Mamu-B*007:03及其剪切异构体Mamu-B*007:03-sv1基因的表达及细胞内定位研究

目的Mamu-B*007:03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B*007:03基因的表达情况进行比较。 方法 分别构建Mamu-B*007:03-sv1-myc-pEGFPN3和Mamu-B*007:03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。利用western-blot免疫印迹实验检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。结果Mamu-B*007:03-sv1和Mamu-B*007:03基因均能在293T细胞内正常表达。Mamu-B*007:03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B*007:03基因在细胞膜上表达,Mamu-B*007:03-sv1基因在细胞内表达。结论 Mamu-B*007:03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B*007:03基因有明显差异,其功能有待于进一步探索。     

恒河猴Mamu-A*01基因与SIV/SHIV感染相关的研究进展

SIV/SHIV感染的恒河猴是研究艾滋病及艾滋病药物筛选、疫苗评价较理想的动物模型.MHC在细胞免疫中起着关键作用,研究表明,MHC-I类分子的多态性与SIV/SHIV感染者的疾病进展有着明显的关联作用,Mamu-A*01是恒河猴中的一种MHC-I类分子,它可以呈递特定的病毒蛋白片段到细胞的表面,从而激发CTL反应.国外发现Mamu-A*01阳性的猴艾滋病恒河猴会出现疾病进展缓慢,存活时间长等特征.本文就恒河猴Mamu-A*01基因与SIV/SHIV感染相关的研究进展做一综述,以期进一步加深对MHC在疫苗研究中的作用的了解,并促进更行之有效地对HIV/AIDS疫苗进行评价.     

Mamu-B＊ 007：03及其剪切异构体Mamu-B＊ 007：03-sv1基因的表达与细胞内定位

目的 Mamu-B＊007：03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B＊007：03基因的表达情况进行比较。方法分别构建Mamu-B＊007：03-sv1-myc-pEGFPN3和Mamu-B＊007：03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。利用Western-blot免疫印迹实验检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。结果 Mamu-B＊007：03-sv1和Mamu-B＊007：03基因均能在293T细胞内正常表达。Mamu-B＊007：03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B＊007：03基因在细胞膜上表达,Mamu-B＊007：03-sv1基因在细胞内表达。结论 Mamu-B＊007：03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B＊007：03基因有明显差异,其功能有待于进一步探索。     

HLA 基因复合体与传染病的发病机理

HLA 复合体为位于人第6号染色体短臂上的基因群,其编码分子在细胞表面,对抗原物质的自我—非我识别有重要性(图1):细胞表面分子有两类:一类由 HLA—A、HLA—B 和 HLA—C 基因决定的称Ⅰ类分子,它是由分子量45,000的重链非共价地联结分子量12,000的轻链即β_2微球蛋白而组成。HLA—A、HLA—B 和 HLA—C 位点构成Ⅰ类重链基因,而β_2微球蛋白的编码受控于第15染色体。Ⅰ类分子的作用与识别靶细胞有关,它存在于 T 细胞亚类,常用表面标记 T(?)表示,这样的细胞通常与抑制性 T 细胞和细胞毒性 T 细胞(包括杀伤病毒感染的靶细胞)     

B7H3分子在人髓性白血病细胞株U937和K562上的表达及生物学意义

目的:研究共刺激分子B7H3分子在人髓性白血病细胞株U937和K562上的表达及其生物学意义?方法:应用流式细胞术及RT-PCR法检测B7H3分子在人髓性白血病细胞株U937和K562上的表达;并用鼠抗人B7H3单克隆抗体(mAb)作用于U937和K562细胞株,细胞计数法检测鼠抗人mAb B7H3对U937和K562细胞株生长的影响?结果:流式细胞术分析显示U937和K562细胞株均表达B7H3膜蛋白,RT-PCR检测到U937和K562细胞有B7H3 mRNA产物;鼠抗人mAb B7H3对U937和K562细胞株有抑制生长的作用?结论:U937和K562细胞株组成性表达B7H3分子;鼠抗人mAb B7H3与U937和K562细胞表面的B7H3分子交联后可以抑制白血病细胞的生长?     

可溶性单链MHC-肽四聚体的构建研究

目的:构建检测抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的单链MHC-肽四聚体.方法:通过在MHC重链基因中引入生物素化位点.并在轻链和重链基因中引入同一限制性酶切位点连接MHC轻链和重链构建可生物素化的单链MHC分子.结果:重组子以包涵体形式表达得到单链MHC分子.重折叠、生物素化、荧光标记后得到活性单链MHC-肽四聚体.结论:单链MHC分子操作简便,提高了四聚体构建效率.     

CD34~+CD38~-KG1a白血病干细胞对同种异体自然杀伤细胞的抵抗作用及其机制

目的探讨CD34~+CD38~-KG1a白血病干细胞抵抗同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的机制。方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34~+CD38~-KG1a细胞和4例健康个体外周血中NK细胞,并采用流式细胞术检测纯度;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞在不同效靶比(5∶1,10∶1,20∶1)下对K562和CD34~+CD38~-KG1a细胞的杀伤作用;聚合酶链式反应-序列特异性引物法分析NK细胞KIR和CD34~+CD38~-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因分型;流式细胞术检测K562和CD34~+CD38~-KG1a细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)-I类链相关分子A/B、人巨细胞病毒UL16结合蛋白(ULBP) 1～3和人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子的表达。结果分选的CD34~+CD38~--KG1a细胞和NK细胞纯度分别为(94. 25±2. 16)%、(91. 70±2. 05)%。NK细胞在各效靶比下对CD34~+CD38~-KG1a细胞的杀伤率均低于K562细胞(P <0. 05)。4例健康个体NK细胞KIR基因型为KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1和KIR3DL2,CD34~+CD38~-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因型为A30、30,B51、78,Cw4、16。K562细胞高表达NKG2D配体,CD34~+CD38~-KG1a细胞几乎不表达NKG2D配体,CD34~+CD38~-KG1a细胞中NKG2D配体表达率显著低于K562细胞(P <0. 05); K562细胞中几乎不表达HLA-Ⅰ,CD34~+CD38~-KG1a细胞高表达HLA-Ⅰ,CD34~+CD38~-KG1a细胞中HLA-Ⅰ的表达率显著高于K562细胞(P <0. 05)。结论 CD34~+CD38~-KG1a细胞明显抵抗同种异体NK细胞的杀伤作用,其机制可能与高表达HLA-Ⅰ分子和低表达NK2D配体有关。     

胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究

目的：探讨胃癌细胞系MKN中HLA—Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制。方法：以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照，利用流式细胞仪检测细胞表面HLA—Ⅰ类复合物的表达情况，Western blot检测HLA—Ⅰ类分子重链及轻链表达情况，半定量RT—PCR检测HLA—Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况，并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果：胃癌细胞系MKN表面HLA—Ⅰ类复合物表达降低，重链A及B／C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平，胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示，MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论：胃癌细胞系MKN HLA—Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。     

树突状细胞在肿瘤免疫治疗中的应用

肿瘤的主动免疫治疗近年来一直是肿瘤治疗研究的热点。随着人们对免疫应答、T细胞活化机制认识的逐渐深入,抗原递呈细胞对肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigenTAA)俘获、加工以及激活T细胞,从而启动抗肿瘤免疫反应越来越受到重视。树突状细胞(dendriticcellsDCs)起源于骨髓CD34 造血干细胞,是目前已知体内抗原递呈能力最强的抗原递呈细胞。它们特征性地高水平表达与抗原递呈有关的主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类和Ⅱ类分子,并高水平表达刺激分子CD80(B7 -1)、CD86(B7-2)、CD40、CD50等以及某些粘附分子,其本身也可以产生多种细胞因子如干扰素α(IFN -α)、白介素12(IL -12)、肿瘤坏死因子(TNF)等。DCs介导免疫反应的途径主要有:1.DC摄取、加工抗原,再转运至细胞内主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类和Ⅱ类分子富含区,形成MHC -肽复合体,在细胞表面表达并激活T细胞,CD8 细胞毒T细胞被MHC -Ⅰ类复合物分子激活,CD4 辅助T细胞被MHC -Ⅱ类复合物激活。2.DC可以自身分泌或诱导其他细胞分泌IL -12、白介素15(IL -15)等...     

凋亡诱导配体TRAIL与细胞膜脂筏形成的关系

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与细胞膜微结构域脂筏的关系.方法:采用间接免疫荧光流式细胞 术,分析K562细胞表面TRAIL分子的表达.用FITC标记的霍乱毒素B亚单位(CTx)对K562细胞的脂筏进行染色;用抗FITC 单克隆抗体(mAb)交联脂筏后,以兔抗TRAIL分子抗体及Cy3标记的羊抗兔抗体进行间接免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜 分析TRAIL分子与脂筏微结构域的关系.结果:FITC CTx和抗FITCmAb可使脂筏发生交联.脂筏交联的同时TRAIL分子发生 聚集.动态观察表明,抗FITC抗体作用20min后,脂筏发生交联,作用30min时交联最明显;随着脂筏的交联,TRAIL分子发 生聚集.抗FITC抗体作用40min后,脂筏交联程度减弱,且TRAIL分子逐渐被排除于脂筏之外.结论:抗FITC抗体可用于 CTx FITC脂筏染色后脂筏交联的研究.TRAIL分子可能与细胞膜脂筏微结构域有关.     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。