酶校准品在血清酶测定结果一致性中的应用

目的探讨在不同生化分析仪上检测常用血清酶[丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)]结果的可比性的方法。方法将自动化系统的校准物(cfas)中6个酶活性定值转移至新鲜混合血清,以该混合血清作为校准品,对同一批标本测定校准前后的6个酶活性。结果校准前,同一批标本在2台不同品牌仪器上测得的结果差异有极其显著性(P<0.001)。校准后,同一批标本在2台不同品牌仪器上测得的结果差异无显著性(P>0.05)。结论用cfas转移血清酶定值的新鲜混合血清作为校准品对不同检测系统进行校准,既保证了结果的可溯源性,又可以实现血清酶测定的一致性。     

不同检测系统血清丙氨酸氨基转移酶测定结果的一致性

目的探讨在不同分析仪上检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)结果的可比性的方法.方法通过cfas转移ALT定值至新鲜混合血清,以该混合血清作为校准品,对同一批标本测定校准前后的ALT结果.结果校准前,同一批标本在3台不同品牌仪器上测得的ALT值差异有极其显著性(P＜0.001).校准后,同一批标本在3台不同品牌仪器上测得的ALT值差异无显著性(P＞0.05).结论用cfas转移ALT定值的新鲜混合血清作为校准品对不同检测系统进行校准,可以实现ALT测定的一致性.     

不同检测系统血清丙氨酸氨基转移酶测定结果的一致性

目的　探讨在不同分析仪上检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)结果的可比性的方法。方法　通过cfas转 移ALT定值至新鲜混合血清,以该混合血清作为校准品,对同一批标本测定校准前后的ALT结果。结果　校准 前,同一批标本在3台不同品牌仪器上测得的ALT值差异有极其显著性(P<0.001)。校准后,同一批标本在3 台不同品牌仪器上测得的ALT值差异无显著性(P>0.05)。结论　用cfas转移ALT定值的新鲜混合血清作为 校准品对不同检测系统进行校准,可以实现ALT测定的一致性。     

酶测试系统校准的探讨

探讨在日立全自动生化分析仪上用宝灵曼的校准品(cfas)来校准各厂家试剂的可行性。选取AST、ALT、GGT、LDH四项酶 ,在Hitachi 70 6 0上用宝灵曼的校准品来校准宝灵曼的试剂所测定结果与宝灵曼校准品校准科华、中生、迈克三厂家试剂所测定结果进行比较。以及用校准后的宝灵曼测试系统定值的混合血清作为校准品 ,再来校准三厂家试剂所测定的结果进行比较。用cfas校准品直接校准三厂家试剂后所测得的结果与宝灵曼测试系统比较除中生的GGT、LDH外 ,其余均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。用校准后的宝灵曼测试系统定值的混合血清作为校准品 …     

校准品专用性的验证

目的：检测系统对校准品专用的要求。方法：在HITACHI 7170型自动生化分析仪上进行三酰甘油（TG）和尿素（Ur)测定时，使用罗氏（Roche)系统（HITACHI仪器，Roche试剂，cfas校准品和操作程序），日本第一化学（Daiichi)系统（HITACHI仪器，Daiichi试剂，校准品和操作程序）以及和光（Wako)系统（HITACHI仪器，Wako试剂，校准品和操作程序）对同一组病人血清样品作对比测定；将两系统的校准品互换后形成各自新系统，校准后对同组病人血清样品再作对比测定，又以1份用Roche系统测定均值的混合血清为临时校准品，去校准两系统后，再对同组病人血清作对比测定，互相比较。结果：两系统对病人样品测定结果间的比较，以混合血清为临时校准品的对比最好；其次为两系统的原有组合，各用自己的校准品校准的结果；最差的是互换校准品校准后的结果，结论：混合血清和检测的新鲜病人血清具有最相似的基本状态，所以检测系统间用混合血清校准后的病人检测结果可比性最佳。由于校准品和新鲜病人血清间有明显的基本差异，各检测系统必须使用专用的校准品，才能实现病人结果的可比性，校准品不能随意使用于任何检测系统。     

酶活性测定结果相对一致的可行性探讨

目的应用新鲜混合定值人血清作为校准品,探讨各医院之间临床常用酶[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)]活性测定结果相对一致的可行性。方法将cfas校准品中6个酶活性的定值传递给新鲜混合人血清,然后以此作为校准品,校准分析系统后再测定标本值。结果应用上述方法后,30所医院间6个酶活性测定结果的可比性明显提高,各级医院之间6个酶活性测定结果的平均变异系数(CV)显著下降,均值和定值亦趋向一致。结论应用新鲜混合定值人血清作为校准品,使各医院之间酶活性测定结果相对一致是可行的。     

酶活性测定结果相对一致的可行性探讨

目的　应用新鲜混合定值人血清作为校准品,探讨各医院之间临床常用酶[丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ 谷氨酰基转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸 激酶(CK)]活性测定结果相对一致的可行性。方法　将cfas校准品中6个酶活性的定值传递给新鲜混合人血 清,然后以此作为校准品,校准分析系统后再测定标本值。结果　应用上述方法后,30所医院间6个酶活性测定 结果的可比性明显提高,各级医院之间6个酶活性测定结果的平均变异系数(CV)显著下降,均值和定值亦趋向 一致。结论　应用新鲜混合定值人血清作为校准品,使各医院之间酶活性测定结果相对一致是可行的。     

采用因子与校准品校准在血清酶检测中的应用比较

目的 探讨因子与校准品校准在血清酶检测中的差异。方法 应用速率法,采用因子校准与校准品校准2种校准方式,对肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）等5种酶进行检测,室内定值质控血清批内各测20次,随机标本50份分别进行检测,在1h内完成,对2种校准结果进行比较。结果 CK、LDH、ALT、AST、GGT表现为因子校准结果明显低于校准品校准结果。室内定值质控血清因子校准均值分别为CK191．4U／L、LDH178．5U／L、ALT29．0U／L、AST32．8U／L、GGT50．6U／L,校准品校准均值分别为CK212．2U／L、LDH183．4U／L、ALT32．0U／L、AST35．4U／L、GGT55．9U／L;随机标本检测因子校准均值分别为CK110．6U／L、LDH208．1U／L、ALT80．3U／L、AST99．8U／L、GGT84．1U／L,校准品校准均值分别为CK133．2U／L、LDH215．0U／L、ALT95．8U／L、AST115．6U／L、GGT94．8U／L。两法比较差异有统计学意义（P均〈0．001）。结论 通过对定值质控血清及随机标本所测酶结果的分析,认为酶活性检测因子校准有较大的系统误差,校准品校准能更好地反映结果的准确性。     

患者新鲜混合血清作为临时校准液校正非配套检测系统

目的患者新鲜混合血清作为校准液用于非配套检测系统7170A全自动生化分析仪的溯源性分析。方法以拜耳试剂及程序、校准品、质控品、拜耳2400全自动生化分析仪为标准检测系统,用罗氏cfas校准品的标准值直接校准日立7170A／N德曼试剂检测系统;然后以新鲜患者混合血清作为临时校准品,罗氏cfas校准品经标准系统准确度传递后,把罗氏cfas校准品的标示值转换为校正“日立7170A／利德曼试剂”测定系统的实际校正值,再用此值校正日立7170A／利德曼试剂系统,在上述两种检测系统上同时测定40份患者新鲜血清的尿素（UREA）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肌酸激酶（cK）、糖（Glu）、清蛋白（ALB）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、总胆红素（TBIL）、总胆固醇（TC）,并对所得结果进行线性回归分析。结果罗氏cfas校准品的标示值经标准检测系统准确度传递后,直接校正日立7170A／利德曼试剂系统时,各指标的均值与标准系统的均值相对偏倚分别为1．65％、2．61％、3．11％、2．05％、1．30％、3．45％、2．02％、3．90％、2．94％。各指标均值相对偏倚均小于1／2CLIA’88,同时线性回归良好。结论患者新鲜混合血清作为临时校准品,经过标准系统准确度传递后可用于校正非配套检测系统。     

校准品专用性的验证

目的检测系统对校准品专用的要求.方法在HITACHI 7170型自动生化分析仪上进行三酰甘油(TG)和尿素(Ur)测定时,使用罗氏(Roche)系统(HITACHI仪器、Roche试剂、cfas校准品和操作程序),日本第一化学(Daiichi)系统(HITACHI仪器,Daiichi试剂、校准品和操作程序)以及和光(Wako)系统(HITACHI仪器,Wako试剂、校准品和操作程序)对同一组病人血清样品作对比测定;将两系统的校准品互换后形成各自新系统,校准后对同组病人血清样品再作对比测定;又以1份用Roche系统测定均值的混合血清为临时校准品,去校准两系统后,再对同组病人血清作对比测定、互相比较.结果两系统对病人样品测定结果间的比较,以混合血清为临时校准品的对比最好;其次为两系统的原有组合,各用自己的校准品校准的结果;最差的是互换校准品校准后的结果.结论混合血清和检测的新鲜病人血清具有最相似的基本状态,所以检测系统间用混合血清校准后的病人检测结果可比性最佳.由于校准品和新鲜病人血清间有明显的基体差异,各检测系统必须使用专用的校准品,才能实现病人结果的可比性.校准品不能随意使用于任何检测系统.     

酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

目的建立一种测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的酶偶联法。方法血清与底物马尿酸双甘肽（ＨｉｐＧｌｙＧｌｙ）混合温育３０分钟，生成马尿酸（Ｈｉｐ）与双甘肽（ＧｌｙＧｌｙ），再加入Ｌγ谷氨酰３羧基４硝基苯胺（ＧＧＣＮ）和γ谷氨酰基转移酶（ＧＧＴ），催化ＧＧＣＮ与ＧｌｙＧｌｙ偶联，产生的３羧基４硝基苯胺于４１０ｎｍ波长测定其吸收度。结果当底物ｐＨ８０，ＧＧＣＮ１０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＧＴ６７ｋＵ／Ｌ时，ＡＣＥ活性与吸收度值有良好线性。５５份健康人血清ＡＣＥ（ｘ±ｓ）２８９±８３Ｕ／Ｌ，ＣＶ：批内４６％；批间４８％。１０份肉样瘤患者血清ＡＣＥ（ｘ±ｓ）７４８±３４９Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ３９％，回收率９６％～１０３％。结论酶偶联法测定ＡＣＥ活性具有操作简便、迅速、重复性好，适用于手工操作或自动化分析，可用于诊断早期肺损伤和人类免疫缺陷病毒感染。     

酶校正品在血清酶测定中的应用

目的　应用酶校正品校准不同的“仪器/试剂”测定系统,观察系统间血清酶测定结果的可比性。方法 　以“日立仪器/cfas/罗氏试剂”为参照系统,用cfas对各系统作校正,测定科华及中生试剂在校正前、后的比例误 差与恒定误差。结果　科华丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ 谷氨酰基转移酶(GGT)的 比例误差由校正前-17.7%、8.5%、-26.1%变为5.2%、4.1%、0%;恒定误差则由校正前-1.494U/L、-7.290 U/L、2.620U/L变为-2.326U/L、-4.461U/L、4.856U/L;中生ALT、AST、GGT的比例误差由校正前-31.4%、 -23.9%、-27.8%变为-9.3%、-13.4%、-6.7%;恒定误差则由校正前0.0001U/L、-0.451U/L、0.035U/L 变为0.956U/L、3.727U/L、2.236U/L。结论　各系统经校正后的测定结果更接近于参照系统测定值但仍存在一 定的系统误差,需要将系统间存在的比例误差及恒定误差进行校正才能与参照系统的结果相一致。     

酶校正品在血清酶测定中的应用

目的应用酶校正品校准不同的“仪器／试剂”测定系统,观察系统间血清酶测定结果的可比性。方法以“日立仪器／cfas罗氏试剂”为参照系统,用cfas对各系统作校正,测定科华及中生试剂在校正前、后的比例误差与恒定误差。结果科华丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)的比例误差由校正前-17．7％、8．5％、-26．1％变为5．2％、4．1％、0％;恒定误差则由校正前-1．494U／L、-7．290U／L、2．620U／L变为-2．326U／L、-4．461U／L、4．856U／L;中生ALT、AST、GGT的比例误差由校正前-31．4％、-23．9％、-27．8％变为-9．3％、-13．4％、-6．7％;恒定误差则由校正前0．0001U／L、-0．451U／L、0．035U／L变为0．956U／L、3．727U／L、2．236U／L。结论各系统经校正后的测定结果更接近于参照系统测定值但仍存在一定的系统误差．需要将系统间存在的比例误差及恒审误差进行校正才能与参照系统的结果相一致．     

Inhibition of endogenous pancreatic enzyme secretion by oral pancreatic enzyme treatment

BACKGROUND: The existence of a feedback mechanism for exocrine pancreatic secretion in humans is controversial. Exclusion of proteases from the duodenum stimulates exocrine pancreatic secretion. Conversely, addition of exogenous enzymes could reduce the enzyme secretion. Further investigation of the feedback mechanism should be performed under the most physiological conditions. In the present study we investigated exocrine pancreatic function by measuring fecal enzyme output in healthy volunteers consuming a normal diet, before and during a time course of exogenous pancreatic enzyme supplementation. MATERIAL AND METHODS: Twenty-five healthy subjects (HS) were given two different doses (30 and 60 FIP proteases kg(-1) d(-1)) divided by the number of meals. In all subjects, fecal elastase-1 (E1) concentrations and chymotrypsin (ChT) activities were measured without and with enzyme supplements after 7 days of treatment. In eight subjects, E1 concentrations and ChT activities were measured daily for 10 consecutive days. The subjects were given a dose regimen of 100 FIP proteases kg(-1) d(-1)(divided by the number of meals) for the first 7 days. RESULTS: Oral pancreatic treatment dose-dependently inhibited endogenous pancreatic secretion measured with the use of E1 concentrations. In both regimen groups, the differences were statistically significant. The exogenous enzymes, which interfere with colorimetric method for ChT, dose-dependently increased ChT output. However, only the higher dose resulted in a statistically significant difference. In the subgroup of eight HS, time-dependent changes of fecal enzyme output occurred with a decrease of E1 concentrations and an increase of ChT activity from the second up to eighth or ninth day of the experiment. CONCLUSION: Exogenous applied pancreatic enzymes, dose- and time-dependently inhibited endogenous pancreatic secretion. The obtained results strongly support the existence of a protease mediated feedback mechanism in humans.     

全自动酶联免疫检测仪与手工酶联免疫检测的比对评价

目的评价Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫仪与手工操作后BIO-RAD680酶标仪检测临床标本结果的一致性。方法用高浓度的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）了解仪器的交叉污染情况,采用1IU/mL的HBsAg质控血清检测其孔间重复性和板间重复性,随机抽取50份临床标本经该仪器和手工加样操作BIORAD680酶标仪测定乙型肝炎病毒5项指标,测定结果进行比对。结果经试验该酶联免疫仪器的拖带污染在低水平,与手工操作比对50个项目指标检测结果总的符合率达96.4%。结论该仪器可以满足临床实验需要。     

Cell type-selective targeted delivery of a recombinant lysosomal enzyme for enzyme therapies

1. Download : Download high-res image (271KB)
2. Download : Download full-size image

     

Homogeneous enzyme immunoassay for macromolecular antigens using avidin biotin enzyme

A unique homogeneous enzyme immunoassay used for the determination of haptens and macromolecular antigens has been developed. It consists of avidin–antigen conjugate, anti-ligand antibody, and biotin enzyme (propionyl-CoA carboxylase). The immunological reaction of the conjugate with antibodies specific to ligand sterically prevents enzyme inactivation by avidin. Goat IgG and theophylline were used as model antigens. Avidin–theophylline conjugate inhibited 100% of enzyme activity. Avidin goat IgG conjugate inhibited 90% of enzyme activity. In this method, the measurable range of theophylline was from 500 ng/ml to 50 μg/ml, and for goat IgG, it was 1–1000 μg/ml.