用流式细胞术研究中药对白念珠菌的抗菌作用

目的 应用流式细胞仪测定中药有效成分小檗碱、黄芩甙、丁香酚和姜黄素对白念珠菌细胞周期的影响。方法 将白念珠菌培养在含不同药物浓度的YEPD培养基中，培养48h，流式细胞仪检测细胞生长周期、DNA荧光强度和细胞体积大小。结果 4种抗真菌中药有效成分对白念珠菌细胞生长周期有不同程度的影响，随着药物浓度的增高，其处于S-G2-M期的细胞比率越低，亦即细胞分裂受抑制越明显。在含药物培养基中生长的真菌细胞的荧光强度减弱，反映了细胞DNA片段的丢失，并随着药物浓度的升高，荧光强度减弱越明显，反映细胞体积大小、折光度和颗粒度的散点图向下和向左移动，随着药物浓度的升高，这种图形变化越明显。结论 中药单体通过抑制细胞分裂发挥抗真菌作用，流式细胞仪可用于抗真菌药物敏感性测定。     

白念珠菌的药物敏感性与基因型的研究

目的 探讨甲紫等5种抗真菌药物对白念珠菌的药物敏感性,分析白念珠菌药物敏感性与其基因型的关系。 方法 根据M27－A2方案检测甲紫、两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑对67株白念珠菌的药物敏感性。提取白念珠菌基因组DNA,应用PCR扩增白念珠菌25S核糖体 rDNA基因内含子区,根据PCR扩增片段将白念珠菌分为A（36株）、B（23株）、C（8株）基因型,分析白念珠菌不同基因型与药物敏感性的关系。结果 药敏实验结果显示,67株白念珠菌中,8.96%对氟康唑、2.98%对伊曲康唑、1.49%对酮康唑耐药,两性霉素B无耐药菌株。甲紫的最低抑菌浓度在0.125 ~ 4 mg/L。统计学分析显示,白念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性与其基因型无明显相关关系,P值均 > 0.05。结论 氟康唑和伊曲康唑耐药菌株的增多在临床用药选择上应引起注意,甲紫的抗真菌作用值得重视。白念珠菌基因型与抗真菌药物耐药的发生可能无明显相关关系。     

中药干预白念珠菌的实验研究进展

中药抗真菌作用研究历史悠久,从天然中药中寻找筛选抗真菌新药或研发针对耐药白念珠菌的药物,是近年研究的热点.本文对中药活性成分、中药单体和中药复方对白念珠菌的干预作用实验研究进展方面进行了综述.     

念珠菌生物膜体外抗真菌药物敏感性研究

随着医疗技术的不断进步，各种体内装置的应用明显增加，如静脉插管、人工心脏瓣膜、关节置换术等。这些装置均可作为微生物的附着物而形成一种由单层或多层细胞粘附到这些生物材料基质的表面生长的生物膜结构犤１犦。生长在生物膜中的念珠菌在其表型上与悬浮的念珠菌有着很大的不同，其中最主要的特点是对许多抗真菌药物的敏感性降低甚至产生耐药犤２犦。本文介绍一种快速，简单的９６孔微量培养皿方法形成念珠菌生物膜的体外模型，用分光光度计通过测定甲基四氮盐XTT狖２，３－二（２－甲氧－４－硝基－５－硫苯基）－５－犤（氨苯基）…     

中药单体成分抗白念珠菌实验的研究进展

 近年来随着激素、生物制剂的广泛使用以及HIV、癌症发病率的升高,免疫低下人群逐渐增多,条件致病菌白念珠菌的感染逐年增多,其对抗真菌药物的耐药作用也日渐突出。中药单体成分具有良好的抗真菌作用,毒副作用小,可与抗真菌药物协同作用,降低真菌耐药性,越来越引起重视。本文就中药单体成分小檗碱、黄芩苷、苦参碱等抗白念珠菌的相关实验研究进展作一综述。      

生殖器白念珠菌的体外药敏试验与临床疗效分析

近年来生殖器白念珠菌感染逐渐增多,随着多种抗真菌药物的使用,耐药菌株亦随之出现.我们选择生殖器念珠菌病的主要致病菌白念珠菌,做了伊曲康唑等4种抗真菌药物的体外敏感性测定,同时观察了伊曲康唑与特比萘芬2种抗真菌药物的临床疗效,以进一步了解白念珠菌对抗真菌药物的敏感性及药敏试验结果对临床的指导意义.     

性病门诊5年中可疑念珠菌性外阴阴道炎患者念珠菌流行病学调查及耐药性监测

目的：研究疑似外阴阴道炎患者念珠菌菌种的分布及对氟康唑和伊曲康唑的药物敏感性监测。方法：常规分离菌株并鉴定，药敏采用E—test方法测定念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果：阴道分泌物分离念珠菌419例，其中：自念珠闲348株（83．1％），光滑念珠菌35株（8．4％），近平滑念珠菌17株（4％），热带念珠菌8株（2％），清消念珠菌4株（1％），克柔念珠菌5株（1％）。419株中对氟康唑、伊曲康唑耐药分别有13株（3％）、66株（16％），双重耐药7株占2％。结论：在疑似念珠菌性外阴阴道炎（VVC）患者分离的念珠菌中，仍以白念珠菌为优势菌株。念珠菌对伊曲康唑和氟康唑的耐药显示逐年增高趋势，不同念珠菌对常川抗真菌药物敏感性存在差异，部分菌种存在交叉耐药，非白念珠菌交叉耐药明显高于白念珠菌。     

50种中药提取物体外抗菌活性研究

目的研究紫草、肉桂、清明花、白钩藤、两面针、云南红豆杉、青牛胆、傣百解、定心藤、黑皮跌打、断肠草、茶、花椒等50种中药提取物的体外抗菌作用,为临床治疗提供新思路和方法。方法用K-B纸片法筛选50种中药提取物对淋球菌、金黄色葡萄球菌、白念珠菌、光滑念珠菌、新型隐球菌的体外抗菌活性,用肉汤倍比稀释法和琼脂稀释法测出有抗菌活性的中药提取物对以上几种菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果在1mg/ml浓度下,紫草素、桂皮醛表现出抗菌活性,其他提取物无抗菌活性。紫草素对金黄色葡萄球菌的MIC为7.81μg/ml,对白念珠菌、光滑念珠菌、新型隐球菌的MIC均为15.63μg/ml,对淋球菌MIC为1 mg/ml。桂皮醛对金黄色葡萄球菌MIC为160μg/ml,对白念珠菌、光滑念珠菌最小抑菌浓度均为250μg/ml,对淋球菌、新型隐球菌无抗菌作用。结论紫草素和桂皮醛具有体外抗菌活性,为药物开发提供参考。     

氢化可的松影响白念珠菌对抗真菌药物敏感性的实验研究

糖皮质激素（下称激素）的长期应用是深部真菌感染的诱发因素之一，常需同时使用抗真菌药物。两类药物之间在体内代谢以及直接作用于真菌过程中均存在相互影响。白念珠菌是最常见的致病菌种之一，亦是长期使用激素患者最常见的条件致病菌，在深部念珠菌感染患者中常同时使用激素与抗真菌药物将不可避免，氢化可的松是否影响白念珠菌对抗真菌药物的敏感性尚无报道。现将我们的研究结果，报道如下。     

中药洗剂联合联苯苄唑凝胶治疗白念珠菌包皮龟头炎疗效观察

白念珠菌包皮龟头炎临床上常见,传统治疗方法大多采用抗真菌药物口服和（或）外用,易反复发作,口服药常引起胃肠道反应,影响患者的生活质量。笔者采用中药洗剂联合联苯苄唑凝胶（商品名：必伏,重庆华邦制药股份有限公司）,对46例白念珠菌包皮龟头炎进行治疗,获得满意疗效,现报告如下。     

粘附式细胞仪测试念珠菌DNA荧光强度的研究

为了探讨ＤＮＡ含量在真菌分类和菌种鉴定中的作用，我们用粘附式细胞仪测定了对数生长期的白念珠菌，热带念珠菌，季也蒙念珠菌细胞内ＤＮＡ荧光强度。结果显示；综合荧光值种间比较，无种间特异性。平均荧光值具有种间特异性，同种不同株的白念珠菌间比较，无显著性差异。     

复发性阴道念珠菌病念珠菌的菌种及药敏分析

目的：了解复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)临床分离菌株及其对几种常见抗真菌药物的敏感性：方法：分别采用念珠菌显色培养基和ROSCO纸片扩散法进行RVVC念珠菌菌种鉴定和药敏试验。结果：62株阳性标本中,分离出白念珠菌47株(75．81％),热带念珠菌4株(6．45％),光滑念珠菌2株(3．23％),克柔念珠菌5株(8．06％),其他念珠菌4株(6．45％)．62株念珠菌对4种常用的抗真菌药物,即两性霉素B、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑的敏感率分别为：100．00％(62／62)、88．71％(55／62)、96．77％(60／62)、95．16％(59／62)。结论：RVVC的主要致病菌仍是白念珠菌,但非白念珠菌所占比例呈上升趋势：RVVC分离菌株对咪唑类抗真菌药物仍有较高的敏感率。     

微量稀释法检测氟康唑和伊曲康唑对白念珠菌的敏感性

目的了解氟康唑和伊曲康唑对白念珠菌敏感性.方法采用NCCLS公布的M27-A方案微量稀释法,对19株白念珠菌临床分离株和3株标准株进行氟康唑和伊曲康唑药物的敏感性观测.结果19株临床分离株发现氟康唑耐药株7株,敏感株8株,剂量依赖的敏感菌株4株;伊曲康唑耐药株9株,敏感株8株,余2株为剂量依赖的敏感菌株;3株标准株结果符合.结论M27-A方案微量稀释法适合于临床检测白念珠菌的药物敏感性,氟康唑和伊曲康唑在白念珠菌中存在较高的耐药率和交叉耐药现象.     

白念珠菌对角质形成细胞NF-κB核移位的影响

目的观察白念珠菌(简称白念)及其菌体成分对培养人角质形成细胞核因子κB(NF-κB)表达及核移位的影响,进一步揭示白念与角质形成细胞之间相互作用的机理。方法分别采用酶解、反复冻融、超声破碎和超速离心等方法制备白念菌体成分,白念、白念菌体成分和纯甘露聚糖分别与角质形成细胞共同培养1.5h和3h后,激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)检测细胞NF-κB的表达。结果正常培养的人角质形成细胞NF-κB主要表达于胞浆;白念、白念细胞壁提取物和纯甘露聚糖刺激细胞1.5h后NF-κB在细胞核表达明显增加,细胞浆明显减少(P<0.01),3h后又恢复到刺激前的状态;而白念培养上清液、细胞浆提取物刺激角质形成细胞后NF-κB表达无明显变化(P>0.05)。结论白念和甘露聚糖均可引起角质形成细胞NF-κB向细胞核内转移,进而活化该转录因子,调控靶基因的转录。甘露聚糖可能是白念引起NF-κB活化的重要活性成分之一。     

试管法检测氟康唑和特比萘芬对常见致病性真菌的敏感性观察

目的(1)检测氟康唑和特比萘芬对临床常见真菌的敏感性;(2)探讨并建立皮肤癣菌的标准药敏试验方法.方法以NCCLS M27-A方案试管法为基础,检测氟康唑和特比萘芬对24株念珠菌和20株皮肤癣菌的敏感性.结果氟康唑对大部分念珠菌的敏感性较好,对皮肤癣菌的敏感性较差,而特比萘芬对皮肤癣菌高度敏感.结论NCCLS M27-A方案具有重复性好、一致性高的特点,可应用于酵母菌和皮肤癣菌的体外药敏实验.     

氮掺杂碳纳米酶联合近红外光抗真菌体外试验研究

目的：评价氮掺杂碳纳米酶（N-Carbon nanozyme）联合近红外光对白念珠菌和红色毛癣菌体外抗菌的效果。方法：将白念珠菌和红色毛癣菌标准菌株常规接种培养，分别分为四组：(1)空白对照组：真菌不作任何处理；(2)光照组：真菌予以2.5 W/cm2近红外光照射8 min；（3）材料组：真菌予以250 μg/mL的N-Carbon nanozyme处理30 min；（4）实验组：真菌予以250 μg/mL的N-Carbon nanozyme及2.5 W/cm2近红外光照射8 min。SYTO 9/PI染色判断白念珠菌和红色毛癣菌的菌体活性；扫描电镜观察和平板计数法判定白念珠菌抗菌形态和菌落形成单位（CFU）的数量。结果：实验组中SYTO9/PI染色示红色荧光染色信号显著增加；与空白对照组比较，光照组、材料组间菌落数均未见明显差异，而实验组可见菌落明显减少。生物扫描电镜显示白念珠菌的细胞形态发生明显的变化。结论：氮掺杂碳纳米酶联合近红外光对白念珠菌及红色毛癣菌均有明显的抑制作用。     

从母婴分离的念珠菌DNA分型研究

目的 探讨念珠菌在母婴间垂直传播的可能途径.方法 采用分子生物学方法,对11对分离于分娩前母亲阴道分泌物及其新生儿口腔并经常规形态学和生化学鉴定为同种念珠菌的母婴分离株,再次进行大亚基rDNA的D1/D2区域DNA序列鉴定.采用电泳核型和随机扩增DNA多态性进行分型研究,以确定是否为同一来源的菌株.结果 11对22株菌,其中8对母婴分离株的16株菌的DNA序列经DDBJ Gene Bank(登录号U45776)搜索与白念珠菌参考株Cal_Y12983具有100%的同源序列,被确认为白念珠菌;另2对的4株菌和1对的2株菌的DNA序列经DDBJ Gene Bank搜索与Cgra_Y65(U44808)和C.krusei Y-5396(U76347)具有100%的同源序列,分别被确认为光滑念珠菌和克柔念珠菌.电泳核型分析,每一对白念珠菌和克柔念珠菌的母婴分离株都具有完全相同的谱带.每一对光滑念珠菌的母婴分离株尽管产生1、2条不同谱带,但仍被认为是来源于同一个体,因为主要谱带是相同的.RAPD DNA带谱分析,对母婴分离株除1对2株菌的DNA谱带略有不同外,其余10对皆具有同样的DNA谱带.结论 1111株婴儿株与其母亲株分子生物学特征完全相同,可认为是经母亲产道垂直传播所致.     

体外药物和化学试剂对白念珠菌的细胞表面疏水性和粘附性的影响

用数种药物和化学试剂短时低浓度地在体外作用白念珠菌后，分别测定了受作用后白念珠菌的细胞表达疏水性（ＣＳＨ）和其对培养的Ｖｅｒｏ上皮细胞的粘附性，并做相应电镜观察。结果示，受药物和化学试剂作用的影响，白念珠菌的ＣＳＨ和粘附性都有不同程度的变化，且ＣＳＨ与粘附性呈不一致改变，ＣＳＨ的变化还伴有白念珠菌胞壁的可逆性形态改变。说明白念珠菌的ＣＳＨ与上应的宿主细胞粘附性不相关，二者是白念珠菌壁表面的两个不同     

DNA芯片鉴定念珠菌种和氟康唑耐药基因ERG11突变

目的 建立DNA芯片技术鉴定念珠菌种和氟康唑耐药基因ERG11突变。方法 根据6种常见念珠菌内转录间隔（ITS2）区种特异性序列和白念珠菌ERG11基因中已证实可导致对氟康唑耐药的6种突变序列设计探针,制备DNA芯片,鉴定12条50 bp的念珠菌种特异性序列和ERG11突变序列及34株念珠菌（其中白念珠菌29株,热带念珠菌、光滑念珠菌、都柏林念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌各1株）。结果 ①芯片正确鉴定12条人工合成序列;②正确鉴定34株试验菌株的菌种;③正确鉴定29株白念珠菌ERG11基因中可致耐药的已知突变。敏感性和特异性均为100%。结论 用DNA芯片进行念珠菌菌种鉴定和白念珠菌ERG11突变筛查,结果可靠。