多重定性PCR和SYBR Green I实时PCR快速检测转基因食品方法的研究

转基因植物具有特殊的营养价值、产量和抗病能力,但其安全性,尤其是食用安全性已引起世界范围内的广泛关注[1,2].许多国家和地区先后制定了转基因食品标识管理政策,以保障消费者的知情权和选择权.因此建立检测转基因食品的方法势在必行.     

PCR定性检测转基因大豆的探讨

目的应用定性PCR方法检测大豆中转基因成分。方法以大豆凝集素（lection）基因为内源参照基因，设计合适引物，对转基因植物中常用的CaMV 35S启动子进行PCR扩增。结果在转基因大豆中扩增出195bp的CaMV 35S启动子片断。结论定性PCR技术是进行转基因食品检测的有效手段。     

PCR法筛选检测转基因食品

目的通过PCR检测花椰菜花叶病毒(camv)35S启动子和胭脂碱合酶(nos)终止子建立筛选食品中有无转基因成分的方法.方法用改良溴化十六烷三甲基铵(CTAB)法制备转基因抗除草剂[大豆RoundUp ReadyTMSoybean(RRS)]和转基因抗虫玉米系列标准品Bt176 Maximaizer的DNA,PCR检测其内参照基因及camv 35 S启动子和nos终止子.结果改良CTAB法制备的DNA用作PCR模板均可扩增出内参照基因,PCR扩增camv 35S启动子可检测出含量为0.5%的RRS和Bt176 Maximaizer,而PCR扩增nos终止子可检测出含1%RRS的食品样品.结论改良CTAB法制备的DNA可用作PCR模板,建立的PCR检测camv 35S启动子和nos终止子方法可用于筛选食品中有无转基因成分.     

转基因食品的健康问题及安全性评价

由于当前大量的转基因生物体作为食品或其它生活品进入人们的生活中，因此，本文拟就转基因食品的健康问题及安全性评价进行概述，主要内容包括：（1）何谓转基因食品；（2）研究转基因食品的意义；（3）转基因食品研究的现状及展望；（4）转基因食品的安全性（环境安全性和食品安全性）评价及评价的原则和方法，以及其遗传修饰物的检测；（5）转基因食品的管理，可以肯定，转基因食品的出现，将更多有益于人类。     

深圳市场4种国产农产品转基因成分监测结果

目的：为了解并掌握目前深圳市居民食品中转基因成分的实际情况，避免“家底不清”，更有效地对本市的食品安全进行系统监测和预警，为政府制定食品卫生政策提供科学依据和切实保障居民的健康安全利益。方法：按照深圳市食品污染物监测项目方案，首次对本市市场上的4种国产农产品中转基因成分进行监测，采用FCR凝胶电泳法对79份玉米、马铃薯、大豆、西红柿进行检测并用实时荧光PCR方法进行验证。结果：在79份抽检样品中，共检出含有转基因成分的样品4份，总检出率为5．1％。结论：我市食品中转基因成分存在的情况不容忽视，转基因食品未作任何标识的问题普遍存在，值得管理部门高度重视。应加强对流通市场上食品中转基因成分的监测和转基因食品标识的管理。     

转基因食品多重定性PCR及实时荧光定量PCR检测方法的研究

多重PCR方法是建立在传统PCR检测技术基础上的快速简便的检测手段。本研究以国际市场上转基因食品的主流产品转抗除草剂大豆 (RR大豆 )、Bt176玉米及我国自行研发的抗菌肽辣椒为材料 ,以多重PCR方法为基础 ,通过基因片段筛选及引物比例调整 ,进行了转基因食品的调控元件、外源结构基因及物种内源特性基因三种片段的单管同时扩增。结果与常规PCR方法检测结果完全相符。同时 ,针对RR大豆 ,对几类大豆产品运用实时定量PCR方法进行定量分析 ,得到相应的转基因成分的含量。操作简便快速 ,检测结果与标准相符 ,检测灵敏度较常规PCR更高。     

植物源性转基因食品PCR检测技术研究

〔目的〕建立简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术。〔方法〕针对转基因植物技术中载体上常用花椰菜花叶病毒的 3 5S启动子和根农杆菌的NOS终止子特异基因序列 ,设计合成特异的引物对 3 5s -f/ 3 5s-r、Nos -f/Nos -r ,利用基因PCR扩增技术检测植物源性转基因食品。〔结果〕引物对 3 5s -f/ 3 5s -r、Nos -f/Nos -r分别成功从转基因大豆中扩增出 195bp和 180bp特异的DNA带。采用引物对 3 5s -f/ 3 5s -r进行PCR时检测灵敏度为每反应 10 4分子 ;采用Nos -f/Nos -r时检测灵敏度为 2× 10 4分子。最低可以对 0 .1μg转基因大豆进行检测。〔结论〕基于 3 5S启动子和NOS终止子基因序列的PCR扩增技术是一种简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术     

转基因番木瓜55-1的多重PCR鉴定方法研究

目的：建立对转基因番木瓜55—1进行品系鉴定的多重PCR检测方法。方法：根据番木瓜管家Papain基因和转基因番木瓜55—1品系的外源结构基因（35S—GUS）和调控基因（NOS）序列设计合成特异性检测引物。采用多重PCR技术对转基因番木瓜55—1进行品系鉴定。结果：本研究建立的多重PCR反应体系、反应参数能特异性地同时扩增转基因番木瓜55-1的管家基因Papain、外源结构基因35S—GUS和调控基因NOS序列。其中针对管家基因和外源结构基因的双重PCR检测方法的绝对检测低限为0．14ng，其相对检测低限为0．14％；三重PCR检测方法的绝对检测低限为1．56ng，其相对检测低限为1．56％。结论：本检测方法有较高稳定性，能快速准确地对转基因番木瓜55—1进行品系鉴定，该方法的检测灵敏度可基本上满足转基因食品标识管理定性检测的需要。     

聚合酶链式反应鉴定转基因大豆和玉米

随着转基因作物品种日益增多和全球种植面积不断扩大。转基因食品已成为全球食品消费市场的重要组成部分。转基因食品的安全性尤其是食用安全性，也日益引起人们的关切。因此，欧盟、日本、中国等国家和地区先后制订了转基因食品标识管理政策，要求标识食品中转基因成分的性质及含量，以保障消费者的知情权和选择权。转基因大豆和玉米在目前商品化生产的转基因食品中占据主导地位，其中主要为转基因抗除草剂大豆和抗虫玉米.     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的灵敏度和特异性研究

目的:研究SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分(35S基因和NOS基因)方法的灵敏度、特异性和线性关系。方法:使用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法检测不同转基因含量的标准品,并对转基因阳性和阴性样品分别进行扩增,分析扩增曲线和Ct值。结果:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法检出限为0.05%,转基因大豆标准品和阳性样品中检出35S基因和NOS基因成分,阴性样品中未检出35S基因和NOS基因成分。结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测35S和NOS转基因成分方法灵敏度高,特异性较好,标准曲线线性良好。     

转基因食品安全性检验的核酸检测技术研究

以国际市场上转基因食品的主流产品转基因大豆及玉米和我国生产的转基因辣椒为材料 ,以PCR方法为基础 ,研究适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术。针对抗除草剂 (孟山都公司 )GM 大豆 ,转Bt 176玉米 (Novartis Ciba Geigy公司 )及转抗菌肽辣椒 (华农 )产品的插入基因及调控序列设计不同引物进行PCR检测。建立了转基因大豆、玉米、辣椒的鉴别和相关标记基因、目的基因检测的技术 ,该方法简便快速 ,检测结果与标准及申报材料相符。     

转基因食品的安全性评估与管理

转基因食品是新世纪人们关注的生物技术热点，由于我国人多耕地少，因此，在今后我国人民的生活中，转基因食品将会扮演重要角色。为了使更多的人了解转基因食品，我们采撷了有关转基因食品的相关知识，其中包括转基因食品定义和转基因食品对人类、地球生态环境的影响等。此外，介绍了世界相关组织和国家包括我国对转基因食品安全性的评价、管理。最后，对未来转基因食品的发展作了展望。     

转基因食品医学角度的安全性评估

转基因食品的优势有目共睹,但是转基因食品的安全性却一直受到大众的质疑。调查显示,人们可以接受转基因植物、转基因微生物,但对于转基因生物用于科研及医药态度不确定,反对转基因生物用于食物和娱乐,反映出人们对转基因食品的安全性持怀疑态度。世界粮农组织、世界卫生组织及经济合作与发展组织共同召集的专家们认为,食物、饲料不需要按食品添加剂及其他化学物品标准进行安全评估,实质同等性原则是评估转基因食品安全性的有力工具,目前转基因食品安全性主要按实质同等性原则进行评估。但在转基因食品进入市场以来有转基因食品导致过敏的案例出现,动物实验中也有非期望效应发生。发展转基因食品是国内、国际形势的要求,但其安全性涉及面广、影响深远,每一种转基因食品在进入市场前都应该进行科学的安全性评估。无论利弊都需要有科学的证据支撑才能既不影响转基因食品的发展又可避免公众的过度担忧。     

转基因食品安全与发展

转基因食品(Genetically Modified Food,GMF)是指利用基因工程技术改造基因组构成的食品,包括转基因植物食品、转基因动物食品和转基因微生物食品^[1].作为一项新兴的生物技术产品,由于它不可避免的不成熟性和不确定性,使转基因食品的安全性成为人们关注的焦点.本文就近年的转基因食品安全性研究综述如下.1转基因食品危害及安全性自1994年美国农业部(USDA)和美国食品与药品管理局(FDA)批准第1个转基因作物产品延熟保鲜转基因番茄获得进入市场起,大量的转基因生物体作为食品进入人们的生活.     

转基因食品的发展现状及其安全性

随着现代生物技术的发展,基因工程给食品领域带来了深刻的革命。转基因食品在世界范围内迅速发展,出现了抗胁迫、抗除草剂、抗病虫害、高产、优质,植物疫苗等多种类型的转基因食品。与此同时,转基因食品的安全性也越来越多的引起人们的关注,为此,从转基因食品的生物安全性、转基因食品安全性评价及安全管理等方面对转基因食品的安全问题进行了阐述。     

抗环斑病毒转基因番木瓜55-1的PCR检测

目的建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检测方法。方法采用改良十六烷基-三甲基-溴化铵(CTAB)法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取,根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS-35S)序列设计合成特异性检测引物,采用PCR技术对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果内源Papain基因PCR扩增结果表明,改良CTAB法及试剂盒方法都可用于番木瓜种籽及果肉的DNA提取。实验中合成的引物及建立的PCR反应体系、反应参数能特异性地扩增转基因番木瓜55-1的外源基因35S-GUS序列和NOS-35S序列。该方法的绝对检测低限为8.15×10^-2ng,相对检测低限为0.14%。结论本检测方法有较高的稳定性,能有效地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定,该方法的检测灵敏度可完全满足转基因食品标识管理定性检测的需要。     

转基因食品产业化的风险防范及制度构建

风险防范机制的缺失是阻碍转基因食品产业发展的因素之一。基于转基因食品产业对人类健康、物种进化和生态环境的负面影响，及时有效地构建风险防范机制十分必要。我国既有的转基因食品产业风险防范机制存在诸多缺陷：未形成转基因食品全程跟踪制度及安全事故应急处理制度，在安全性评价制度及法律责任体系等方面也有待进一步完善。     

转基因食品安全性评价程序和方法

通过介绍国内外转基因食品研制开发、生产、销售、管理的现状及其特点 ,针对其潜在的安全性问题 ,研究讨论符合我国食品卫生监督管理体制、与国际接轨的转基因食品安全性评价的程序和方法。提出转基因食品安全性评价的原则、项目、指标、程序和方法 ,为制定我国转基因食品卫生国家标准提供参考     

我们身边的转基因食品

近日，美国一家科研机构对中国湖南衡阳一所小学的学生进行转基因大米人体试验的新闻，引起了社会的广泛关注。由此引发的争议也在持续发酵中，不仅引起了人们对转基因食品安全性的担忧，而且再次把“食品安全”这个话题摆在了我们的面前。“转基因食品到底安全不安全？我们吃的哪些食品是转基因食品？”很多民众对转基因食品都发出了这样的疑问。如今走在超市里面，也很容易发现转基因食品在售卖，不得不承认．转基因食品正逐渐“侵入”我们的生活。     

论转基因食品的安全性

当今世界中分子生物学技术已开始在食品领域中得到广泛运用,并以转基因食品的形式出现。而转基因食品的安全性是近年来人们争论的焦点。本文经过分析,主要讨论了转基因食品的安全性问题及相关政策。