同浓度的ADMA诱导心肌细胞肥大,然后测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量、一氧化氮合酶（NOS）的活性,细胞内氧活性物质（ROS）的水平、RNA含量、总蛋白量以及心肌细胞表面积。结果①不同浓度的ADMA分别使细胞内NO的含量减少,NOS的活性降低（P〈0.05）;②高浓度的ADMA能使心肌细胞内ROS的水平升高、细胞内RNA含量和总蛋白含量增加以及心肌细胞表面积增加（P〈0.05）。结论 ADMA能够诱导心肌细胞肥大的机制主要与ADMA影响细胞内的NO含量、ROS水平、NOS活性、RNA含量、总蛋白含量、心肌细胞总面积有关。     

非对称二甲基精氨酸诱导大鼠心肌细胞肥大的作用

目的：探讨非对称二甲基精氨酸（ADMA）诱导心肌细胞肥大的作用机制。方法：原代取材新生SD大鼠的心肌细胞进行细胞培养。原代培养的第4天，用不同浓度的ADMA（4～16μmol／L）和L-精氨酸（L-arg）（0．8～3．2mmol/L）处理心肌细胞，24h后测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量、一氧化氮合酶（NOS）的活性，细胞内氧活性物质（ROS）的水平、RNA含量、总蛋白量以及心肌细胞表面积。结果：①4μmol／L，8μmol／L，16μmol／L的ADMA分别能剂量依赖性使细胞内NO的含量减少，NOS的活性降低（P〈0．05）；②16μmol／L的ADMA能使心肌细胞内ROS的水平升高、细胞内RNA含量和总蛋白含量增加以及心肌细胞表面积增加（P〈0．05）；⑧0．8mmol／L，1．6mmol／L，3．2mmol/L的L-arg对ADMA诱导的心肌细胞内ROS水平的升高、细胞内RNA含量和总蛋白含量的增加以及心肌细胞表面积的增加产生剂量依赖性的抑制作用（P〈0．05）。结论：ADMA能够诱导心肌细胞肥大，NO的前体L-arg能够剂量依赖性地抑制ADMA诱导的心肌细胞肥大。     

乙型肝炎肝纤维化组织差异蛋白的筛选及DDAH1的功能研究

目的:对比分析乙型肝炎纤维化和非纤维化肝组织的蛋白质组表达谱的差异,探讨二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶1(DDAH1)在肝纤维化发生发展中的功能.方法:利用双向凝胶电泳(2-DE)筛选肝纤维化和非纤维化肝组织差异表达的蛋白质,质谱鉴定差异蛋白质,Western-blot验证DDAH1的表达水平;测定肝组织中DDAH1活性,不对称二甲基精氨酸(ADMA)的含量,一氧化氮合酶(NOS)活性及NO2-/NO3-比值.结果:鉴定出DDAH1等25个2倍以上的差异蛋白质;肝纤维化组织中DDAH1的活性降低,ADMA含量增加,NOS活性下降,一氧化氮(NO)含量减少.结论:乙型肝炎肝纤维化与非纤维化肝组织的蛋白质表达谱有一定差异,DDAH1有可能通过调节ADMA的代谢而影响NO合成,参与了肝纤维化的发生发展.     

不对称二甲基精氨酸在子痫前期中的研究进展

不对称二甲基精氨酸（ADMA）是内源性一氧化氮合酶（NOS）抑制剂,影响一氧化氮（NO）的合成。子痫前期是严重影响母儿健康的妊娠期特有疾病,其发病机制复杂且涉及多种病理生理因素,至今仍不十分清楚。NO合成减少和/或活性降低在子痫前期发病过程中起重要作用。子痫前期NO生物活性受损可能并非由NOS水平或活性下降引起,而可能是由NOS内源性抑制剂ADMA水平升高所致。在氧化应激和炎症等情况下,体内ADMA水平升高,而在胎盘部位其降解酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）减少,推测子痫前期母体ADMA水平升高可能来源于胎盘,与胎盘部位DDAH活性降低有关,但具体机制仍有待进一步研究。研发特异性对抗或削弱ADMA的心血管效应的药物已成为现在研究的热点。子痫前期患者补充L-精氨酸对血压和妊娠结局是否有良好的效应还存在争议,而DDAH激动剂有望成为心血管疾病和子痫前期新的治疗选择。本文就ADMA在子痫前期发病过程中的作用及其机制、在临床诊疗中的应用前景等方面的研究进展进行综述。     

胰岛素样生长因子-1对高胆固醇血症患者内皮的保护作用及机制

目的:探讨血清胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1, IGF-1) 对高胆固醇血症血管内皮的保护作用及机制。方法:观察高胆固醇血症患者和正常对照( 各25 例) 肱动脉血流介导的血管舒张功能(flow-mediatedarterial diastolic function, FMD), 并检测血清中IGF-1、非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine, ADMA)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS) 以及一氧化氮(NO) 水平;将培养的人脐静脉内皮细胞分为3 组:正常对照组、氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL) 损伤组和IGF-1 干预组, 培养24 h 后, 检测各组细胞培养液中ADMA, NOS, NO 水平, 细胞裂解液中二甲基精氨酸二甲胺水解酶(dimethylarginine dimethylamine hydrolase, DDAH) 活性, 并进行β- 半乳糖苷酶染色, 计算细胞衰老率。结果:临床实验中, 高胆固醇血症患者FMD 显著下降;伴随血清IGF-1, NOS 以及NO 水平的下降, ADMA 水平升高。多元线性回归分析显示IGF-1 与FMD 呈正相关, ADMA 与FMD 呈负相关。细胞实验中, ox-LDL 处理24 h 后, 细胞裂解液DDAH 活性下降;伴随上清液中ADMA 水平升高, NOS 和NO 水平下降和细胞衰老率增加, 给予IGF-1 干预能部分逆转上述作用。结论:血液中IGF-1 水平下降可能是高胆固醇血症患者血管内皮舒张功能受损的重要原因之一;IGF-1 具有抗内皮细胞衰老作用, 其机制可能涉及对DDAH/ADMA 途径的调节。     

非对称性二甲基精氨酸在慢性心力衰竭发病过程中的作用机制研究

目的：探讨慢性心力衰竭患者发病过程中非对称性二甲基精氨酸与一氧化氮的相关性,进一步研究两者在慢性心力衰竭发病进程中的分子机制。方法：测定60例CHF患者以及60例健康对照组血清中非对称性二甲基精氨酸浓度和No的含量,同时通过超声心动图测定CHF患病组和健康对照组的左心室参数,分析其相关性。然后利用荧光定量PCR检测DDAH基因及一氧化氮合酶基因在两组中的表达水平。结果：不同心功能分级的慢性心力衰竭患者非对称性二甲基精氨酸水平及NO含量与对照组相比,具有统计学意义（P〈0．05）。非对称性二甲基精氨酸水平及与不同心功能分级呈正相关,与左心室射血分数呈负相关,NO相反。从基因水平角度分析,DDAH及一氧化氮合酶基因随着心功能分级升高,基因表达水平呈下降趋势。结论：非对称性二甲基精氨酸水平与心功能级别呈正相关,能够作为慢性心力衰竭的诊断指标。     

二甲基精氨酸-二甲胺水解酶2的表达、调节和功能

非对称性-二甲基精氨酸(ADMA)抑制一氧化氮合酶,是内皮功能损伤、心血管疾病的危险因素。二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(DDAH)可以代谢ADMA,主要分为两种。DDAH-1主要分布于肾小管、肝脏,从循环中摄取ADMA;DDAH-2主要存在于血管中,分布于内皮细胞胞膜交界处及胞内颗粒、血管平滑肌细胞肌纤维及核被膜中。肾和血管中的DDAH,其表达调节和分布均具有特异性,可以特异地调节一氧化氮(NO)的产生。下面主要介绍DDAH-2的表达、调节与功能,描述了DDAH-2在NO产生、内皮功能中所起的作用。     

非对称二甲基精氨酸在大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的急性肺损伤发病过程中的作用(英文)

目的研究非对称二甲基精氨酸(ADMA)在大鼠脑缺血再灌注(I/R)诱导的急性肺损伤发病过程中的作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(I/R)、ADMA处理组(ADMA+I/R)和DDAH处理组(DDAH+I/R)。通过大鼠脑缺血2 h后恢复血流灌注诱导急性肺损伤。在恢复血流灌注24 h后,采用比色法检测各组大鼠肺组织一氧化氮合酶(NOS)活性和NO含量。采用RT-PCR和Western blotting分别检测肺组织蛋白激酶(PKC)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液及入肺血和出肺血血浆中的ADMA水平。结果脑I/R损伤大鼠支气管肺泡灌洗液和入肺血血浆中ADMA水平明显升高,肺组织中NO含量和NOS活性明显降低(P<0.05),同时MLCK和PKC mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05)。预先给予外源性DDAH后,脑缺血/再灌注损伤大鼠支气管肺泡灌洗液和入肺血血浆中ADMA水平明显降低,肺组织NO含量和NOS活性明显升高,MLCK和PKC mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 ADMA通过上调肺组织MLCK和PKC的表达参与了脑I/R损伤后急性肺损伤的发病过程。ADMA可能是脑缺血/再灌注损伤诱导急性肺损伤的一个新的生物标志物和治疗靶点。     

牛磺酸对低密度脂蛋白所致大鼠血管内皮损伤的保护作用

目的探讨牛磺酸(Tau)对低密度脂蛋白(LDL)诱导的血管内皮损伤的保护作用与内源性一氧化氮合酶抑制物的关系。方法SD大鼠在乙醚麻醉下,舌下静脉注射人血清LDL(4 mg/kg)诱发血管内皮功能损伤。检测血中非对称性二甲基精氨酸(ADMA),丙二醛(MDA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,并观察离体胸主动脉环的内皮依赖性舒张反应。结果单次静注LDL(4 mg/kg)显著抑制乙酰胆碱(ACh)诱导的内皮依赖性舒张,增加血液中ADMA,MDA和TNF-α水平。两个剂量牛磺酸(60或180mg/kg)均能显著减轻LDL所致ACh诱导内皮依赖性舒张的损伤,显著抑制ADMA、MDA和TNF-α浓度升高。结论牛磺酸对LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,其保护作用与降低ADMA浓度有关。     

硫化氢下调大鼠血小板L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路

目的观察硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）对血小板L-精氨酸／一氧化氮合酶／一氧化氮（L-Arg／NOS／NO）通路的影响以探讨H2S和NO这两种气体信号分子间的相互作用。方法离体孵育大鼠血小板，加入H2S气体溶液（10^-6～10^-3mol／L）孵育2h，采用Greiss法测定血小板孵育液亚硝酸盐（NO2^-）含量；同位素示踪法检测血小板NOS活性及L-Arg转运。结果一次性给予H2S（10^-3～10^-3mol／L）孵育2h，呈浓度依赖的抑制了L-Arg／NO通路，血小板孵育液中NO2^-含量比对照组分别降低6％、11％（均P〉0.05）、24％、36％和52％（均P〈0．01）；NOS活性分别下降1％、14％（P〉0.05）、25％、37％和42％（P〈0.01）；L-Arg转运分别减少12％（P〉0．05）到72％（P〈0.01）；IC50分别为53、02、41．63及21、53μmol／L（P〈0.01）。结论H2S通过抑制血小板L-Arg转运和NOS活性，下调L-Arg／NOS／NO通路，从而减少血小板NO生成。     

Dysfunction of endothelial NO system originated from homocysteine-induced aberrant methylation pattern in promoter region of DDAH2 gene

Background  Hyperhomocysteinemia (HHcy)-mediated dysfunction of endothelial NO system is an important mechanism for atherosclerotic pathogenesis. Dimethylarginine dimethylaminohydrolase (DDAH) is the key enzyme for degrading asymmetric dimethylarginine (ADMA), which is an endogenous inhibitor of endothelial nitric oxide (NO) synthase (eNOS). This study was designed to investigate whether the dysfunction of endothelial NO system originates from HHcy-mediated aberrant methylation modification in promotor region of DDAH2 gene.
Methods  Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured to the third generation and treated with homocysteine (Hcy) at different concentrations (0, 10, 30, 100, and 300 µmol/L) for 72 hours. The methylation pattern in promoter region CpG island of DDAH2 gene was analyzed by nested methylation-specific PCR (nMSP). The mRNA expression of eNOS gene and DDAH2 gene was detected by semi-quantitative RT-PCR. The activity of DDAH2 and eNOS in cells, and the concentrations of ADMA and NO in culture medium were assayed respectively.
Results  Mild increased concentration of Hcy (10 and 30 µmol/L) induced hypomethylation, while high concentration of Hcy (100 and 300 µmol/L) induced hypermethylation in the promoter CpG island of DDAH2 gene. The mRNA expression of DDAH2 increased in mild enhanced concentration of Hcy, and decreased in high concentration of Hcy correspondingly. The inhibition of DDAH2 activity, the increase of ADMA concentration, the reduction of eNOS activity and the decrease of NO production were all consistently relevant to the alteration of Hcy concentration.
Conclusion  The increased concentration of Hcy induced aberrant methylation pattern in promotor region of DDAH2 gene and the successive alterations in DDAH/ADMA/NOS/NO pathway, which showed highly relevant and dose-effect relationship. The results suggested that the dysfunction of endothelial NO system induced by HHcy could be partially originated from Hcy-mediated aberrant methylation in DDAH2 gene.

     

原发性高血压患者降压治疗前后血清不对称性二甲基精氨酸浓度的变化

目的： 探讨血清不对称性二甲基精氨酸(ADMA)浓度变化与原发性高血压患者血压水平、靶器官损害的关系及依那普利和洛沙坦治疗对其水平的影响。 方法： 42例新近诊断未经治疗的1,2级原发性高血压患者随机分为2组,分别接受依那普利和洛沙坦治疗8周;治疗前后检测血清ADMA,L-精氨酸及NO水平,同时检测23例健康体检者作为对照。结果： 高血压患者血清L-精氨酸及ADMA浓度明显高于而NO水平明显低于对照组（P<0.01）;ADMA及NO水平与血压高度及靶器官损害程度有关,L-精氨酸与其无关。依那普利和洛沙坦在有效降压的同时均使血清ADMA浓度下降、NO水平回升（P<0.01）,但不影响L-精氨酸水平。 结论： 高血压患者早期血清L-精氨酸及ADMA浓度增高、NO水平下降,依那普利和洛沙坦可通过降低ADMA浓度改善内皮细胞功能障碍。     

非对称性二甲基精氨酸对人脐静脉内皮细胞黏附分子-1表达的影响及L-精氨酸的拮抗作用

目的 :探讨非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)表达可溶性细胞间黏附分子- 1(sICAM 1)的影响 ,并观察不同浓度L- 精氨酸 (L- arg)对ADMA效应的拮抗作用。方法 :以不同浓度的ADMA与HUVECs共育或固定浓度的ADMA加不同浓度的L -arg与HUVECs共育 2 4h ,用ELISA法检测培养液中sICAM 1的浓度。结果 :ADMA呈剂量依赖性增加HUVECs表达sICAM 1(P <0 .0 5 ) ,接近生理范围的ADMA对内皮功能没有明显的影响 ;外源性补充L arg可逆转ADMA的效应 ,且呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ,但当外源性L arg的剂量大到一定程度时 ,内皮功能并不能得到进一步改善。直线相关分析显示培养液中sICAM 1的浓度和ADMA的浓度明显正相关 (r=0 .943 ,P <0 .0 1)。结论 :ADMA可通过增加内皮细胞表达sICAM -1来导致内皮功能紊乱 ,且内皮功能紊乱的程度与ADMA的浓度有关 ;外源性补充L-arg可逆转ADMA的效应 ;药物调节ADMA的浓度可能是防治心血管疾病的一个新目标。     

Effect of aspirin on high glucose-induced senescence of endothelial cells

Background Endothelial cell senescence is accelerated under high glucose condition, which may contribute to the vascular complications in the diabetics, tt has been proved that aspirin has multiple cytoprotective effects. This study aimed to investigate the effect of aspirin on high glucose-induced endothelial cell senescence and its possible mechanism. Methods Human umbilical venous endothelial cells were cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medium （DMEM） with different treatments including the normal glucose （5.5 mmol/L）, high glucose （33 mmol/L） and aspirin （0.01-1.00 mmol/L） with high glucose. And 300 umol/L L-NAME was added to the culture medium when needed. After 48 hours, SA-13-gal staining was used to evaluate the senescence. Total nitric oxide （NO） production and NO synthase （NOS） activity were measured using Griess reaction and molecular probes of 3-amino-4-aminomethyl-2＇, 7＇- difluorescein, diacetate. The level of intracellular reactive oxygen species was monitored by flow cytometry using 2＇, 7＇-dichlorofluorescein diacetate. Endothelial NOS （eNOS）, caveolin-1 protein expressions and caveolin-1/eNOS interaction were analyzed by immunoblotting and immunoprecipitation respectively. Asymmetric dimethylarginine （ADMA） concentration was determined by high-performance liquid chromatography. Results Exposure to 33 mmol/L glucose for 48 hours significantly increased the number of SA-13-gal positive cells. Co-incubation with aspirin markedly inhibited SA-13-gal activity dose-dependently. Aspirin increased NOS activity with eNOS protein expression unchanged and increased NO levels and alleviated oxidative stress. Consistent with these findings, caveolin-1 expression, caveolin-1/eNOS interaction and ADMA accumulation were also decreased. All the inhibitory effects of aspirin on senescence were completely obliterated by L-NAME, the NOS inhibitor. Conclusion The anti-senescent effects of aspirin are fulfilled by increasing NO production via the up-regulation of NOS activity and preventing caveolin-1 expression, caveolin-1/eNOS interaction and ADMA accumulation.     

非对称性二甲基精氨酸对肉皮生长晕细胞生物学功能的影响

目的 观察非对称性二甲基精氦酸（ADMA）对内皮生长晕细胞（EOC）及其生物学功能的影响。方法分离脐血中单个核细胞,采用贴壁培养法培养EOC,以免疫细胞化学染色及荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。以10μmol／LADMA及配制ADMA的溶剂（含0.5％DMSO的EBM-2培养基）,分别与第二代细胞孵育72h,检测并对比细胞的凋亡率、增殖能力及血管生成能力。结果免疫细胞染色后可见细胞表面Ⅷ因子相关抗原、CD34以及FIk-1均阳性表达,Dil-ac—LDL和FITC—UEA—Ⅰ荧光染色后可见双染色阳性细胞均为正在分化的EOC。ADMA组细胞凋亡率[（5.96±0．12）％]显著高于正常组[（1．48±0．03）％]（P〈0.01）,而细胞增值活性及血管生成活性（0．27、0.02、8．25、0.96）均明显弱于正常组（8.25、0．96、16.25、1.71）（P〈0．05或0.01）。结论ADMA能促进EOC凋亡,抑制其增值活性及血管生成活性,其对EOC细胞功能的损伤作用可能是通过氧化应激机制实现的。     

ADMA对自发性高血压大鼠血小板聚集的影响及氯沙坦的干预作用

目的:以自发性高血压大鼠为动物模型,氯沙坦为干预药物,探讨非对称性二甲基精氨酸(asymmetricdimethylarginine,ADMA)对血小板聚集的影响以及氯沙坦的干预作用。方法:自发性高血压大鼠(SHR)随机分为SHR组、L-精氨酸组(SHR L-精氨酸)、氯沙坦组(SHR 氯沙坦);另设一组京都Wistar大鼠作为对照组(WKY),每组大鼠均16只。所有大鼠自由饮水、饮食,WKY组与SHR组每天10mL/(kg·d)蒸馏水灌胃1次,L-精氨酸组与氯沙坦组分别用1.0g/(kg·d)的L-精氨酸、30mg/(kg·d)的氯沙坦钾溶解于10mL蒸馏水灌胃1次,连续2周。分别检测血小板聚集率(Pt-Ag),血浆与血小板NO,NOS,血浆与血小板ADMA浓度;另取SD大鼠血小板,分别用上述4组大鼠血管内皮孵育血小板,检测Pt-Ag。结果:(1)SHR组Pt-Ag显著高于WKY组(P<0.01);L-精氨酸与氯沙坦干预后的Pt-Ag与SHR比较均显著降低(P<0.01);(2)SHR组血浆NO浓度与血小板NO含量均显著低于WKY组(P<0.05);L-精氨酸与氯沙坦干预后NO均显著升高(P<0.05);(3)SHR组血浆与血小板NOS活性显著低于WKY组(P<0.05);L-精氨酸与氯沙坦干预后均显著升高NOS活性(P<0.01);(4)SHR组血浆ADMA浓度与血小板ADMA含量显著高于WKY组(P<0.05);L-精氨酸与氯沙坦干预后均显著降低ADMA(P<0.05);(6)血管内皮体外孵育血小板后,与对照组相比,WKY内皮组Pt-Ag显著降低(P<0.05);SHR内皮组Pt-Ag显著增加(P<0.05);与SHR内皮组相比,L-精氨酸与氯沙坦内皮组Pt-Ag均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:(1)高血压大鼠ADMA浓度升高导致NOS活性降低和NO合成减少,这可能是引起血小板聚集率增高的重要原因;(2)氯沙坦在降压的同时显著降低血小板聚集率,该作用可能是通过降低体内ADMA浓度、增加NOS活性和NO合成而实现的。