survivin基因在胃癌中的表达

目的探讨凋亡抑制基因survivin在胃癌组织中的表达。方法应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫组织化学染色技术研究Survivin mRNA在胃癌及正常胃组织中的表达。结果8例胃癌及3例正常胃黏膜中Ssurvivin的表达,3例正常胃黏膜组织中survivin基因无表达,而在8例胃癌组织中survivin基因阳性表达5例,阳性率为63%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Survivin表达与胃癌组织的分化程度、淋巴结转移及肿瘤的TNM分期具有相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因在胃癌组织中表达率升高,提示Survivin对胃癌发生、发展起重要作用,其过度表达可能提示胃癌预后不良。检测胃癌组织中survivin基因的表达可作为评价胃癌生物学行为和判断预后的重要指标。     

胃癌中survivin MMP-9表达与血管生牡关系及对预后的影响

目的:探讨survivin、MMP-9蛋白的表达与癌间质微血管密度(MVD)的值的关系及其对胃癌预后的影响.方法:采用免疫组化S-P法,检测128例胃癌手术标本中survivin、MMP-9、CD34的表达.结果:128例胃癌组织中survivin、MMP-9阳性表达率和MVD分别为60.9%、64.1%、28.68±10.25,三者均与胃癌浸润深度、淋巴结转移、TNM分期密切相关(P＜0.05);survivin阳性表达和MVD与肿瘤组织分化程度和远处转移有关(P＜0.05);三者在胃癌中表达呈正相关(P＜0.05);survivin、MMP-9共同表达者组发生深度浸润(T3～4)与淋巴结转移的比率和MVD明显高于其中之一或二者皆阴性表达者 (P＜0.05);survivin、MMP-9蛋白阳性表达者术后生存率明显低于阴性者(P＜0.05).结论:survivin 、MMP-9与血管形成和胃癌生长、浸润、转移及预后均有密切相关,联合检测survivin、MMP-9、CD34表达可作为判断胃癌生物学行为和预后的重要指标.     

survivin基因检测在胃癌辅助诊断中的应用

目的:探讨survivin基因检测在胃癌辅助诊断中的应用价值.方法:收集49例胃癌组织及相应的癌旁非瘤胃组织标本,分别采用RT-PCR和IHC两种方法检测胃癌和癌旁组织中survivin mRNA和survivin蛋白的表达.结果:65.3%(32例)的胃癌组织survivin mRNA和63.3%(31例)的胃癌组织survivin蛋白表达阳性,而癌旁非瘤胃组织内survivin mRNA和survivin蛋白均无阳性表达;运用RT-PCR法较IHC法检测survivin表达的阳性率略高,但其差异无统计学意义(P＞0.05).结论:survivin在胃癌组织中表达上调,免疫组化和RT-PCR检测胃癌组织survivin基因的表达有望成为一种新的胃癌辅助诊断指标.     

多西他赛抑制胃癌MKN45细胞增殖的研究

目的: 探讨多西他赛治疗胃癌细胞的作用机制.方法: 采用不同浓度的多西他赛处理胃癌MKN45细胞后,四唑盐比色试验检测癌细胞生长,分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡,采用荧光实时定量PCR和Western blot检测存活素(survivin)基因mRNA、蛋白表达情况.结果: 多西他赛抑制胃癌MKN45细胞的恶性增殖,且呈浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示,多西他赛处理组出现凋亡现象,且呈浓度依赖性.多西他赛处理组存活素基因mRNA、蛋白表达下调,且呈时间和浓度依赖性.结论: 多西他赛体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖,与诱导凋亡,下调存活素基因表达有关.     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

目的探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义寡核苷酸转染对照组（Lip-SODN组）、ASODN转染组（Lip-ASODN组）。转染48 h后,Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0.05）,对多西他赛的IC50值明显低于各对照组（P〈0.05）,细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0.05）。结论survivin ASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。     

survivin反义寡核苷酸对人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤P53蛋白表达的影响

目的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）能否抑制人胃癌细胞皮下移植瘤生长,及与P53蛋白的关系。方法将对数生长期SGC-7901胃痛细胞种植到2只裸鼠皮下,形成母瘤,再分别种植于其他裸鼠背部皮下。成瘤后随机分为4组（survivin-ASODN＋脂质体绢、survivin—ASODN组、脂质体组、对照组,每组n=8）。瘤体内隔日给药,停药后48h处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。Westernblot法检测survivin的表达,免疫组化法检测各组P53蛋白的表达。结果survivin—ASODN＋脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为33．19％。survivin—ASODN＋脂质体组的survivin蛋白、P53蛋白表达量明显低于对照组（P〈0．05）。结论survivin—ASODN对胃癌移植瘤生长有抑制作用,能够抑制survivin蛋白的表达,亦能抑制P53蛋白的表达,P53在survivin抑制凋亡的信号通路中亦起到一定作用。     

siRNA沉默survivin对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用

目的: 探讨siRNA沉默survivin基因表达对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制,为胃癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法: 针对survivin　mRNA 序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建2个重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA-１和-２;实验分为脂质体对照、空质粒转染对照及survivin siRNA重组质粒转染治疗组,转染胃癌细胞SGC-7901,采用RT-PCR法检测survivin　mRNA的表达,Western blotting检测蛋白表达,观察重组质粒对其转染的SCG-7901细胞survivin基因表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果: Western blotting、RT-PCR结果证实转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1 的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率（78.25%及88.75%）均高于脂质体对照组（5%及2%）和空质粒对照组（1%及6%）（P<0.01）;转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-2的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率（42%及77%）也均高于脂质体对照组和空质粒对照组（P<0.01）;MTT法检测结果显示转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞体外生长的抑制率（64%）高于空质粒对照组（11%）（P<0.01）;流式细胞术检测的转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞凋亡率（21.20±3.21）高于脂质体对照组（0.830±0.001）和空质粒对照组（1.98±0.67）（P<0.01）。结论:重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin-siRNA可抑制胃癌细胞中survivin的表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。     

卡铂联合多西他赛化疗对宫颈癌组织中survivin蛋白表达的影响

目的:探讨卡铂联合多西他赛化疗对宫颈癌组织中survivin蛋白表达的影响。方法:对行手术治疗且临床分期为Ⅰb～Ⅱb期宫颈癌患者60例,RT-PCR检测化疗前后survivin蛋白,同时采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率。结果:化疗后suivivin表达明显下降,肿瘤细胞的凋亡明显增加。结论:卡铂联合多西他赛能有效治疗进展中的宫颈癌,survivin通路为其诸多作用通路中的一种。     

多西他赛联合顺铂氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的临床观察

目的：评价多西他赛联合顺铂、5-氟尿嘧啶（DCF）治疗晚期胃癌的临床疗效和毒性反应。方法：用DCF方案治疗晚期胃癌患者27例。结果：可评价疗效者27例，完全缓解（CR）2例，占7。4％；部分缓解（PR）14例，占51．8％；稳定（SD）8例，占29．6％；进展（PD）3例，占11.1％。总有效率（CR＋PR）为59．2％。中位肿瘤进展期（TTP）6.4个月，中位生存期（MST）10．2个月。主要不良反应为骨髓抑制、白细胞减少、胃肠道反应、恶心呕吐、腹泻、口腔炎，无治疗相关性死亡病例。结论：多西他赛联合顺铂、5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌临床缓解率较高，提高生存质量，不良反应可耐受，可以作为难治或复发的晚期胃癌一线治疗方案。     

胃癌细胞NF-κB和survivin的表达对 TRAIL抗瘤作用的影响

目的探讨胃癌细胞NF-cB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响.方法应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法,观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞凋亡率,Western blot方法分析四种胃癌细胞中NF-κB和survivin的表达.结果TRAIL300 ng/ml作用于胃癌细胞24 h后,胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-7901的凋亡率分别为36.05%、20.27%、16.50%和11.80%.Western blot结果显示SGC-7901细胞NF-κB、survivin的表达均高于MKN28细胞的表达.结论TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象,可能与凋亡抑制因子survivin和NF-κB的表达有关.     

食管癌组织中存活蛋白的异常表达

目的通过比较食管癌组织和癌旁组织中存活蛋白的表达情况,探讨凋亡抑制因子存活蛋白与食管癌之间的关系。方法 T-A克隆制备存活蛋白定量PCR标准品pTA/存活蛋白;采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和免疫组织化学法检测33例经病理证实的食管癌组织(实验组)及其相应的癌旁组织(对照组)中存活蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,并分析存活蛋白表达与食管癌临床病理特征间的关系。结果 FQ-PCR结果显示,实验组中存活蛋白的阳性表达率为81.82%(27/33),对照组中阳性表达率为39.40(14/33),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果在实验组和对照组中的阳性率与FQ-PCR结果一致,但对照组中的阳性细胞多为炎症细胞(非上皮细胞);存活蛋白的表达与患者年龄、性别及肿瘤分化程度无关(P>0.05),与肿瘤分期和淋巴结转移高度相关(P<0.05)。结论存活蛋白在食管癌组织中的阳性表达可能与肿瘤发生、浸润和淋巴结转移密切相关。     

胃癌腹腔冲洗液肝素酶和存活素的相关研究

目的探讨检测胃癌腹膜转移的方法。方法收集50例胃癌患者及8例胃良性病变患者的腹腔冲洗液。采用流式细胞术（FCM）检测胃癌患者术中腹腔冲洗液肝素酶（HPA）和存活素（Survivin）的表达情况,并采用薄层液基细胞制片术进行腹腔冲洗液细胞学（PLC）检查。结果 50例胃癌患者腹腔冲洗液中HPA阳性表达为52.0%（26/50）;Survivin阳性表达率58.0%（29/50）,HPA和Survivin联合检测阳性率为68.0%（34/50）,两者阳性率皆高于PLC 22.0%的阳性率（P〈0.01）;HPA的阳性率与浸润深度、组织分化程度以及TNM分期呈正相关;Survivin的阳性率与肿瘤浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关。8例良性病变患者腹腔冲洗液中HPA和Survivin无阳性表达。结论 （1）腹腔冲洗液HPA和Survivin的检测可作为判断肿瘤恶性程度和预后的一项指标。（2）FCM方法检测腹腔冲洗液HPA和Survivin可能成为临床预测胃癌腹膜转移的一种方法。     

人胃癌中Survivin基因的克隆及其剪切体的发现

目的：克隆人类抗凋亡基因survivin(SVV)。方法：提取胃癌细胞系SGC－7901总RNA，RT－PCR扩增人SVV全长cDNA，测序鉴定、原核表达。结果：得到两个SVV基因cDNA克隆，即SVV－S4A与SVV－S1B，前者与已知SVV基因cDNA序列相同，后者第3个外显子丢失。原核表达所获融合蛋白经SDS－PAGE电泳与已知SVV基因的蛋白质表达产物大小相近。结论：自人胃癌细胞中克隆出SVV基因的全长cDNA，并获得一个新的剪切体，实现了SVV基因在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。     

Survivin表达与胃癌的生物学行为

目的：研究胃癌组织中Survivin表达和临床病理因素的关系。方法：采用免疫组织化学S-P法检测20例正常胃黏膜及80例胃癌组织中Survivin表达。结果：20例正常胃粘膜Sruvivin均不表达,胃癌组织中Survivin阳性率为65％（52／80）,二者有显著性差异（P〈0．01）;Survivin表达与组织分化程度和TNM分期密切相关（P〈0．05）。结论：Survivin在胃癌中过表达,Survivin表达与胃癌的临床病理特征密切相关,Survivin可能是临床评价胃癌恶性程度的重要指标。     

新疆哈萨克族食管癌中survivin基因真核表达载体的构建

目的：探讨survivin基因真核表达载体的构建,研究它在新疆哈萨克族食管癌中的作用。方法：采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出survivin基因,经双酶切后、与真核表达载体pEGFP-N1相连后转入DH5a。结果：DNA测序证明获得了包含ORF全长的survivin基因,并成功克隆入真核表达载体pEGFP-N1中。结论：构建真核表达载体成功,为进一步探讨survivin基因在哈萨克族食管癌中的作用奠定了基础。     

miR-20b促进胃癌细胞增殖研究

目的：探讨miR-20b对胃癌细胞生长影响及其可能的机制。方法 miR-20b mimic和其特异的抑制剂分别转染胃癌MGC803细胞,二甲基四氮唑蓝（MTT）和流式细胞术检测miR-20b mimic和其特异抑制剂在细胞生长和细胞周期上的效应,western blot检测细胞周期因子的表达改变。结果在转染miR-20b后,胃癌细胞生长加快,而细胞周期则加快由G1向S期转换。而在转染miR-20 b抑制剂后,细胞生长能力明显降低,且细胞周期也出现G1/S转换障碍。机制分析显示,在抑制miR-20b表达后,细胞增殖相关因子c-Myc和细胞周期蛋白D1（ Cyclin D1,CCND1）表达减低,而抑癌因子p21和p15表达显著提高。结论 miR-20b作为oncomiRNA,其通过调节细胞周期相关因子的表达影响胃癌细胞增殖。     

Survivin ASODN诱导胃癌细胞凋亡并增强OPT化疗敏感性的研究

目的 探讨转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对BGC-823细胞survivin mRNA表达及细胞增殖,凋亡和对羟基喜树碱(OPT)化疗敏感性的影响.方法 脂质体转染survivin ASODN,MTT检测生长抑制率,流式细胞术(FCM)及电镜检测细胞凋亡,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 Survivin ASODN能抑制BGC-823细胞生长,促进其凋亡,并呈剂量依赖性.电镜下见BCC-823细胞呈早期凋亡改变.OFT处理组survivin mRNA表达明显高于对照组和ASODN OPT组(P<0.05).结论 Survivin ASODN可以抑制BGC-823细胞Survivin表达,诱导癌细胞凋亡并抑制其增殖.Survivin ASODN对OPT化疗有增敏作用,即使是多次给予OFF者仍可增敏.     

survivin在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的：探讨检测尿液中survivin对筛查膀胱癌的作用及组织中survivin表达与临床分期及病理分级的关系。方法：对10例膀胱癌患者（试验一组）晨尿和41例膀胱癌患者（试验二组）术后病理组织，分别以10例非肿瘤疾病患者（对照一组）和7例膀胱良性病变患者（对照二组）作为对照，ELISA法检测尿液中survivin，免疫组化法检测病理组织中survivin，比较试验一组和对照一组尿survivin浓度，分析两试验组尿survivin和膀胱癌组织中survivin相关性。结果：试验一组患者尿survivin浓度与对照一组的差异有显著性意义（P〈0．01）；两试验组患者尿survivin浓度和病理组织survivin免疫标记强度呈正相关（r=0．97，P〈0．01）；试验二组膀胱癌病理标本survivin标记强度与对照二组差异有显著性意义（P〈0．01）；不同分期、不同分级和不同复发时间的膀胱癌患者癌组织survivin标记强度不同（P〈0．05）；膀胱肿瘤临床床特征与组织survivin表达分析提示，肿瘤分期、分级和癌组织survivin表达量是预测患者复发的指标（P〈0．05）。结论：①检测尿survivin很可能是一种敏感性高、特异性强、无创、简便的膀胱癌群体筛查方法和术后随访检查方法。②组织中survivin表达量与膀胱癌分期、分级和复发相关，是预测膀胱癌复发的良好指标。     

survivin短发夹状RNA真核表达载体的构建及其对宫颈癌细胞survivin表达的影响

目的:构建survivin基因短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其对宫颈癌细胞survivin 表达的抑制作用.方法:设计、合成2对survivin特异性微小片段RNA引物(s1、s2),退火连接后利用DNA重组技术,将其分别克隆入真核表达载体pSilencer 2.1-U6 neo,酶切、鉴定测序后,经脂质体转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,半定量RT-PCR检测survivin mRNA表达,Western blot检测survivin蛋白表达.结果:成功构建了survivin shRNA真核表达载体pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2,G418筛选24 d后出现阳性克隆,转染pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2的HeLa细胞中,survivin表达呈现不同程度下调,pSilencer2.1-s2的干涉效果较好.结论:成功构建并筛选出干涉效果较好的survivin shRNA真核表达载体,为进一步研究其对宫颈癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础.