抗HCV中和抗体的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）为具包膜的单股正链RNA病毒，属于黄病毒家族。HCV是已知惟一能造成慢性感染的RNA病毒（除逆转录病毒外），据估计，目前全球约1．7亿HCV感染者中，60％-80％为慢性携带者，而持续性感染最终发展为肝硬化／肝癌的机率高达3．5％-20％。如此高比例的慢性感染率意味着在可能的病毒免疫逃逸机制下，机体往往无法激发或维持有效的抗病毒免疫反应。     

北京某地区2005年至2012年献血人群中肝炎病毒感染情况分析

目的 了解北京市某地区无偿献血者中肝炎病毒（HBV、HCV）的感染情况.方法 收集2005年至2012年在我院无偿献血人群的血液标本165566份,用ELISA方法检测HBsAg和抗-HCV在血清中的阳性情况,并进行统计学分析.结果 在165566份样本中,有1936人次为肝炎病毒感染者,总感染率为1.17％,其中HBV感染率为0.71％,HCV感染率为0.46％,混合感染率为0.006％.感染者中,男女比例为7.9∶1,年龄中以36～45岁为最高（1.42％）.结论 该地区的献血人群中肝炎病毒感染率呈逐年上升趋势,应加强输血传播的控制,保证输血安全.     

丙型肝炎病毒包膜区变异与感染慢性化关系的初步研究

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)包膜区变异与其感染慢性化的关系。方法 3份HCV慢性感染者和3份急性感染者血标本，采用逆转录—聚合两链反应(RT—PCR)扩增HCV的E1区C端及E2区N端片段(573bp)，扩增产物进行克隆，以单链构象多态性(SSCP)和异质性双体(HD)分析对每份血清30个克隆的E1／E2区准种(quasispecies)进行筛选，挑选每份标本HCV的优势株与劣势株序列进行测定，分析非同义替换碱基数与同义替换碱基数比率(dN／dS，间接反映选择压力)和推导的氨基酸序列。结果 HCV慢性感染者病毒准种的复杂性和E2区dN／dS明显高于急性感染者。HCV慢性感染者的E2区氨基酸替换率(8．46％)比急性感染者(1．02％)更高，而两者的E1区氨基酸替换率(分别为2．74％和1．09％)均较低。尽管HVR1变异程度更高，但仍存在高度保守的氨基酸位点。结论 HCV持续性感染与准种复杂性增高和宿主对HVR1的免疫选择有关。     

我国六省市(区)部分人群丙型肝炎病毒感染调查

目的 了解我国健康人群丙型肝炎病毒感染现状.方法 采用北京万泰生物药业的HCV EIA诊断试剂检测人群血清丙型肝炎病毒(丙肝,HCV)IgG抗体.结果 六省市(区)人群血清共9 538份,HCV抗体阳性数37份,总阳性率为0.39％,其中北京人群阳性率0.23％,黑龙江人群为0.74％,山东人群为0.26％,宁夏人群为0.10％,甘肃和四川人群阳性率均为0.44％.对37例HCV阳性者性别及年龄分析,男性19例占51.35％,女性18例占48.65％,＜10岁年龄组1例,占2.70％,10～19岁组5例,占13.51％,20～29岁4例占10.81％,30～39岁组6例,占16.22％,40～49岁组9例,占24.32％,≥50岁有12例占32.43％.对HCV阳性者重叠其他型别肝炎病毒感染分析,单独HCV阳性2例,占5.41％,伴有HAV-IgG抗体阳性35例,占94.59％,伴有HEV-IgG抗体阳性10例,占27.03％,伴有HBsAg、HBcAb和HbeAb阳性者2例,占5.41％,该2例HAV和HEV抗体也阳性.结论 六省市(区)人群HCV感染率均在1％以下,感染者年龄以50岁以上最高,决大多数HCV阳性者重叠有其他型别的肝炎病毒感染.     

1年以上血透患者HCV感染状况的调查

目的 研究1年以上的长期血液透析患者丙型肝炎（HCV）感染状况。方法 用ELISA法和RT－PCR法检测137例长期血透患者血清中的抗－HCV和HCVRNA,并且同时检测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）,计算其变动率。结果 透析时间超过1年以上的137例患者中仅抗－HCV阳性8例,仅HCV－RNA阳性13例,抗－HCV与HCVRNA同时阳性者24例,感染率34．3％。且透析时间小于2年的,HCV感染率为15％,透析时间大于2年以上的其感染率增至37．6％。结论 血透患者中HCV的感染应引起重视,透析的年限越长,被HCV感染的机率就越大。酶学指证的变动率不能作为长期透析患者HCV感染的敏感指标。     

SiRNA对丙型肝炎病毒5''非翻译区的干扰作用实验研究

目的研究多种siRNA对丙型肝炎病毒（HCV）5’非翻译区（5＇-UTR）的干扰作用。方法以绿色荧光蛋白基因（GFP）为报告基因，构建HCV5’UTR与GFP核酸序列连接的表达载体：pcDNA—HCV-5’UTR—GFP。设计针对HCV5’UTR区3段小干扰RNA（siRNA），siRNA与表达质pcDNA—HCV-5’UTR—GFP共转染HepG2细胞中，采用荧光显微镜观测细胞内荧光强度改变，并且用流式细胞术量化分析细胞荧光强度变化，评价多种siRNA对HCV基因表达的作用。结果成功构建含HCV5’UTR区的绿色荧光蛋白基因，siRNA能特异性地抑制绿色荧光蛋白基因的表达，siRNAA、siRNAB和siRNAC的抑制率分别为68．4％、72．6％、75．6％；siRNA＋siRNAB、siRNB＋siRNAC和siRNA＋siRNAc的抑制率分别为91．8％、87．2％、92．4％；siRNA＋siRNAB＋siRNAC的抑制率最高，为95．7％。结论多种siRNA对HCV5’UTR区具有干扰作用，组合使用效果更好。     

丙型肝炎病毒的病毒学检测方法

丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）感染引起的丙型病毒性肝炎呈全球分布,世界人口的3％即大约1．7亿人为丙肝感染者,且发展中国家高于发达国家。1992-1995年全国病毒性肝炎血清流行病学调查显示,我国人群丙肝感染率为3．2％。HCV感染自然转阴率低,极易慢性化,治疗效果差,且与肝硬化肝癌的发生及发展密切相关。丙型病毒性肝炎不仅严重危害人民健康,而且给社会带来了巨大的经济损失。因此,丙肝感染仍是我国重要的公共卫生问题之一。     

丙型肝炎病毒不同基因型NS3蛋白的抗原异质性分析

目的探讨不同基因型丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白的抗原特性及其用于抗-HCV检测的意义。方法分别构建和表达含有HCV1型和6型NS3基因片段的重组质粒和重组蛋白，以EIJSA法和Western blot分析不同基因型重组蛋白与已知抗-HCV阳性血清的抗原反应性。结果HCV1型和6型NS3重组蛋白氨基酸序列的同源性为83．2％；85份抗-HCV阳性血清以此不同基因型HCV NS3单片段抗原检测，阳性检出率分别为61．2％(1型)和58．8％(6型)，其中有7份标本以NS3-1型抗原检测阴性，但可被NS3-6型抗原检出，反之，有9份血清以NS3-6型重组蛋白检测为阴性，而NS3．1型检测阳性；54份大学生体检血清和39份阴性质控血清以此两种抗原检测均为阴性。结论HCV1型和6型NS3重组蛋白存在抗原异质性，在发展HCV抗体检测试剂时需考虑加入不同基因型的NS3抗原。     

丙型肝炎病毒全长cDNA模板的构建及鉴定

目的 构建具有功能的丙型肝炎病毒(HCV)全长cDNA克隆。方法 应用长模板RTPCR法扩增1份上海地区HCV感染者血清的RNA(基因型为1b)，分段扩增、融合拼接成9．2kb的基因片段，克隆人含有HCV基因两端非编码区序列的载体作为模板。为检测此过程是否发生对特定变异株的选择，分析4个独立克隆的HVRl序列。对原核细胞中表达的HCV核心蛋白、NS3蛋白酶及解旋酶，以蛋白印迹实验确证其免疫反应性。并构建NS3／4A-SEAP表达系统检验NS3的蛋白酶活性。结果 获得丙型肝炎病毒全长cDNA模板。不同克隆间HVR1序列存在较大差异，提示长模板RT-PCR所制备HCVcDNA具有HCV基因准种(quasispecies)的特性。该模板编码基因在原核细胞内得到高效表达，并具有良好的免疫反应性。在NS3／4A-SEAP表达系统内，NS3可切割、释放其下游的SEAP，具有蛋白酶活性。结论 本工作为构建全长功能性HCV cDNA模板及感染性克隆奠定了基础。     

海洛因静脉吸毒者HBV和HCV感染状况的调查

乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)在不同人群中的感染率不尽相同,国外报告证实静脉吸毒者是HBV和HCV的高危人群,国内个别地区也有报导,本文对94例海洛因静脉吸毒者进行了调查,现将结果报告如下:1 材料与方法1.1 对象 吸毒组:男性69例,女性25例,均为广州某戒毒所收客的吸毒者,年龄18～45岁,吸毒时间1个月至3年,均无肝炎病史,无乙肝疫苗免疫注射史,吸毒方式为静脉注射.对照组:男性62例,女性38例,均为广州医学院教职工,年龄在20～55岁.1.2 血清学检测方法 用ELISA法检测血清中的HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb及抗HCV,试剂购自上海科华实业生物技术有限公司.双份测定阳性的判为阳性,出现任何1项HBV感染指标即为HBV感染.     

丙肝抗原的检测与抗-HCV及HCV-RNA定量的关系探讨

丙型肝炎呈世界性分布，各国丙型肝炎病毒（HCV）感染率为0.1%~10%，平均为3%，1.7亿~2亿人感染了 HCV。我国一般人群 HCV感染率为3.2%[1]。成人感染 HCV后，50%~80%发展成慢性肝炎，其中约20%可发展为肝硬化。肝硬化患者中，每年1%~4%可发展为肝癌[2]。由于目前对丙型肝炎已有有效的治疗方法，因此对 HCV感染者的病毒检测，既有利于控制丙肝的传播和预防，又有利于丙肝患者的治疗。     

广州地区HBV/HCV重叠感染患者流行及临床特征研究

目的 探讨广州地区乙型肝炎病毒/丙型肝炎病毒（HBV/HCV）重叠感染患者的流行及临床特征,为提高其诊治提供依据.方法 回顾2005年4月至2011年10月我院收治慢性HBV感染患者临床资料,分析HBV/HCV重叠感染患者流行特征,按照HBeAg状态以及HBV DNA、HCV RNA水平分组分析HBV/HCV重叠感染患者临床特征.结果 HBV/HCV重叠感染率为1.9％（128/6604）,主要见于伴静脉吸毒史的男性中年患者.HBeAg阳性与阴性重叠感染患者之间的生化指标和终末期肝病发生率均无差异.HBeAg阳性患者HBV DNA阳性率高于阴性患者（P ＜0.001）,而HCV RNA水平阳性率低于阴性患者（P =0.007）.HBV DNA阳性患者终末期肝病发生率较阴性组升高（58.1％比37.9％,P=0.027）,而HCV RNA阳性与阴性患者之间发生率相似（43.6％比49.2％,P=0.540）.结论 广州地区HBV/HCV重叠感染率较低,HBV DNA水平可能与患者的疾病进展相关.     

慢性丙型肝炎肝组织HCV特异性CTL活性对干扰素应答效果的影响

目的 了解肝组织丙型肝炎病毒（HCV）特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性对慢性丙型肝炎患者干扰素治疗效果的影响。方法 用标准铬释放法对45例拟接受α干扰素治疗的慢性丙型肝炎（慢丙肝）患者肝组织CD8^ HCV特异性细胞毒性T淋巴细胞（HCV－CTL）活性进行检测，观察CTL活性与干扰素疗效的关系。结果 45例慢丙肝中20例（44．4％）肝组织HCV－CTL活性阳性。在完成干扰素治疗的42例中，19例HCV－CTL活性阳性。经过6个月的干扰素治疗，42例中共18例（42．9％）获得治疗终点完全应答15例（78．9％）为ETR，而23例HCV－CTL活性阴性患者仅3例（13．05）为ETR（P＜0．01）；10例持续应答者均为HCV－CTL活性阳性患者。结论 机体细胞免疫，尤其是CD8^ HCV-CTL介导的细胞免疫在决定慢性丙型肝炎干扰素治疗的效果中起重要作用。     

丙型肝炎病毒研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）为RNA病毒，属黄病毒属。自从1989年ChOO等采用分子克隆技术首先克隆和描述了HCV基因组后，对于HCV的研究已经取得了很大进展。1病毒颗粒的特性：丙型肝炎病毒是一种球形外壳病毒，直径约50纳米。由血源感染的急性期患者和实验感染的黑猩猩中获得的HCV在蔗糖中的浮力密度约为1．069八m3，而复制后细胞培养所获得的HCV在蔗糖中浮力密度为1．129／cm3。血清中病毒的低密度与其中所含低密度脂蛋白有关，这种脂蛋白的出现与HCV有密切联系。这些脂蛋白使HCV更容易通过细胞摄粒作用进人肝细胞内。慢性肝炎患者中获…     

不同感染途径慢性丙型肝炎患者HCV基因型分布的差异

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)基因型在中国部分城市输血与非输血途径感染者之间的分布。方法 对来自中国南北地区9个城市的慢性HCV肝炎患者的血清，用5′非编码区酶切分型方法进行HCV基因分型，分析HCV基因型在不同地区和感染途径之间的分布差异。结果 在219例慢性HCV肝炎血清中，有214例(97．7％)检测出HCV基因型，其中197例为单基因型HCV感染，主要的HCV流行株为1b(76．64％)和2a(18．22％)，并有5．14％的患者感染基因3b型，且首次在中国检测出4a型。HCV在中国南北地区城市的分布差异无显著意义，但输血感染者和非输血感染者之间的HCV基因型分布差异有显著意义，输血感染者中，93．88％为单基因型HCV感染，1b占76．87％，高于非输血途径感染患者中单基因型HCV感染百分率(86．57％)和1b的感染百分率(58．21％)，非输血感染者中的混合HCV基因型比例(13．43％)高于输血感染者(6．12％)。结论 中国南北部分地区的HCV基因型分布差异无显著意义，但经输血感染和非输血感染的慢性丙型肝炎患者之间的HCV基因型分布差异有显著意义。     

静脉药瘾者丙型肝炎病毒感染及其相关因素的分析

目的了解静脉药瘾者丙型肝炎病毒（HCV）感染状况及其影响因素。方法381例静脉药瘾者作为研究对象，采集血清，用酶联免疫吸附法（ELISA）和聚合酶链反应（PCR）观察HCV感染和常见的血源传播病毒的感染指标。结果静脉药瘾者中抗HCV阳性261人（68．5％），感染率与当地正常人群比较，差异有统计学意义（P〈0．01），单因素分析表明HCV感染与吸毒史长短、共用注射器者和重叠HIV／HBV感染相关。Logistic逐步回归分析主要因素是HIV感染、吸毒史和共用注射器。结论静脉药瘾者是HCV感染的高危人群，而吸毒史长、共用注射器和伴发HIV／HBV感染时，使机体易感性增高，静脉药瘾者是丙型肝炎的重点防治对象。     

我国六省市（区）部分人群丙型肝炎病毒感染调查

目的 了解我国健康人群丙型肝炎病毒感染现状.方法 采用北京万泰生物药业的HCV EIA诊断试剂检测人群血清丙型肝炎病毒（丙肝,HCV）IgG抗体.结果 六省市（区）人群血清共9 538份,HCV抗体阳性数37份,总阳性率为0.39％,其中北京人群阳性率0.23％,黑龙江人群为0.74％,山东人群为0.26％,宁夏人群为0.10％,甘肃和四川人群阳性率均为0.44％.对37例HCV阳性者性别及年龄分析,男性19例占51.35％,女性18例占48.65％,＜10岁年龄组1例,占2.70％,10～19岁组5例,占13.51％,20～29岁4例占10.81％,30～39岁组6例,占16.22％,40～49岁组9例,占24.32％,≥50岁有12例占32.43％.对HCV阳性者重叠其他型别肝炎病毒感染分析,单独HCV阳性2例,占5.41％,伴有HAV-IgG抗体阳性35例,占94.59％,伴有HEV-IgG抗体阳性10例,占27.03％,伴有HBsAg、HBcAb和HbeAb阳性者2例,占5.41％,该2例HAV和HEV抗体也阳性.结论 六省市（区）人群HCV感染率均在1％以下,感染者年龄以50岁以上最高,决大多数HCV阳性者重叠有其他型别的肝炎病毒感染.     

丙型肝炎病毒非结构区5个细胞毒性T细胞表位的鉴定

目的 采用T细胞表位预测软件结合体外实验鉴定丙型肝炎病毒(HCV)特异性细胞毒性T细胞(CTL)表位.方法 采用T表位预测软件Rankpep预测HCV特异性CTL表位,选择候选CTL表位加以合成;用候选CTL表位肽分别刺激HCV感染者以及健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的斑点形成细胞(spots forming cells,SFC)的水平,采用细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining,ICS)检测PBMC中肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞的水平.结果 用5条候选CTL表位肽[NS3 450(TVPQDAVSR)、NS3 594(GPTPLLYRL)、NS4b 78(SMMAFSAAL)、NS5a 416(SEENVSVVF)和NS5a 367(TVSSALAEL)]分别刺激10个HCV感染者和2个健康者的PBMC后,健康者的PBMC不产生IFN-γ而7个HCV感染者的PBMC产生IFN-γ;HCV感染者的PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的细胞的频率为(5-36)SFC/105 PBMC,肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞占总CD8+T细胞的百分比为0.02%～0.25%.结论 ELISPOT结果和ICS结果证实5条肽NS3 450、NS3 594、NS4b 78、NSSa 416和NS5a 367为全新的HCV特异性CTL表位.     

秦皇岛市各型肝炎病毒感染的血清流行病学研究

对１９９２年至１９９５年在秦皇岛市各医院住院的３２６例肝病患者进行各型肝炎病毒感染的血流流行病学分析，表明在慢性肝炎、肝硬化和原当性肝细胞肝癌中未检出甲型肝炎病毒抗体、乙型肝炎病毒在ＣＨ、ＬＣ和ＨＣＣ的感染率分别为７７．７８％，８４．２１％和９４．２９％，而在急性肝炎中的感染率为２１．５９％。     

丙型肝炎病毒感染实验室诊断进展

据世界卫生组织统计,全球丙型肝炎病毒（HCV）的感染率约为3%,每年新发HCV病例约315万例,而高度慢性化是该病的最大特征。据报道慢性丙型肝炎患者10年内约有20%发展为肝硬化,肝硬化患者每年约3%发展为肝细胞癌,严重威胁着人类的健康。