HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响

目的 探讨HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响. 方法 采用MTT法检测HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖能力的影响;采用Western blot检测不同浓度的HSP90抑制剂17-AAG(0.001,0.01,0.1,1.0,10.0 μmol/L)对人多发性骨髓瘤细胞中HSP90蛋白表达水平的影响. 结果 HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞有剂量依赖性的增殖抑制作用(P＜0.05),无时间依赖性的增殖抑制作用(P＞0.05).随着药物浓度的增加,HSP90蛋白水平的表达也逐渐下降. 结论 HSP90抑制剂能剂量依赖性抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖能力,同时下调人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞中HSP90蛋白水平的表达.     

熊果酸对多发性骨髓瘤细胞株U266的凋亡作用及机制

目的 探讨三萜类化合物熊果酸（ursoIic acid,UA）对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞株U266的凋亡诱导作用及分子机制.方法 用熊果酸处理U266细胞,Cell Counting Kit-8法检测细胞增殖抑制情况;用20μmol/L熊果酸处理U266细胞24 h,瑞氏法染色后在光学显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin-V标记,在流式细胞仪上检测细胞凋亡率变化;用实时荧光定量PCR方法及Western blot方法检测FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC及p53的表达变化.结果 经熊果酸处理后,U266细胞的增殖受到抑制,光学显微镜下可观察到细胞形态不规则样改变,胞膜小泡状形成,细胞质内空泡增多,细胞核染色质浓缩、固缩;流式细胞术检测Annexin-V阳性细胞比例随用药浓度增加及用药时间延长而增加;细胞内FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC的mRNA和蛋白质表达随用药浓度增加及用药时间延长呈显著下降趋势,而p53的mRNA及蛋白表达逐渐增高.结论 熊果酸可抑制U266细胞的增殖并诱导其凋亡,体外有抗多发性骨髓瘤细胞作用,为多发性骨髓瘤选择新的靶向治疗方案提供实验依据.     

MiR-17-3P对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:探究miR-17-3P对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-17-3P在MM细胞系RPMI 8226、U266和KM3及正常人骨髓细胞中的表达情况。合成miR-17-3P模拟物和抑制物,分别转染U266细胞,采用MTT法测细胞活力,PI染色流式细胞仪测细胞周期,观察U266细胞增殖情况。结果:MM细胞株RPMI8226、U266、KM3中miR-17-3P相对表达量均明显高于正常人骨髓细胞;利用模拟物上调miR-17-3P后,U266的细胞活力较对照组明显提高,48h时作用效果最为显著;相反,下调miR-17-3P后,U266的细胞活力降低;上调miR-17-3P后,G1期细胞比例较对照组有所减少,S期细胞比例明显增多;相反,下调miR-17-3P后,细胞多被阻滞在G1期。结论:Mi R-17-3P可能促进多发性骨髓瘤细胞增殖。     

白凤菜总黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡影响

目的 观察白凤菜总黄酮(TFG)对多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响。方法 MTT实验检测U266细胞增殖;倒置显微镜及荧光显微镜分别观察U266细胞经TFG处理24 h后细胞形态及凋亡的变化;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 TFG明显抑制U266细胞的增殖,P<0.05,且呈浓度和时间依赖性;100 μg /mLTFG作用组的U266细胞凋亡明显增加;TFG使U266细胞周期阻滞于S期。结论 TFG可抑制U266细胞增殖,可能同细胞周期的捕获和细胞凋亡的诱导相关。     

蛋白酶体抑制剂治疗多发性骨髓瘤临床观察

目的探讨蛋白酶体抑制剂治疗多发性骨髓瘤的临床疗效。方法选取2010年6月-2012年1月采用传统VADT方案进行治疗的15例多发性骨髓瘤患者为对照组,同期采用以蛋白酶体抑制剂为主VDT方案进行治疗的15例患者为观察组,将两组治疗总有效率、不良反应发生率及血红蛋白增高20 g/L及以上者比例、骨髓浆细胞降至5%以下者比例进行比较。结果观察组的治疗总有效率和血红蛋白增高20 g/L及以上、骨髓浆细胞降至5%以下者比例均高于对照组,不良反应发生率低于对照组,P均<0.05,差异有统计学意义。结论蛋白酶体抑制剂治疗多发性骨髓瘤的临床疗效好,安全性也较受认可,优势明显。     

蛋白酶体抑制剂在多发性骨髓瘤中耐药的研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种高度异质性恶性浆细胞疾病.蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitors,PIs)是治疗MM的一线药物,硼替佐米、伊莎佐米和卡非佐米也广泛应用于MM的治疗中,marizomib、奥泼佐米和KZR-616正在临床试验中.然而,PIs在MM中仍存在耐药...     

siRNA干扰HSP90α表达对人肝癌HepG2细胞影响的研究

目的用RNA干扰方法建立稳定的热休克蛋白90α(HSP90α)抑制表达细胞株,研究热休克蛋白90α抑制表达对人肝癌HepG2细胞生物学行为的影响。方法将人HSP90αRNA干扰基因片段连接入pSilencer 2.1-U6 neo载体,重组质粒pSilencerHSP90经亚克隆、纯化、测序鉴定后,用电穿孔法转染到人肝癌细胞系HepG2细胞内。经G418筛选后,阳性克隆被进一步分离培养,形成稳定的HSP90α抑制表达细胞株。将此细胞株作为siRNA干扰组,将未转染的HepG2细胞作为对照组。用荧光定量PCR,免疫印迹检测siRNA对HSP90α的抑制效果,采用CCK-8法测定其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。结果测序表明HSP90α干扰序列完全正确;siRNA干扰组HSP90αmRNA水平降低,蛋白表达量也有明显的减少;与对照组相比,siRNA干扰组在48 h后可明显抑制细胞增殖,流式细胞术检测siRNA干扰组细胞有明显的G2/M期细胞周期阻滞。结论建立稳定低表达HSP90α的HepG2细胞株;下调HepG2细胞内HSP90α的基因表达可抑制细胞增殖,引起明显的细胞周期阻滞。HSP90α靶向siRNA干扰为肝癌的基因治疗提供了可能。     

HSP90α、HSP90β在人胃癌组织中的表达

目的 探讨HSP90α、HSP90β蛋白与mRNA在人胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法 采用免疫组化SP法检测两者蛋白在胃癌组织及癌旁正常组织的表达.采用RT-PCR法检测两者的mRNA在胃癌组织及癌旁正常组织的表达.结果 HSP90α、HSP90β主要定位于细胞质,其阳性率分别为82.9％和80.0％ (P ＜0.01),与胃癌分化、浸润、分期、转移相关.HSP90α、HSP90β mRNA在胃癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),并与胃癌的分化、分期、淋巴结的转移相关.结论 HSP90α、HSP90β蛋白在胃癌组织中的阳性表达以及其与胃癌生物学行为的关系提示HSP90α、HSP90β可能作为判断胃癌恶性程度的重要指标.HSP90α、HSP90β mRNA的高表达,且两者均与胃癌的发生、发展关系密切,可能与胃癌组织中的转录调控相关.     

金黄色葡萄球菌对U937细胞HSP90蛋白表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡以及热休克蛋白90（HSP90）在这一过程中的作用。方法当U937：金葡菌分别为0,1∶5,1∶10,1∶20,1∶50和1∶100时,培养30min;当U937：金葡菌为1∶20时,分别培养0,15,30,60和90min。采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡率;采用Western blot方法检测HSP90蛋白的表达。结果U937细胞凋亡率随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐增高;HSP90的表达随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐升高。结论金葡菌诱导的U937的凋亡可能与HSP90蛋白表达的改变有关,并且具有感染时间及细菌浓度依赖性。     

MutT同系物1抑制剂对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探索MutT同系物1(MTH1)抑制剂对多发性骨髓瘤(MM)细胞增值和凋亡的影响.方法:用0.0、1.5、3.0、6.0、10.0μmol/L的MTH1抑制剂TH588处理多发性骨髓瘤U266细胞,用Multiskan FC酶标仪测定各时间点每孔悬液的荧光强度,用Trizol试剂提取RNA进行反转录,Q-PCR扩...     

HSP90的抑制剂Geldanamycin对乳腺癌细胞侵袭、转移能力的影响

目的：探讨HSP90抑制剂Geldanamycin（GA）对高转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435s侵袭、转移能力的影响。方法：噻唑兰比色（MTT）法检测两株细胞对人工基底膜（Matrigel）的粘附能力变化；Transwell Chamber体外侵袭运动实验研究GA处理前后MDA-MB-231、MDA-MB-435s细胞侵袭、运动能力的改变。结果：GA处理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞的粘附、侵袭、运动能力与未处理组细胞相比均明显下降，差异具有显著性（P〈0．05和P〈0．01）。结论：HSP90抑制剂Geldanamycin（GA）能够明显抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435s粘附、侵袭和运动能力。     

HSP90表达对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究HSP90的表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性.方法采用RT-PCR和Western blot检测HSP90在MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达差异.Transwell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测经HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)处理前后两株细胞侵袭迁移能力的改变.结果MDA-MB-435s细胞中HSP90α的mRNA表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01),MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中HSP90β的mRNA表达水平没有明显差异(P＞0.05),MDA-MB-435s细胞中HSP90的蛋白质表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01).两株细胞用药前侵袭迁移能力无明显差异(P＞0.05),HSP90的抑制剂GA对MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力均呈现明显抑制作用(P＜0.01,P＜0.05),对MDA-MB-435s细胞的抑制作用更明显(P＜0.01).结论HSP90的表达影响乳腺癌细胞侵袭转移能力.     

HSP70、HSP90在肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的 分析HSPT0、HSP90在肾细胞癌组织中表达的意义.方法 用免疫组化S-P法检测32例肾细胞癌组织标本中HSP70、HSP90的表达情况.结果 肾细胞癌组织中HSP70、HSP90表达阳性率分别为90.6%(29/32)、84.4%(27/32),明显高于正常肾组织,差异有统计学意义(P<0.05);但其表达程度与肾细胞癌临床分期及细胞类型无明显相关性(P>0.05).结论 HSPT0、HSP90高表达在肾细胞癌的发生、发展中具有促进作用.     

HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对粘附侵袭能力的影响

目的:研究热休克蛋白(HeatShockProtein,HSP)90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对该细胞粘附侵袭能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:体外培养ZR-75-30乳腺癌细胞株,以HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)作用处理;免疫印迹技术(Western-blot)检测GA处理前后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达情况;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对ZR-75-30细胞的增殖抑制作用;噻唑兰比色(MTT)法检测细胞对人工基底膜(Matrigel)的粘附能力变化;TranswellCham-ber法观察癌细胞侵袭、迁移能力的改变。结果:HSP90抑制剂GA对ZR-75-30细胞具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA作用后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中表达明显下降;HSP90抑制剂GA处理的乳腺癌细胞ZR-75-30的粘附率较未加GA的对照组下降明显(P<0.01);在GA未处理对照组侵袭、迁移实验穿膜细胞数分别为95.4±5.2,103±15.4与GA处理实验组穿膜细胞数46.2±4.9,52.4±8.4相比具有显著性差异(P<0.01)。结论:通过抑制HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达,GA能明显减弱乳腺癌细胞株ZR-75-30增殖粘附侵袭能力,HSP90与乳腺癌细胞增殖侵袭转移能力相关。     

肽聚葡糖对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖的影响

目的研究浆细胞异常增生的多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞在受到肽聚葡糖（peptidoglycan,PGN）刺激后对细胞增殖的影响。方法利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析MM U266细胞株TLR2、IL-1β、IL-8、NF-κB、Stat3和TNF蛋白的mRNA水平,与23名正常人单个核细胞（peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs）mRNA比较。20μg/ml PGN与U266细胞共培养,分析TLR2和NF-κB蛋白mRNA的变化情况。Western印迹法检测该药对U266细胞NF-κB蛋白的影响。MTT、流式细胞术检测PGN刺激U266后增殖情况。结果与PBMCs相比,TLR2、IL-8、TNF在U266中表达显著降低,而NF-κB表达增加（P〈0.05）。经PGN作用后,TLR2、NF-κB mRNA表达均增加,Western印迹法检测NF-κB蛋白表达明显增多。MTTT及细胞周期检测发现,PGN可使细胞由G_0/G_1期向前推进,促进细胞有丝分裂及增殖。结论PGN可能通过激活NF-κB通路促进U266增殖。     

酪氨酸激酶抑制剂抑制骨髓瘤细胞的增殖及黏附

目的 观察酪氨酸激酶抑制剂ST1571对骨髓瘤细胞系RPM18226细胞增殖、黏附以及黏附诱导耐药的影响。方法该试验采用MTT法检测ST1571对骨髓瘤细胞增殖的影响；流式细胞仪检测对细胞周期的影响；结晶紫染色法分析RPM18226细胞与纤连蛋白（fibronectin，FN）的黏附率；MTT法检测ST1571对瘤细胞耐药的影响；结果ST1571明显抑制KPM18226细胞的增殖，24、48和72hIC50值分别为（34．52&#177;2．31）、（28．46&#177;1．58）和（25．74&#177;2．44）μmol／L。25μmol／L ST1571处理24h，G1期细胞由55．8％增加至72．4‰S期细胞由34．8％减至15．6％。KPM18226细胞与FN黏附1、6和12h，其黏附率分别为（43．71％&#177;2．18％）、（55．63％&#177;1．56％）和（63．42％&#177;2．46％）；非抑制浓度ST1571（20μmol／L）处理1、6和12h后黏附率分别降为（15．12&#177;1．04）％、（17．58&#177;1．32）％和（17．24&#177;1．59）％；组间差异有显著性（P〈0．05）；阿霉毒作用后，FN黏附组细胞IC50值[（1．46&#177;O．04）μmol／L]显著高于BSA组[（0．78&#177;0．03）μmol／L]（P〈0．05）；FN联合ST1571组IC50值[（0．81&#177;0．05）μmol／L]与BSA联合ST1571组[（0．74&#177;0．02）μmol／L]相比差异无显著性（P〉0．05），但却低于FN组（P〈0．05）。结论ST1571能抑制KPM18226细胞的增殖、并可降低KPM18226细胞与FN的黏附率及逆转黏附介导的阿霉素耐药。     

多发性骨髓瘤的基因表达谱分析

目的 :研究MM患者与正常人骨髓基因的差异表达。方法 :应用cDNA芯片技术对 1 0例初诊多发性骨髓 (MM)患者和 1 0名正常骨髓的单个核细胞的mRNA进行检测。结果 :在 2 0 4 8条基因中共发现差异表达基因5 6 6条。在MM中 2 37条表达增加 ,32 9条表达降低。结论 :MM的发生发展涉及多基因的改变 ,cDNA芯片技术可高效研究多个基因的表达水平