无偿献血人群HCV感染的检测和输血残余风险分析

目的了解深圳地区无偿献血人群HCV感染状况,评估血液经EIA筛查抗-HCV后经血传播HCV感染的残余风险。方法采用两种EIA试剂对献血者血液进行抗-HCV筛查,采用核酸检测技术检测EIA检测"合格"标本中HCV RNA,对HCVRNA阳性标本进行荧光定量PCR检测病毒载量,并对PCR扩增产物进行测序和病毒基因亚型分析。结果共筛查1997～2009年期间的献血者254 570人份,发现抗-HCV阳性1401人份,阳性率为0.55%;对2002～2007年期间EIA检测"合格"的113639份献血者血液标本进行NAT检测,检测出1份HCV RNA阳性、抗-HCV阴性的血清转换窗口期感染的献血者血液,HCV残余风险高达1/113 639。结论 EIA筛查后血液安全性有了很好的保障,但由于HCV感染窗口期存在,经血传播HCV残余风险依然处于较高的水平,NAT应用对提高血液安全,降低输血传播HCV残余风险意义重大。     

我国5城市合格献血者血液HIV及HCV残余风险研究

目的研究我国献血者血液HIV及HCV残余风险;评估我国开展血液核酸检测(NAT)的可行性和必要性。方法采集乌鲁木齐、昆明、北京、广州、杭州5城市献血者血样,用Chiron Procleix HIV-1/HCV Assay血液核酸检测体系,对各项血清学筛查均合格的89 467份血液作16人份混合血样NAT检测,凡筛查不合格血样再作单人份检测;对于抗-HCV阴性而HCV RNA NAT阳性者,用备用管作抗-HCV、ALT、及HCV RNA NAT复检。结果共检出HCV RNA NAT阳性但抗-HCV EIA阴性标本3例,未检出HIV RNA NAT阳性但抗-HIV EIA阴性标本;在87 034份血清学筛查合格献血者中,检出HCV NAT阳性2例,其中1例复检ALT为254U/L,未检出HIVNAT阳性;在2 613份血清学筛查不合格者中,检出1例HCV NAT阳性但抗-HCV EIA阴性标本,该献血者抗-HIV阳性、ALT 372U/L;未检出HIV NAT阳性但抗-HIV EIA阴性的标本。结论血清学筛查使我国的血液安全性已有相当高的保障;而NAT技术可进一步提高血液的安全性,但在我国是否可应用于常规血液筛查,需考虑成本与效益比。此外,ALT筛查对排除抗-HCV漏检血液仍有一定的作用。     

NAT技术在血液筛查中的初步应用

目的了解咸阳地区献血者经血传播疾病血液筛查方法的准确性与安全性,为核酸检测技术用于血站常规血液筛查提供理论依据。方法对53份抗-HCV阳性、29份抗-HIV阳性、27份HBsAg阳性标本进行NAT检测。采集自愿献血者血液标本共7981份分别使用ELISA法和实时荧光PCR法对3项经血传播疾病进行同步筛查。结果53份抗-HCV阳性标本中20份呈NAT阳性．29例抗-HIV阳性中NAT检测均为阴性．27份HBsAg阳性标本中7例呈NAT阳性。7981份标本中,HBsAg阴性HBV DNA阳性1例,HBsAg阳性HBV DNA阴性9例,二者同时呈反应性标本1例;抗-HCV阴性标本无HCV RNA阳性,抗-HCV阳性HCV RNA阴性标本26例,二者同时呈反应性标本3例;抗-HIV阳性10例,无1例HIV RNA阳性检出。结论为减少血液检测假阳性、缩短检测窗口期,有必要在本站开展血液的核酸检测。     

核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应用

目的评估核酸检测技术(NAT)应用于献血者血液筛查必要性。方法采用罗氏诊断cobas s 201系统对2010年4月~2011年3月的血站常规EIA检测合格献血者的53 041人份标本进行H IV、HCV和HBV三项联合筛查,并对NAT筛查阳性的标本做确证试验。结果 53 041人份血液标本中,经过血清学检测,HBsAg、抗-HCV、抗-H IV ELISA检测均为阴性的合格血液共51 991份。其中,NAT共检出阳性53例,阳性检出率为0.1%,分项确证实验怀疑其中1例血液标本处于H IV病毒"窗口期",追踪检测证实其H IV呈阳性。结论 NAT系统应用于献血者血液筛查有助于缩短输血性H IV、HBV和HCV等检测的"窗口期",提高血液及输血安全。     

HBsAg阴性献血者人群HBV感染的检测和输血残余风险分析

目的 了解献血人群乙型肝炎病毒(HBV)感染状况和血液经酶免疫法(EIA)筛查乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)后经血传播HBV感染的残余风险.方法 采用国产和进口两种EIA试剂对献血者血液进行HBsAg筛查,罗氏诊断COBAS Ampliscreens NAT血筛系统检测EIA检测合格标本中HBV DNA,对HBV DNA阳性标本进行半套式PCR检测,并对PCR扩增产物进行测序和病毒基因亚型分析.结果 共筛查1998～2008年的献血者232 305例,发现HBsAg阳性2 999例,阳性率为1.3%;对2002～2007年EIA检测合格的113 639例献血者血液标本进行NAT检测,检测出13份HBV DNA阳性、HBsAg阴性的献血者血液,HBV残余风险高达1.1/10 000.结论 EIA筛查后血液安全性有了很好的保障,经血传播HBV残余风险依然处于较高的水平,NAT应用对提高血液安全,降低输血传播HBV残余风险意义重大.     

一例抗-HCV阴性、HCVRNA阳性献血者的追踪随访

目的追踪随访1例抗-HCV阴性、HCV RNA阳性的献血者,观察其血清学何时发生阳性转换并确认其"窗口期"。方法采用罗氏Cobas’s201系统和科华核酸筛查系统对ELISA检测HBs Ag、抗-HCV和抗-HIV1/2为阴性的无偿献血者标本,进行HBV/HCV/HIV联合核酸定性检测。先进行混样检测,再对阳性的混合标本进行单检。对ELISA阴性、NAT阳性的献血者再进行追踪随访。结果从ELISA筛查阴性的247 936份标本中检出125例(1/1 983)NAT阳性标本,其中有1例抗-HCV阴性、HCV RNA阳性的献血者,追踪随访之后发现第6周时献血者抗-HCV完全转为阳性。结论 NAT应用于献血者血液筛查有助于缩短HCV检出"窗口期",有效地阻断了丙肝"窗口期"感染的血液传播。开展NAT在保障临床输血安全方面有重要的意义,应积极推广。     

太原地区输血传播丙型肝炎病毒残余风险的评估

目的 分析太原地区无偿献血者人群丙型肝炎病毒(HCV)流行状况,评估输血传播HCV的残余风险及血液安全现状。方法 通过血站信息管理系统收集太原地区2016～2021年无偿献血者HCV的检测结果,分析初次献血者和重复献血者HCV的检测结果和流行病学特征,采用发病率-窗口期数学模型评估初次献血者和重复献血者血液输血传播HCV的残余风险,分析不同血液筛查模式下重复献血者血液输血传播HCV的残余风险。结果 太原地区2016～2021年共检测献血者标本662 705份,其中初次献血者HCV的阳性率为1.83‰(595/325 009),输血残余风险为14.91/10万;重复献血者HCV的阳性率为0.04‰(13/337 696),输血残余风险为0.31/10万;输血传播HCV的总残余风险为7.47/10万。共检测重复献血者标本337 696份,采用2次酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗-HCV的血液筛查模式,输血传播HCV的残余风险为0.31/10万;采用2次ELISA检测抗-HCV联合1次HCV核酸检测试验(NAT)的血液筛查模式,输血传播HCV的残余风险为0.06/10万,增加NAT后,重...     

核酸检测技术在献血者血液筛查中的应用

目的评估核酸检测技术(NAT)应用于献血者血液筛查的必要性和可行性。方法采用美国罗氏诊断公司cobas s 201系统对2010年8月～2011年12月血站ELISA检测合格的献血者79 414人份血液标本进行HIVRNA-1,-2、HCV RNA和HBV DNA 3项联合核酸检测(cobas TaqScreen MPX试剂),先对6人份标本混样进行NAT,如为阴性,则直接出具结果,如出现阳性结果,再进行拆分检测;对NAT检测反应性标本进行分项确证试验。结果ELISA法共检测了98 935人份标本,抗-HIV、抗-HCV、HBsAg均为阴性的合格血液共96 923份;对79 414人份血液标本NAT共检出阳性194例,阳性率为0.24%;分项检测发现127例阳性标本,病毒类型均为HBV DNA,未检测出HCV RNA和HIV RNA,阳性检出率为65.46%(127/194)。结论 NAT能在ELISA检测阴性的献血者血液标本中筛查到HIV RNA-1,-2、HCV RNA和HBV DNA反应性标本,常规开展NAT能进一步提高血液及输血安全。     

抗-HCV阳性献血者血清HCV RNA水平与ALT活性的关系

目的 分析抗-HCV阳性献血者血清HCV RNA含量与ALT活性的关系。方法 采用ELISA法检测抗-HCV，阳性标本用荧光PCR试剂盒测定HCV RNA，分析标本ALT活性与HCV RNA水平的关系。结果 60份抗-HCV阳性标本经PCR检测后有27份标本含有HCV RNA，HCV RNA拷贝量与ALT活性呈正相关，且标本的HCV RNA含量越多，ALT活性也越高(P＜0．01)。结论 献血者中筛查ALT并结合PCR技术，能减少HCV经血传播的危险。     

48754(人)份无偿献血者血液标本核酸检测技术筛查情况分析

目的探讨核酸检测(NAT)用于盐城地区献血者血液筛查的应用价值。方法选取2011年8月-2013年4月共计48 754例经EIA法(以下简称"EIA")检测双试剂阴性或单试剂阴性的无偿献血者,使用达安核酸检测系统进行核酸检测,检测呈阳性的标本分别送卫生部临检中心、江苏省血液中心、盐城市疾控中心进行确认。HBV DNA阳性标本送检作进一步抗-HBs、HBe Ag、抗-HBe和抗-HBc检测。结果 48 754人份血液标本中,NAT共检出阳性24例,阳性检出率为0.05%,经确认,其中HIV RNA阳性的窗口期标本1例,HBV DNA阳性11例。结论 NAT技术应用于献血者血液筛查,可以缩短输血性HIV、HBV、HCV病毒检测的"窗口期",提高输血安全。     

广州地区无偿献血人群HCVE1和NS5B基因的测序和分型

目的了解广州地区无偿献血人群丙型肝炎病毒部分基因的核苷酸序列和基因型分布。方法收集广州地区无偿献血人群中抗-HCV阳性标本201份,采用荧光定量PCR(Q-PCR)的方法对其进行核酸检测,阳性标本同时作HCVE1和NS5B基因扩增;核苷酸序列测定后运用DNASTAR,B ioEd it,M ega4.0等软件作序列分析和基因分型。结果 201份抗-HCV阳性标本的HCV RNA阳性率为54.23%(109/201),其中男性的HCV RNA阳性率为63.19%(91/144)、女性为31.58%(18/57)(P<0.05)。109份HCV RNA阳性的标本全部扩增出E1和NS5B基因,基因分型显示其HCV基因型比例依次为1b(46.79%)、6 a(33.03%)、3 a(10.09%)、2 a(5.50%)、3b(3.67%)、1 a(0.92%)。结论广州地区抗-HCV阳性的无偿献血人群HCV RNA阳性率男性高于女性,HCV毒株以1b和6 a亚型最多见。     

国产HCV RNA分型试剂盒检测结果分析

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)RNA分型试剂盒检测深圳市抗-HCV阳性献血者结果。方法收集2014-2015年158份深圳市抗-HCV阳性献血者血液样本,应用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法进行HCV RNA定量检测,病毒载量1.0×103 IU/mL的样本经HCV RNA分型试剂盒检测HCV基因型,分析不同基因型所占比例,病毒基因型与载量之间的相关性。结果 158份抗-HCV阳性献血者PCR-荧光探针法检出HCV RNA阳性样本54例,病毒载量1.0×103 IU/mL的45例,全部得到分型结果,HCV 1b型、2型、3型、6型分别占57.78%(26/45)、6.67%(3/45)、8.89%(4/45)、26.67%(12/45)。单因素方差分析结果显示,1b型与2型病毒载量差异有统计学意义(F=2.861,P0.05);不同性别间HCV RNA定量检测结果及抗-HCV S/CO值结果差异有统计学意义(P0.05);不同年龄段各基因型分布比例经Fisher精确检验,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HCV 1b型、6型仍为深圳市无偿献血人群感染HCV的主要基因型,而HCV 2型和3型比例有所减少。     

拟输血手术患者混合血清样本丙型肝炎病毒核酸检测分析

目的 探讨不同数量混合血清样本丙肝病毒核酸(HCV RNA)检测在拟输血手术患者中的临床应用.方法 用酶联免疫吸附试验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测单份血清样本抗-HCV,聚合酶链反应技术(polymerase chin reaction,PCR)检测单份血清样本、...     

Application of a new enzyme-linked immunosorbent assay for detection of total hepatitis C virus core antigen in blood donors

Recent studies have shown that total hepatitis C virus (HCV) core antigen, both free and antibody bound, is an accurate indirect marker of viral replication that can be used in clinical practice. The aim of the present study was to evaluate the performance of a new total HCV core antigen enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection and quantification of total core antigen in blood donors, testing positive for anti-HCV antibodies and for prospective low-risk population screening. A population comprising 257 samples, from blood donors detected reactive for anti-HCV antibodies [137 recombinant immunoblot assay (RIBA) positive and 120 RIBA indeterminate], were tested by using a new total HCV core antigen ELISA. HCV-RNA was quantified by using quantitative polymerase chain reaction (PCR) assays in all RIBA-positive samples and RIBA-indeterminate samples that were positive for the total core antigen. Specificity of the assay was studied in 1070 healthy blood donors negative for anti-HCV antibodies. Compared with quantitative PCR assays, the total HCV core antigen assay showed 97.37% sensitivity. The three HCV-RNA-positive samples, which tested negative for the total core antigen, had a low viral load (< 1.4 x 10(4) IU mL(-1)). All samples with more than 1.4 x 10(4) IU mL(-1) of viral RNA were positive for total core antigen, independent of the HCV genotype. Concentration of total core antigen correlated significantly with those of HCV-RNA (r = 0.614, P < 0.0001). Overall specificity in freshly collected blood donor specimens was 99.63%. Our data indicate that the total HCV core antigen ELISA has a sensitivity close to PCR assays in diagnosing HCV infection in blood donors with anti-HCV antibodies and shows an excellent specificity in volunteer donors. This assay, in combination with anti-HCV antibodies screening tests, could be an alternative to molecular assays for HCV infection screening in blood donors.     

Impact of specimen handling and storage on detection of hepatitis C virus RNA

Direct detection of hepatitis C virus (HCV) RNA in serum or plasma is useful for validating the performance of anti-HCV assays and for the discrimination of persons with persistent HCV infections from those with resolved infections. Quantitation of HCV RNA may also be useful for disease prognosis and therapeutic monitoring. Previous studies have reported detection of HCV RNA in 50 to 70 percent of blood donors who were positive on anti-HCV supplemental tests. There is concern that specimen processing and storage conditions might influence the stability, and hence the detectability, of HCV RNA. To address this concern, the rate of detection of HCV RNA by the polymerase chain reaction (PCR) using donor pilot tube sera (PTS) previously subjected to routine donor screening and supplemental testing was compared with HCV PCR results obtained with fresh-frozen plasma (FFP) derived from the same donations. All 16 anti-HCV supplemental test-positive donations evaluated were HCV RNA positive with FFP, whereas only 10 (62.5%) were positive with PTS (p = 0.024). None of 11 FFP or PTS samples from HCV enzyme immunoassay-reactive donations not confirmed by supplemental anti-HCV assays tested positive for HCV RNA. Direct comparison of sample type (serum vs. plasma) and various storage conditions using specimens from two seropositive donors showed that room-temperature storage results in marked reduction in HCV RNA signal, while replicate freezing and thawing caused a moderate reduction. These data indicate that well-controlled sample processing and storage conditions are critical to the sensitive and potentially quantitative analysis of HCV RNA.     

HCV胶体金试剂在急诊患者手术输血前的快速检测

目的应用HCV胶体金试剂对急诊手术患者输血前进行检测,并与抗-HCV ELISA法进行比较。方法对本医院2008年1～10月的3216例急诊手术患者,先应用HCV胶体金试剂检测抗体,再分别用试剂①、②两种抗-HCV试剂进行ELISA法检测。对HCV胶体金试剂、试剂①、②检测为阳性的标本,再进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果3216份标本中HCV胶体金试剂检测阳性25份,抗-HCV试剂①ELISA法检测阳性33份,试剂②检测阳性34份（两种试剂均阳性26份,仅试剂①、②阳性的分别为7和8份）。HCV RNA RT—PCR荧光定量检测阳性28份。结论HCV胶体金法与抗-HCV ELISA法结果符合率为92．59％,与HCV RNA RT—PCR荧光定量法结果符合率89．29％,HCV胶体金试纸法假阳性率低,操作简便、快速,适合急诊患者手术前输血的筛选。     

新型丙型肝炎病毒抗体检测试剂Elecsys anti-HCV Ⅱ的性能评价与比较

目的评价新上市的丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)筛查试剂Elecsys anti-HCV Ⅱ的性能,并与其他两种临床上广泛应用的同类试剂进行性能比较。 方法使用罗氏Elecsys anti-HCV Ⅱ、雅培Architect anti-HCV和强生Vitros anti-HCV 3种试剂,平行检测4个HCV血清转换盘、861份临床常规样本、100份抗-HCV检测临界阳性样本及178份HIV感染患者样本。抗-HCV确诊试验为重组免疫印迹法(RIBA 3.0)或HCV RNA定量检测。此外,使用Elecsys anti-HCV Ⅱ检测203份不同HCV基因型样本以评价其基因型覆盖度。 结果相比Architect和Vitros anti-HCV,Elecsys anti-HCV II可提前7～14d检测到HCV感染后抗-HCV的产生;在检测临床常规样本(包括抗-HCV临界阳性样本)时,Elecsys anti-HCV Ⅱ有100%的敏感度及良好的特异度;70.22%(125/178)HIV感染患者样本为HCV RNA阳性,Elecsys anti-HCV Ⅱ可检测出其中97.60%(122/125)样本中的抗-HCV;Elecsys anti-HCV Ⅱ可能低估3b型样本的抗-HCV水平。 结论Elecsys anti-HCV Ⅱ可进一步缩短HCV感染后的检测窗口期,可灵敏、特异地检测临床样本包括免疫缺陷患者样本中的抗-HCV,适用于临床HCV感染的筛查,但对其检测特定HCV基因型样本的性能尚需纳入更多样本深入研究。     

ORTHO抗-HCV酶联免疫试剂2种孵育试验程序在血液筛查中的比较研究

目的确定1种3代抗-HCV酶免试剂(ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂)2种孵育试验过程在血液筛查中是否存在差异。方法随机留取常规献血者血液筛查中检出的抗-HCV反应性的血液标本180(人)份作HCVRNA检测,并用RIBA和不同于血站常规抗-HCV筛查的酶免试剂作抗-HCV复测;依据ORTHO HCV 3.0 ELISA检测试剂说明书中的长、短2种孵育检测程序,同时作对比检测。结果 180份初筛抗-HCV阳性标本中,有16份ORTHO HCV 3.0 ELISA 2种检测程序的检测结果不一致,其中5份为短孵育试验反应性、11份为长孵育试验反应性,短孵育试验漏检2份被确证抗-HCV阳性标本。ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂的长孵育检测程序灵敏度高于短孵育试验程序,2种试验程序的S/CO值分布没有差别,但RIBA不确定标本其S/CO值分布在一定的灰区范围内。结论在献血人群血液筛查中,采用具有更高灵敏度的长孵育酶免程序和设定合理的结果判定灰区,有助于预防输血传播HCV,提高血液的安全。