在无细胞的猪真皮上培养人角化细胞组成的重组皮肤

由于异体真皮无免疫活性促使开发了在消除潜在抗原性成份的干燥猪皮上培养人角化细胞,并使重组的人/猪皮肤(RHPS)生长成片。 人角化细胞原代培养是用致死量辐照过的3T3细胞作为滋养层。培养基是加有丙酮酸钠(0.12g/l)和NaHCO_3(1g/l)的改良的HMEM,添加10％牛血清、氢考的松0.5μg/ml、胰岛素5μg/1ml、霍乱霉素10~(-10)M、EGF5ng/ml、青霉素200U/ml、链霉素100μg/ml。培养物是在3.5％CO_2湿环境中或密闭的     

复合角化细胞人工皮肤的实验研究——小香猪角化细胞库的构建

目的小香猪皮肤角化细胞常作为种子细胞运用于多种生物复合材料中，本研究旨在通过对小香猪角化细胞获取、培养及传代的研究，为生物膜修复皮肤缺损奠定基础。方法采用中性蛋白酶和胰蛋白酶联合消化法分离小香猪角化细胞，然后接种、传代，观察角化细胞形态，并绘制生长曲线。同时，将角化细胞进行冻存与复苏，观察其特性。结果小香猪角化细胞呈“铺路石”样生长，可连续传代，第1代到第4代保持了旺盛的增长趋势，且细胞形态良好，与原代细胞无明显区别，第5代之后细胞生长缓慢，不宜传代。冻存、复苏后的角质形成细胞保持了与原代细胞相同的生长状态．并具有继续传代能力。从细胞生长曲线上可以看出角化细胞的生长过程经历了潜伏期、指数生长期、停滞期二三个阶段。结论小型香猪角质细胞库的构建为组织工程化皮肤的临床应用奠定了前期基础。     

人角质形成细胞复合异种脱细胞真皮基质三维培养的形态学观察

Objective To establish the tridimensional culture method for tissue-engineered skin to observe the histomorphological change in human immortal KC strain (HacaT)cocultured with xenogenic acel-lular dermal matrix (ADM). Methods The ADM was prepared from SD rats by a modified method. HaCaTs were cultured in defined KC-serum free medium. HaCaTs in log growth phase were inoculated on ADM at the cell density of 2 × 105/cm2. They were submergedly cultured for 5 days and then changed to air-liquid phase culture for another 5 days. ADM and growth of HaCaTs on day 1 and 5 after cocultured with ADM were observed with scanning electron microscope. The histological change in ADM and HaCaTs on day 1, 5, and 10 after cocultured with ADM were examined by HE staining. Results The gross appearance of ADM was white with smooth and soft texture, and intact collagen bundles without cellular residue. HaCaTs adhered and stretched out pseudopodia on the surface of the ADM on day 1 after combined culture, and a monolayer of cells was formed on day 5, growing into 3 - 6 layers of cells on day 10 with a tendency to grow into ADM. Conclusions SD rats ADM is benefit for the adhesion of HaCaTs and the permeation of nutri-ent solution, from which an engineered multiple-layered human skin can be obtained within 10 days.     

用体外培养的角化细胞进行混合皮肤移植的实验研究

中国人发明的大张异体皮打洞嵌入小块自体皮的混合皮肤移植方法,经过10000多例严重烧伤病人的应用,证明是非常有效的方法之一。作者由此选择培养的自体角化细胞作为嵌入自体皮的替代物,用两组高度组织相容的近亲繁殖大鼠作为实验动物,雌鼠作为供体,雄鼠组作为受体,将雄鼠组自体表皮细胞在经受致死性照射后,置于3T3鼠成纤维细胞为滋养层的组织培养皿(145mm直径)中生长,当细胞趋于融合时再置于无霍乱毒素的培养基中培养1天,经离心取稠厚的沉淀物备用;在受体大鼠的背部深达筋膜的创面上植上一张7×5cm~2的全厚皮片,上面开了8～12个直径为0.4cm     

顺铂诱导原代培养人膀胱癌细胞凋亡的实验观察

为探讨顺铂诱导原代培养膀胱癌细胞发生凋亡变化的特征及机理,以O～100μm浓度顺铂处理原代培养膀胱癌细胞12～72小时,应用MTT法检测细胞增殖抑制变化,分析其与凋亡指数(AI)的关系,采用光镜和透射电镜分别观察膀胱癌细胞凋亡变化的特征．结果表明顺铂能够明显地诱导膀胱癌细胞凋亡,具有一定范围内的作用时间和药物浓度依赖性,与细胞增殖抑制密切相关．膀胱癌细胞凋亡的镜下特征为胞膜完整,胞浆浓缩,核碎裂、萎缩或边积,胞浆外突形成凋亡小体．本研究证实顺铂诱导膀胱癌细胞广泛性凋亡是它产生杀瘤效应的途径之一．     

骨肉瘤微血管扫描电镜观察

利用微血管塑料铸型扫描电镜观察这一新技术，对骨肉瘤微血管形态进行研究。按照血管三维构造及分布特点并结合组织病理特性，骨肉瘤的血管可分为三个区带：（１）外带，为密集新生的毛细血管芽。（２）中心带，血管稀疏；有大片无血区。（３）间带，即介于肿瘤边缘与中心之间的部位，血管迂曲扩张。这些血管结构特点与肿瘤的生物学特性有关。肿瘤的边缘部分是肿瘤细胞生长最活跃的部位。     

人胚嗅神经鞘细胞的体外培养

目的：建立人胚胎嗅神经鞘细胞(OECs)的体外培养体系。方法：选取3-6个月的流产儿，采用原代培养的方法，在原代培养后的不同时间，用组织免疫化学染色的方法鉴定细胞并计算阳性率。找到细胞数量和阳性率俱佳的时间段，为以后的移植工作打下基础。结果：成功培养出人胚胎OECs，在原代培养后的2-5d主要为巨噬细胞状、多极状，与成纤维细胞很难分别，7-15d主要为扁平的双极、三极形态，突起细长，细胞阳性率可达90％，21d以后为双极、三极形态。结论：自胚胎培养OECs的方法实用可行，方法简单，为利用OECs修复脊髓损伤进入临床提供了条件。     

人毛囊外根鞘细胞的培养

以往研究表明 ,外根鞘的隆突区可能存在毛囊干细胞[1] ,利用干细胞的无限增殖能力和多能分化特性可以修复创面 ,提示外根鞘细胞在创面愈合领域具有重要的研究价值。笔者利用鼠尾胶原作底物 ,分别采用组织法和胰蛋白酶消化法进行了外根鞘细胞的培养 ,获得成功。材　料　与　方     

无血清培养人表皮细胞的研究

作者用无血清培养基培养人的表皮细胞获得成功。实验结果证明无血清培养基比含血清培养基更有利于表皮细胞生长增殖，为解决大面积烧伤救治中皮源不足的问题提供了新的途径。     

颈椎骨质疏松骨小梁扫描电镜观察

目的 观察骨质疏松颈椎松质骨小梁的超微结构。方法 20具不同性别年龄尸体80个颈椎相同条件下摄片,根据骨小梁数目变化分为正常组与疏松组。在相同部位取材、处理,电镜观察。结果 疏松组骨小梁不论水平方向与垂直方向均有吸收,表现为小梁数目的减少、变细、变尖和断裂。小梁间隙增大,变形。结论 骨质疏松颈椎骨小梁的结构变化及小梁表面胶原纤丝的“加固”作用的降低是引起骨质疏松颈椎体变形、骨折的重要因素之一。     

活体外鸡胚胎颅盖骨成骨细胞样细胞的扫描电镜观察

活体外培养鸡胚胎颅盖骨可以获得３种不同形态的成骨细胞样细胞：长梭形细胞、圆球形细胞及鳞片形细胞。随着培养时间的增加。在形态上，长梭形细胞及圆球形细胞逐步演变为鳞片形细胞；在数量上，３种细胞明显增加，有细胞汇合，相互接触、重叠；在功能上，胞浆内出现众多圆形颗粒，反映胶原形成。然后在胶原纤维丝的基础上，有钙盐结晶沉积，并形成骨结节。     

骨质疏松症骨折愈合的扫描电镜观察

为了解骨质疏松症骨折愈合过程,通过对30例骨质疏松症患者股骨粗隆间骨折愈合过程进行扫描电镜观察,结果发现骨质疏松症骨折后两周左右时:骨折骨小梁表面及周围有大量大小不等的卵圆形细胞增殖,骨吸收陷窝内有胶原纤维形成,但比较稀疏、紊乱。在骨折塑形改造期,破骨细胞性骨吸收活动显得异常活跃,而成骨细胞性骨形成显得异常微弱,骨形成滞留于骨吸收向骨形成转换期,称为Cement line现象,致使骨质疏松症骨折愈合塑形改建期,松质骨小梁变细、穿孔、离断,骨强度明显进一步下降。认为骨质疏松症骨折的治疗,不但要使骨折良好复位,坚强固定,而且在骨折塑形改造期,更应该促进成骨细胞的活性,使骨形成加快,抑制破骨细胞的活性,使骨吸收减少。扫描电镜是研究骨质疏松症骨折骨组织形态学、成骨细胞和破骨细胞的形态学变化、骨动力、骨细胞功能和骨细胞活动的一种高精度灵活性强的有效工具。     

骨质疏松症骨折愈合的扫描电镜观察

为了解骨质疏松症骨折愈合过程，通过对３０例骨质疏松症患者股骨粗隆间骨折愈合过程进行扫描电镜观察，结果发现骨质疏松症骨折后两周左右时：骨折骨小梁表面及周围有大量大小不等的卵圆形细胞增殖，骨吸收陷窝骨有胶原纤维形成，但比较稀疏，紊乱。在骨折塑形改造期，破骨细胞性骨吸收活动显得异常活跃，而成骨细胞性骨形成显得异常微弱，骨形成滞留于骨吸收向骨形成转换期，称为Ｃｅｍｅｎｔ ｌｉｎｅ现象，致使骨质疏松症骨折愈     

法乐四联症心肌纤维扫描电镜的观察

为选择法乐四联症手术的适宜年龄，应用扫描电子显微镜对３０例法乐四联症病人的右室流出道心肌纤维进行观察，结果可见多数心肌纤维排列紊乱、增生、肥大；肌纤维表面横纹的宽度粗细不均，有的异常增宽、增高。细胞表面凹凸不平，在肌膜下可见异常大量堆积的线粒体。心肌纤维内的肌原纤维排列方向紊乱，致使横小管不在同一水平。心肌间质明显增生。随着年龄的增长，上述改变愈重。因此法乐四联症病人，在条件允许下，应尽早手术     

人骨关节炎退变软骨组织的细胞体外培养及形态特征观察

目的 探索人骨关节炎(OA)退变软骨细胞的原代培养方法并观察其形态学特征及传代特点.方法 采用组织块法培养,待原代细胞长满皿底,用2.5 g/L的胰蛋白酶溶液对细胞进行消化,传代爬片10 d,用4％的多聚甲醛固定15 min,进行HE、甲苯胺蓝、Ⅰ型胶原免疫荧光、Ⅱ型胶原免疫荧光、X型胶原免疫荧光染色观察.结果 原代培...     

人黑素细胞的体外培养与观察

目的：探讨人黑素细胞体外培养方法。方法：采用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和霍乱毒素（CT）协同培养，在例置显微镜下观察其形态和生长率，并采用L-DOPA和S-100染色进行鉴定。结果：在原代培24-28小时，可见典型的多极树突状细胞，随着培养时间的延长，细胞以双极或/和三极为主，胞内充满黑素颗粒，L-DOPA和S-100染色阳性。结论：bFGF/CT协同培养为一种相对比较安全、稳定的黑素细胞培养系统，可用于实验研究。