Cyclin D1反义寡核苷酸对SGC7901胃癌细胞生长和化疗敏感性的影响

目的 研究Cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901生长和化疗敏感性的影响，并探讨其内在机制。方法 采用脂质体lipoiect AMINE2000包裹硫代修饰的Cyclin D1 ASODN转染细胞，观察对SGC7901细胞的量效曲线及其生长曲线。0．2μmol／L Cyclin D1 ASODN转染细胞24小时后，给予梯度浓度的5—氟尿嘧啶(5—FU)、氨甲喋呤(MTX)、顺铂(DDP)，观察量效反应，计算IC50。应用RT—PCR检测细胞转染后24小时和48小时时Cyclin D1、胸苷酸合成酶(TS)、胸腺嘧啶磷酸化酶(TP)、二氢叶酸还原酶(DHFR) mRNA表达情况。结果 Cyclin D1 ASODN对SGC7901细胞产生剂量依赖性的抑制效应，0．2μmol／L Cyclin D1 ASODN转染24小时能显著抑制胃癌细胞生长，降低Cyclin D1 mRNA表达。Cyclin D1 ASODN增加了胃癌细胞对5—FU，MTX，DDP的敏感性，ASODN 化疗组对各化疗药物的IC50均有显著下降。RT—PCR显示Cyclin D1 ASODN转染后24小时时TS、DHFR mRNA表达较对照组下降，而TPmRNA表达较对照组升高，48小时时TS、TP、DHFR mRNA表达的改变更加明显。结论 Cyclin D1 ASODN能降低Cyclin D1 mRNA表达，抑制胃癌细胞SGC7901的生长，并通过改变5—FU，MTX代谢相关酶的表达提高细胞对它们的敏感性。     

端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响

背景与目的:近年研究表明,端粒及端粒酶与肿瘤发生密切相关。端粒酶反义寡核苷酸直接作用于端粒酶或诱导肿瘤细胞分化均可使端粒酶活性下降,抑制肿瘤生长。而用端粒酶反义寡核苷酸直接抑制端粒酶活性是否可引起肿瘤细胞再分化,尚不清楚。由于端粒DNA重复序列是以端粒酶RNA为模板合成的,因此端粒DNA可以和端粒酶正义寡核苷酸互补结合。这种结合是否也能影响肿瘤细胞的生长,值得研究。本研究正是要探讨端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的作用。方法:脂质体介导正、反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测细胞角蛋白表达,同时观察细胞形态学变化。结果:端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样可抑制CNE1和CNE2Z细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性。1.5、3.0、4.5、6.0μmol/L正义寡核苷酸处理CNE1细胞,6h抑制率分别为16.28%、19.38%、22.48%和23.26%,48h分别达26.26%、38.89%、39.90%和38.89%;CNE2Z细胞6h抑制率分别为7.69%、8.24%、18.13%和20.32%,48h分别为28.84%、28.88%、32.89%和31.54%。正、反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞形态趋向分化成熟。结论:端粒酶正、反义寡核苷酸均可抑制鼻咽癌细胞的生长,并促进细胞分化。     

细胞周期素D1反义寡核苷酸对胃癌细胞株BGC—823的作用

目的：通过基因反义封闭技术体外抑制细胞周期素D1(cyclin D1)的表达，并对胃癌细胞增殖的影响。方法：以胃腺癌BGC-823细胞株为研究对象，采用硫代修饰的cyclin D1反义寡脱氧核苷酸(ASODN)处理BGC-823细胞后，观察cyclin D1 ASODN对BGC-823细胞基因表达及体外增殖活性的影响。结果：MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制BGC-823细胞增殖，抑制作用在48小时最强。RT-PCR检测结果cyclin D1 mRNA减少。免疫组化S-P法结果cyclin D1蛋白表达明显降低。结论：使用人工合成的cyclin D1 ASODN可以特异性的抑制胃腺癌BGC-823细胞株cyclin D1的表达，从而调控细胞周期，抑制细胞增殖。     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长的影响

引言肿瘤细胞端粒酶RNA有11个核苷酸为端粒合成的模板,本研究利用反义寡核酸的靶向作用封闭端粒酶RNA模板序列,干预端粒合成,有望使永生化细胞的无限增殖受限。1材料与方法1.1材料肝癌细胞株:SMMC-7721,正常肝细胞株:L-02,购自中科院上海细胞生物技术研究所;TRAP反应试剂(宝灵曼公司产品);Beckman CS-15R低温离心机,Perki mn-El mer PCR仪,MK-2酶标仪。1.2方法1.2.1端粒酶硫代反义、正义及随机序列寡核苷酸由中科院上海细胞所合成与纯化,纯度为98%。序列如表1所示。表1端粒酶模板区反义、正义及随机序列寡核苷酸序列位置1.ANTISENSE GTTAGGGTTAGACAAAAAAT56~362.SENSE TTTGTCTAACCCTAACTGAG45~653.CONTROL-SCRAMBLED TTTGTCTAACCCTAACTGAG1.2.2合成寡核苷酸对肝癌细胞端粒酶活性的影响1×106SMMC-7721肝癌细胞培养于含10%热灭活小牛血清的1640培养液中(37℃、5%CO2)。正义、随机、反义寡核苷酸终浓度为10μmol/L(PBS为对照),作用时间...     

E-selectin 和ICAM-1反义寡核苷酸对内皮细胞黏附肝癌细胞的影响

目的：探讨反义寡核苷酸（ASODN）对内皮细胞表达Eselectin和ICAM1的抑制及黏附肝癌细胞的影响。方法： 应用ASODN转染内皮细胞，通过流式细胞技术测定TNFα诱导后内皮细胞膜Eselectin 和ICAM1的表达，RTPCR半定量测定Eselectin 和ICAM1 mRNA的表达，细胞黏附实验测定肝癌细胞与内皮细胞的黏附率。结果： 裸ASODN和脂质体ASODN均降低了内皮细胞Eselectin 和ICAM1分子及其mRNA的表达，后者尽管浓度低，作用更为明显；Eselectin的ASODN显著降低了内皮细胞黏附肝癌细胞的黏附率。结论： ASODN能竞争性地抑制内皮细胞黏附分子的表达，在一定程度上减少了肝癌细胞的黏附。     

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的　观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法　采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果　显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。     

反义MUC2体外抑制胃癌细胞侵袭活性的研究

目的：探讨应用反义脱氧寡核苷酸（ASODN）体外抑制粘蛋白MUC2对人胃癌细胞株SGC7901侵袭活性的影响。方法：采用人工合成MUC2ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入胃癌细胞株SGC7901中,应用免疫组化及Boyden小室体外侵袭实验比较转染前后癌细胞侵袭能力的改变。结果：转染MUC2ASODN后,癌细胞穿膜细胞相对百分率较处理前明显下降;免疫组化S-P法染色提示转染MUC2ASODN后,SGC7901细胞的组织蛋白酶D及基质金属蛋白酶2表达水平明显降低。结论：使用人工合成MUC2ASODN能有效抑制胃癌细胞侵袭能力。     

ODC反义寡核苷酸对K562细胞生长抑制作用

鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)是催化多胺生物合成的限速酶.过去的研究表明多胺在维持肿瘤恶性表型中起着重要作用.用ODC不可逆抑制剂抑制多胺生物合成不仅能抑制肿瘤细胞的增殖而且还诱导细胞分化.近年我们采用反义技术,以ODC反义RNA转染肿瘤细胞,通过对ODC表达的封闭,成功地使其恶性表型得到了逆转.提示抑制肿瘤细胞的多胺合成可能是抗癌的有效途径.本文用ODC反义寡核苷酸控制肿瘤细胞的多胺生物合成,观察了其对K562细胞生长特性的影响,以期为ODC反义寡核苷酸在肿瘤临床的应用提供实验依据.     

β1整合素反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞粘附侵袭的实验研究

目的　观察β1整合素反义寡核苷酸对高侵袭性人卵巢癌细胞系CAOV3粘附侵袭的抑制作用。方法　合成的β1整合素反义寡核苷酸 (asODN)用脂质体转染入CAOV3细胞中 ,通过RT PCR、流式细胞术、MTT法、聚碳酸酯膜侵袭试验测定 β1整合素mRNA和细胞表面β1整合素蛋白表达及癌细胞粘附力、侵袭力的变化。结果　asODN组β1整合素 / β actinmRNA辉度值比值为 (0 .4 4 9± 0 .0 2 9) ,与对照组为 (0 .6 0 8± 0 .0 10 )相比 ,显著下降 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测asODN组平均荧光指数为(2 .4 30± 0 .10 4 ) ,较对照组 (6 .15 6± 0 .0 77)明显下降 (P <0 .0 1) ;asODN组粘附力为 0 .0 86± 0 .0 0 6 ,较对照组 (0 .137± 0 .0 19)显著下降 (P <0 .0 1)。asODN组穿透聚碳酸酯膜的细胞数为 16± 2 ,较对照组 (32± 4 )亦有显著差别 (P <0 .0 1)。而随机序列寡核苷酸 (rODN)组上述各指标较对照组无明显变化。结论　CAOV3细胞 β1整合素的表达与粘附侵袭能力密切相关 ,asODN能有效抑制CAOV3细胞 β1整合素基因的表达 ,从而抑制蛋白质合成 ,降低其粘附侵袭性。     

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的　研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法　将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果　奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论　奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性     

胃癌eIF4E和cyclin D1表达及其临床病理意义

 目的研究真核细胞起始因子4E(eIF4E)及cyclin D1在胃癌中的表达及临床意义,探讨eIF4E与cyclin D1之间的相关性。方法应用免疫组化的方法检测91例胃癌及30例正常胃组织中eIF4E及cy-clinD1的表达。结果eIF4E、cyclin D1在正常胃组织中均为阴性表达,在胃癌组织中的阳性表达率分别为95.6%(87/91)和84.6%(77/91)。eIF4E及cyclin D1表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移以及临床分期有关(P<0.05),但与肿瘤组织学分化程度、年龄、性别无关。胃癌组织中eIF4E与cyclin D1表达密切相关(P<0.05)。结论检测eIF4E和cyclin D1表达水平,对于判断胃癌的恶性程度有重要意义。     

cyclin D1在喉癌组织中的表达研究

目的　探讨cyclinD 1在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法　采用免疫组织化学S P法检测 41例喉癌组织中cyclinD 1的表达 ,并以 12例癌旁正常组织作对照 ,进行比较分析。 结果　 41例喉癌组织中cyclinD 1阳性表达率为 5 1.2 % ,12例癌旁正常组织阳性表达率为 16.7% ,两者有显著性差异 (P <0 .0 5 )。cyclinD1的阳性表达率与喉癌患者的性别、年龄、病程、吸烟、饮酒、肿瘤部位和TNM分期无关 (P >0 .0 5 ) ,但与淋巴结有无转移以及喉癌组织的病理分级有显著相关性 (P <0 .0 1)。结论　cy clinD1在喉癌的发生发展过程中起着一定的作用 ,可作为判断喉癌恶性程度和预后的 1个重要参考指标。     

细胞周期蛋白D1在人肝细胞癌中的表达及其意义

探讨人原发性肝细胞细胞周期蛋白Ｄ１的表达及其意义。方法采用免疫组化ＡＢＣ法检测了ｃｙｃｌｉｎＤ１在２９例肝癌组织的表达情况,并分析了其表达水平与肝癌病理分级的关系。结果５８．６％（１７／２９）的肝癌组织癌细胞表达ｃｙｃｌｉｎＤ１,而癌旁非肿瘤性肝细胞的阳性率为１８．２％。ｃｙｃｌｉｎＤ１在肝癌中表达的阳性率随着肝癌细胞分化程度的下降呈升高趋势,并且在Ⅱ级和癌旁肝组织之间Ⅰ级和Ⅲ级之间分别具有显著性     

VEGF-C反义寡核苷酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的实验研究

目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C-ASODN)对人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响。方法:构建人胃癌裸鼠移植瘤模型,反义组在接种部位皮下注射VEGF-C-ASODN,正义组和对照组分别注射VEGF-C正义寡核苷酸和生理盐水,观察移植瘤生长变化。半定量RT-PCR检测移植瘤VEGF-CmRNA表达,酶组织化学方法(5'-Nase-ALPase)染色行淋巴管计数。结果:反义组移植瘤生长缓慢,体积和重量分别为(387.57±166.29)mm³、(1.4±0.7)g,较正义组和对照组显著下降(P<0.01)。反义组VEGF-CmRNA表达的相对系数为(0.35±0.12),淋巴管计数为(14.37±4.21),较正义组和对照组均显著降低(P<0.01)。结论:VEGF-C-ASODN可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长及淋巴管的生成。     

生长抑素类似物对人胃癌细胞生长的调控作用*

目的：研究奥曲肽对SGC 7901生长的调控作用并探讨其作用的机理。方法：奥曲肽作用体外培养的SGC 7901,5-FU 作为阳性对照,人成纤维细胞作为正常对照,通过MTT 法观察奥曲肽对SGC 7901和成纤维细胞生长的抑制作用,并与5-FU 的抑制作用比较;用荧光显微镜观察细胞凋亡的变化;用流式细胞术分析奥曲肽对胃癌细胞周期分布及凋亡率的影响;用放射免疫法测定胃癌细胞培养液中IGF-1 的含量。结果：奥曲肽50μ g/L 时对胃癌细胞的生长无抑制作用（P>0.05）,随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有量效依赖关系（P<0.01）;各组奥曲肽对人成纤维细胞的生长抑制无明显差异（P>0.05）;500 μ g/L 浓度的奥曲肽对细胞的抑制率与50mg/L5-FU 对细胞的抑制率无统计学意义（P>0.05）;经1mg/L奥曲肽作用 48h 后发生明显的细胞凋亡的形态学变化;SGC 7901细胞经 500 μ g/L奥曲肽作用后,大部分细胞被阻滞于G0/G1 期（72.07± 2.40）,S 期细胞明显减少（14.99± 1.42）,细胞增殖明显受到抑制,凋亡率增加（21.40± 2.71）;经不同浓度奥曲肽处理后,细胞培养液中IGF-1 含量低于对照组（P<0.01）,提示奥曲肽具有下调细胞培养体系中IGF-1 含量的作用。结论：奥曲肽可在体外抑制胃癌细胞的增殖,对非靶细胞的生长无明显的抑制作用。奥曲肽可通过诱导胃癌细胞出现G0/G1 期阻滞和细胞凋亡直接抑制细胞生长,并可抑制IGF 生长因子的分泌,间接抑制肿瘤细胞的生长。     

细胞周期素D1与肿瘤研究进展

肿瘤是一类细胞周期性疾病,细胞生长周期的失调在肿瘤的发生发展中起关键作用.细胞周期素D1(cyclin D1)在细胞周期的正常调控中扮演重要角色,其基因结构、功能的异常与肿瘤发生发展密切相关.现综述cyclin D1与肿瘤研究的最新进展.     

替尼泊甙对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨替尼泊甙体外对胃癌细胞BGC-823的作用机制。方法 体外培养胃癌细胞株BGC-823,通过MTT法,流式细胞仪,观察替尼泊甙对胃癌细胞的生长抑制作用以及对细胞凋亡,细胞周期的影响。结果 在一定浓度范围内,细胞的生长抑制率随着浓度的增加而增加,细胞的凋亡率随着时间的增加而增加,细胞周期被阻滞在G2/M期,在48小时达到高峰。结论 替尼泊甙可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡,其诱导凋亡的能力可能是通过把细胞阻滞在G2/M期实现的。     

Cyclin D1 Antisense Oligonucleotide Inhibits Cell Growth Stimulated by Epidermal Growth Factor and Induces Apoptosis of Gastric Cancer Cells

The cyclin Dl protein is one of the cell cycle regulators required for cell cycle progression through Gl phase to S phase. The cyclin Dl-cyclin-dependent kinase (CDK) system is thought to control the cell cycle through mediating extracellular signals from mitogens, such as epidermal growth factor (EGF). In this study, we attempted to examine the therapeutic effect of cyclin Dl antisense oligonucleotides (AS/D1) on cell proliferation and apoptosis of the gastric cancer cell line MKN-74, in the presence and absence of EGF-stimulation. Evaluation of cell survival and DNA synthesis revealed that enhanced cell growth following EGF-stimulation was completely inhibited by a 24 h pre-incubation with 100 nM AS/D1. This inhibition was down to 19.3% compared with maximal DNA synthesis after stimulation with 3 nM EGF alone. Western blotting demonstrated that while EGF-stimulation led to cyclin Dl over-expression, AS/D1 inhibited cyclin Dl protein expression. We also demonstrated the induction of apoptosis in MKN-74 cells by AS/D1. In conclusion, EGF-stimulated MKN-74 cell proliferation was inhibited by AS/D1, which could overcome EGF-induced cyclin Dl over-expression. AS/D1 also affected cell survival by inducing apoptosis through cell cycle arrest following cyclin Dl depletion. Thus, AS/D1 may be a candidate for use as a novel cancer therapy specifically targeted against the over-expression of cyclin Dl enhanced by EGF in malignant cells     

小鼠胃癌Cyclin G1和其它相关基因表达及凋亡研究

目的:探讨胃癌中Cyclin G1、Cyclin D、p21、p16、p53、bcl-2等基因的表达水平、细胞周期变化和凋亡情况.方法:建立胃癌模型;免疫组化法检测小鼠胃癌中Cyclin G1、Cyclin D、p21、p16、p53、bcl-2等基因蛋白表达,RT-PCR技术检测Cyclin G1mRNA的表达;流式细胞术检测小鼠胃癌细胞的凋亡率和细胞周期.结果:阳性组的CvclinG1、Cyclin D表达明显高于正常组和化疗组(P＜0.05),p16则相反;各组p21、bcl-2的表达无明显差异;阳性组p53的表达为阴性,而化疗组与正常组表达无明显差异(P＞0.05);阳性组中Cvclin G1mRNA的表达水平明显高于正常组和化疗组(P＜0.05);化疗组和阳性组的细胞凋亡率均较正常组增高(P＜0.05),且化疗组的凋亡率比阳性组明显增高(P＜0.01).结论:CyclinG1、Cyclin D高表达、p16低表达可能与胃癌的发生、发展有关.