天花疫苗天坛株病毒中和试验方法的建立和验证

 天花疫苗天坛株病毒是自 1926 年从天花患者的疱痂中分离出来的病毒经连续传代减毒而获得。自 1980 年 WHO 宣布全球消灭天花后，天花疫苗停止使用^[1-2]。2001 年 9 月 11 日美国遭受恐怖袭击后，天花疫苗重新成为世界范围内用于反生物武器研究和使用的重点^[3-4]。目前国内外正在开发以天花疫苗天坛株作为载体的重组疫苗^[5-7]。天花疫苗的鉴别试验、外源因子检查、支原体检查等均涉及到中和试验，因此亟需建立具有检测专属性和耐用性好的中和试验方法。为此，我们选用天花疫苗天坛株病毒免疫家兔制备的抗血清进行中和试验，就中和温度、中和时间、病毒量与抗血清效价等条件优化的问题进行了探讨，并进行了中和试验方法专属性和耐用性验证。......     

以Pin1为靶点的肿瘤反义基因治疗研究进展

 肽基脯氨酰顺反式异构酶 1（peptidyl-prolyl cis/trans isomerase 1，Pin1）是进化上非常保守的肽基脯氨酰异构酶（peptidyl-prolyl isomerase，PPIase）家族的成员，属微小菌素蛋白^[1]，最初报道于 1996 年，在分离与 NIMA（never in mitosis gene A）相互作用的蛋白时得到^[2]。一些研究发现，Pin1 的作用靶点可以是参与细胞增殖、细胞凋亡和转录的蛋白，如细胞周期蛋白 E（cyclin E）、cyclin D1、β-连环蛋白（β-catenin）等，其中多数蛋白在肿瘤形成过程中会失调^[3-5]；并且 Pin1 在多种肿瘤中过表达（如宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌等）^[6-14]，因此认为 Pin1 与肿瘤发生有关。有学者已经对 Pin1 在肿瘤治疗方面的应用进行了研究，包括靶向 Pin1 的小分子化合物和反义基因。本文主要就靶向 Pin1 的肿瘤反义基因治疗方面的研究进展做简要综述。 ......     

精子特异性乳酸脱氢酶研究进展

 精子特异性乳酸脱氢酶（sperm-specific lactate dehydrogenase,LDH-C4）特异地存在于鸟类和哺乳类动物的睾丸和精子中,与体细胞乳酸脱氢酶 A4（LDH-A4）和 B4（LDH-B4）同属于乳酸脱氢酶家族,它们都以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）为辅酶催化丙酮酸和乳酸的转化,在能量代谢中发挥重要作用,但 LDH-C4 与体细胞 LDH 相比又具有一些独特性质。近来,在研制新型避孕药的过程中,免疫避孕疫苗逐渐引起人们的重视^[1],免疫法控制生育具有无药物的毒副作用、管理使用方便、低价、作用相对持久且可逆等优势,但找到理想的精子特异性抗原是制备免疫避孕疫苗的关键^[2]。用不育患者血清中提取的抗精子抗体（AsAb）来寻找睾丸 cDNA 文库表达的抗原候选对象,结 果发现特征性强且免疫效果可靠的免疫原为 LDH-C4[3]。本文主要针对近年来 LDH-C4 的研究进展及其应用做一综述。 ......     

转基因动物育种研究的现状与趋势

 20 世纪 80 年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中,使其得以表达的技术。转基因动物育种是指通过转基因的手段,从分子水平对动物进行改良,以期得到目标性状。1997 年,克隆羊 Dolly 的诞生^[1],开创了哺乳动物体细胞核移植技术的先河,随后,乳腺中表达人凝血因子 IX 的转基因克隆羊 Polly 培育成功^[2]。2005 年抗乳房炎转基因牛的诞生^[3],2006 年多不饱和脂肪酸转基因克隆猪的培育成功^[4],标志着转基因动物育种进入了新的发展历程。2009 年生产高比例的抗原特异性人源抗体的转染色体牛的出生^[5],是转基因动物生产药用蛋白的又一个里程碑。转基因动物技术自从诞生以来就在改良家畜生产性状、提高家畜抗病力以及生产非常规畜牧产品（如人药用蛋白和工业用酶）等方面显示了广阔的应用前景。随着基因工程技术的不断发展,转基因动物技术将会不断得到完善,从而在未来的动物育种中将发挥巨大的作用。......     

颈动脉斑块的无创性影像学诊断

 心脑血管疾病是危害人类健康的严重疾病，是造成死亡的主要原因之一。心脑血管疾病的发生与动脉硬化密切相关。深入研究发现，卒中和冠心病等心脑血管疾病的发作不仅取决于动脉管腔的狭窄程度，更重要的因素是动脉硬化斑块形成，特别是不稳定斑块破裂伴血栓形成和（或）血栓栓塞^[1-2]。因此，斑块不稳定性对血栓或栓塞可能是重要的预警^[3]。颈动脉的颅外段是硬化斑块形成的常见部位，是脑缺血发作的一个重要因素，因此对颈动脉硬化斑块的准确诊断和合理治疗，成为当前科研工作的一个热点。......近年来，无创或微创影像学检查技术，如超声、CT 血管造影（CTA）和磁共振血管造影（MRA）等发展迅速，这些新技术不仅能清楚显示颈动脉管腔的狭窄程度，而且可以显示管壁和斑块的病变，为准确测量硬化斑块的范围和评估斑块成分、易损程度提供了有效手段^[4]。。。。。。     

C-Jun 氨基端激酶与胰岛素抵抗

 C-Jun 氨基端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK），又称应激活化蛋白激酶（stress-activated protein kinase，SAPK），是在哺乳动物体内发现的第 3 类促分裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）的家族成员之一^[1]。JNK 广泛参与胚胎发育、细胞分化和凋亡、免疫反应以及胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）等多种生理病理过程。JNK 蛋白可由 Jnk1、Jnk2、Jnk3 等 3 个基因编码，其中 Jnk1 基因和 Jnk2 基因在全身各组织中广泛表达，Jnk3 基因则选择性地在脑、心脏、睾丸组织中表达。Jnk 基因通过选择性剪接可表达 10 种不同形式的 JNK 蛋白，这些蛋白按其相对分子质量的不同可分为 46 000 亚型和 54 000 亚型^[2]。哺乳动物的单基因敲除实验表明，Jnk1 基因和 Jnk2 基因在多数情况下能够进行功能互补，同时又具有各自特定的生理功能，其中 Jnk1 基因在 IR 及胰腺 β 细胞功能衰竭的发生发展过程中发挥着重要的调节作用^[3]。进一步的研究还表明选择性地抑制 JNK 的活化将可能为糖尿病的治疗提供一个新途径^[4]。结合近年来相关文献，本文就 JNK 与 IR 关系的研究进展进行简要综述。。。。。。     

促凋亡基因 puma 的研究进展

 p53 上调节的细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis，PUMA）是 2001 年由 Yu 等^[1]和 Nakano 等^[2] 2 个独立研究小组同时发现的，是 Bcl-2 蛋白家族的促凋亡成员之一，具有强大的促凋亡作用，可被内、外源性 p53 快速诱导活化。PUMA 基因定位于 19q，cDNA 全长 1.9 kb，转录本由 4 个外显子（1a、2、3、4）组成，编码 1 个由 193 个氨基酸组成的蛋白，该蛋白定位于线粒体膜上。Bcl-2 蛋白家族中促凋亡蛋白的共同点是都含有 1 个由 9 个氨基酸（LRRMADDLN）组成的 BH3 保守结构域。其中 PUMA 与 Bik、Bad、Bid、Bim、Hrk/DP5 及线虫 Eg-1 等促凋亡蛋白，都只存在 1 个 BH3（Bcl-2 homology3）结构域，统称为 BH3 仅有蛋白。从秀丽隐杆线虫到小鼠的程序性细胞死亡的遗传学研究显示，BH3 仅有蛋白是程序性细胞死亡的重要启动因子，BH3 仅有蛋白通过其 BH3 结构域与 Bcl-2 蛋白家族中的抑凋亡蛋白表面的沟槽相互作用从而启动凋亡，提示 BH3 结构域对 BH3 仅有蛋白与 Bcl-2 等抑凋亡蛋白结合并启动凋亡起着至关重要的作用^[3]。PUMA 的 BH3 结构域位于其氨基酸序列的第 141 ~ 149 位，缺少此结构域的 puma 突变体也将丧失诱导凋亡的功能^[4]。近年来，PUMA 的诱导凋亡作用与肿瘤的相关性研究成为热点，本文仅就 PUMA 的促凋亡作用在肿瘤研究中的应用进行综述。......     

禽流感 HA 基因密码子优化的 DNA 疫苗构建及其免疫原性的初步研究

 目的 构建H5 N1亚型禽流感病毒株密码子优化的血凝素（HA）DNA疫苗并研究其免疫原性。方法 应用MacVector软件分析H5N1亚型禽流感病毒A/Viet Nam 1203/04株HA（H5-VN HA）基因序列，对这些序列进行密码子优化处理，人工合成优化后的H5-VN HA基因。将密码子优化H5-VN HA基因与pSW3891质粒连接，并以人组织纤维蛋白溶酶原激活剂（tPA）信号肽取代H5-VN HA信号肽，构建成表达H5-VN HA基因的重组质粒，命名为HA-VN.tPA（即密码子优化的H5-VN HA基因DNA疫苗）。以HA-VN.tPA转染293T细胞，应用蛋白质印迹法检测转染细胞中HA蛋白的表达。以HA-VN.tPA对2只新西兰兔进行DNA免疫，用ELISA方法检测分析免疫后兔血清中HA特异性抗体的产生。结果 密码子优化的H5-VN HA基因中哺乳动物细胞偏爱的密码子频率高于野生型H5-VN HA基因。蛋白质印迹法分析结果表明，HA-VN.tPA转染293T细胞后，细胞裂解液中检测出HA蛋白的表达。ELISA分析结果表明，以HA-VN.tPA免疫3次后，实验兔体内产生了较高水平的HA特异性抗体（血清中平台期抗体滴度达1:13 500）。结论 成功构建了H5N1亚型禽流感病毒密码子优化的HA 基因DNA疫苗，该疫苗可引导免疫后宿主体内产生高滴度特异性抗体。     

聚乙烯亚胺用作基因转染的研究进展

 基因载体问题以及与载体相关的免疫反应、细胞毒性和安全性等问题，是基因治疗领域亟待解决的关键问题之一。聚乙烯亚胺（PEI）是阳离子聚合物非病毒载体的典型代表^[1]，是一种很早便为人所知并予以应用的有机大分子。目前，以 PEI 阳离子聚合物与 DNA 形成的 PEI/DNA 复合物已成为非病毒基因载体的研究热点。本文就近年来这方面的研究进展作简要综述。 1 PEI的特性 PEI 每 3 个原子中有 1 个胺基原子，使其具有较高正电荷密度。根据 pH 与质子作用之间的对应关系可得出：自由 PEI 的结构在生理条件下有 1/6 至 1/5 胺基发生质子化反应，从而使溶酶体肿胀破裂，从而起到“质子海绵”作用，使 PEI/DNA 复合物得以释放入胞质，很大程度上减少了 DNA 在吞噬泡内富集并进而被降解的作用，因而可以提高转染效率^[2]。     

人巨细胞病毒基因活性与受染细胞病变的相关性研究

目的： 探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染后病毒基因表达活性与细胞病变的关系。方法: 不同滴度HCMV感染传代培养的人胚肺成纤维细胞，以3个浓度接种HCMV AD169毒株稀释液：10^-5(A组)、10^-3(B组)、10^-1(C组)，建立HCMV梯度感染细胞模型，分别应用FQ-PCR法测定感染细胞内HCMV基因拷贝数、RT-PCR法测定MCP mRNA转录水平，同时光镜观察致细胞病变作用（CPE）、电镜检查细胞超微结构改变。结果: HCMV感染后，HCMV DNA在病毒滴度最低的A组细胞内负荷量最低（P<0.05，P<0.01），复制速度也最慢；仅在病毒滴度较高的B、C组内检出MCP mRNA，水平持续升高。A组未发现细胞病变，B、C组细胞检测到随感染时间延长而加重的CPE及超微结构改变。结论: HCMV感染细胞内病毒基因高负荷及MCP mRNA转录与细胞病变进展密切相关。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.