实施同步核酸检测和血清学检测的结果分析

目的通过对核酸检测和血清学检测并行的检测模式的效果进行分析,对核酸检测和血清学检测在降低输血相关感染风险中的作用进行全面评估。方法对2016年3月1日至2017年5月31日共计73559份献血者标本进行血清学检测(HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体、谷丙转氨酶及血型),同时进行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的3联检核酸定性检测。统计各项检测的检出率;将酶免检测HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体3项检测与核酸检测结果进行对比分析。结果在检测的73559份标本中,酶免检测HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体三项阳性同时核酸阳性的标本共407份(0.55%);单纯核酸阳性489份,检出率为0. 67%,经鉴别,HBV DNA阳性131份,无HCV RNA和HIV RNA的检出。核酸检测阴性而酶免检测双试剂阳性的标本共有61份,其中HBsAg双阳性44份,抗-HCV双阳性17份,无HIV抗体/抗原双阳性标本。结论核酸检测对于HBsAg(-)的HBV感染献血者的检出效果比较明显,但是核酸检测不能完全代替血清学检测,两者结果不一致,具有一定的互补作用。     

全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA

目的 寻找一种有效实用的全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA，HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS。方法笔者采用ACR OMETRIX公司的NAC^TM HBV DNA。HCV RNA及HIV-1 RNA核酸对照品，卫生部临床检验中心的HBV DNA，HCV RNA质控对照品，检测该系统的灵敏度；同时采用我中心酶免法(ELISA)初筛检结果阳性，经中和实验确认HBsAg阳性标本10份，经RIBA确认抗-HCV阳性标本3份。经Western Blot确认抗-HIV阳性标本3份，检测该系统的阳性符合率；检测大量临床ELISA筛检结果为阴性的标本来检测其特异性，并且每次实验设立内对照，阴阳性对照以进行临床标本检测。结果该系统的检测灵敏度(95％可信限)为HBV病毒为24-60IU／mL，HCV病毒为78-125IU／mL，HIV-1 RNA病毒为45-67IU／mL。阳性符合率为100％，假阳性率为0.13％。结论全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA。HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS用于检测临床标本是有效实用的，可进一步加大临床标本检测数量，将该系统更好地用于酶联阴性结果的大规模筛查。     

基于PCR-化学发光的HBV/HCV/HIV并行核酸检测试剂盒的评价

目的：评价一种基于PCR与化学发光技术并行检测血液中HBV/HCV/HIV的试剂盒。方法：使用自制的磁珠及试剂提取病毒核酸,利用多重PCR、特异性探针及化学发光法检测目标病毒核酸的信息,评价试剂盒的灵敏度、特异性及稳定性等。结果：本试剂盒灵敏度高,特异性和稳定性好,能够同时检测出HBV、HCV和HIV的极限值分别为2.0、3.7和166.6 U/mL,对于可能产生干扰的10种病毒和2种细菌的病原体无交叉反应,有效期约12个月。在健康献血者10 422例酶免疫分析法合格标本中,筛查出HBV DNA核酸阳性标本12例和HCV RNA核酸阳性标本2例,与国家批准的血液筛查核酸试剂平行检测结果一致。结论：该试剂盒快速、准确、高灵敏、低成本,适用于基因诊断及流行病学调查。     

献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的流行病学和血清学研究

目的了解广州地区献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)的流行病学和血清学情况。方法对广州地区199631例无偿献血者标本同时用ELISA法检测HBsAg、紫外-乳酸脱氢酶法检测ALT、核酸扩增技术(NAT)联合检测HBV/HCV/HIV及HBV单项鉴别试验,对HBsAg阴性HBV DNA阳性者进行随访,用荧光定量PCR检测病毒载量,用ELISA法检测乙肝两对半。结果 199631例标本中共检出104例HBsAg阴性HBV DNA阳性者,经随访有54例为OBI,OBI检出率为0.027%,年龄以46～55岁组检出率最高(P<0.01),外地身份证的献血者检出率高于广州市身份证者(P<0.01),OBI检出率与性别和献血次数无关(P>0.05)。104例HBsAg阴性HBV DNA阳性的标本ALT均正常,病毒载量均<1000IU/ml,平均值为162IU/ml。随访标本中,除6例ALT异常外其余均正常,54例OBI标本病毒载量均<1000IU/ml,平均值为122IU/ml,乙肝两对半中抗-HBc阳性率明显高于其他项目(P<0.01)。结论 HBsAg阴性献血者中存在OBI,有必要在献血者中开展核酸检测。     

血清学检测联合核酸检测在血液中心的应用价值

目的探讨在血液中心应用血清学检测联合核酸检测的价值,以提高输血的安全性,降低输血感染风险。方法以我血液中心于2015年1月至2015年12月期间大约共计3000份献血者血液标本作为本组研究的观察对象,所有血液标本均经血清学检测包括HbsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体(以下简称酶免),与谷丙转氨酶;并行HBV/HCV/HIV3联检核酸定性检测。对于单纯核酸检测反应性的标本需进行鉴别试验,其中鉴别阴性的献血者进行跟踪检测,并将HbsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体三项酶联免疫检测结果与核酸检测结果进行对比分析。结果本组大约3000份血液标本中,经酶联免疫检测单试剂不合格331份,不合格率为1.35%;其中经酶联免疫检测双试剂反应性且经核酸检测无反应性的不合格标本共31份,其中HbsAg反应性11份,HCV抗体反应性20份;单纯核酸检测反应性标本共43份,经跟踪检测确认其中HBV13例、HIV窗口期感染2例,末检出HCV献血者。结论核酸检测与血清学检测的结果存在一定差别,核酸检测虽然对血清学阴性的HBV感染检出效果明显,但对于感染HBV但病毒载量极低者,其漏检的可能性较高;需要经跟踪检测与实验室检测以进一步确认。     

PCR-微流芯片在血液HBV DNA HCV/HIV RNA筛查中的初步应用

目的探讨在血液筛查中应用PCR-微流芯片技术检测献血者HBV DNA,HCV/HIV RNA的模式及可行性。方法在常规ELISA初、复检全项测定合格基础上,将献血者的血清按5人份×200μL进行汇集,用大容量磁珠法提取样本核酸,PCR-微流芯片检测技术进行扩增和检测。将国家标准质控血清进行系列稀释考评方法的灵敏度和重复性。结果342份(69个汇集池)无偿献血标本中有3份HBsAg(-)HBV DNA( ),HBV DNA阳性率为0.89%,其中1份标本两对半结果全阴性,2份标本抗-HBs( )及抗-HBc( )。PCR-微流芯片法检测HBV DNA、HCV RNA及HIV RNA的95%的灵敏度分别为11.5IU/mL、167.7拷贝/mL和57.9IU/mL结论PCR-微流芯片法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好特点,可应用于血液HBV DNA HCV/HIV RNA的筛查工作,以进一步提高输血的安全性。     

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

HIV-1感染者中HCV感染对于隐匿性HBV感染的影响

目的探讨在人免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者中丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染对于隐匿性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的影响。方法研究对象为河南某艾滋病治疗示范区中178例乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阴性的经有偿献血感染HIV-1未经抗病毒治疗的患者,检测项目包括肝功能,HBV及HCV血清标志物,HBV DNA和HCV RNA。分析HIV-1阳性,抗HCV阳性、抗HCV阴性组及HIV-1/HCV感染组中不同HCV RNA载量组HBV病原学检测结果方面的差异。结果 178例HBsAg阴性的HIV-1感染者中,HBV-M全阴性35例;单独抗HBs阳性25例;单独抗HBc阳性51例;HBsAb及HBcAb均阳性34例。抗HCV阳性HIV-1感染者与抗HCV阴性HIV-1感染者的年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05);丙氨酸转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)浓度比较差异有统计学意义(P<0.05);总胆红素(total bilirubin,TBIL)浓度比较差异无统计学意义(P>0.05);乙肝标志物(HBV marker,HBV-M)阴性、单独乙肝表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)阳性、单独乙肝核心抗体(hepatitis B core antibody,HBcAb)阳性、HBsAb及HBcAb均阳性及HBV DNA阳性例数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。不同HCV RNA载量患者HBV DNA检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论经有偿献血感染HIV-1人群中,HCV感染及HCV RNA载量高低与隐匿性HBV感染的发生无关;但合并HCV感染可加重HIV-1感染者的肝功能损害。     

无偿献血者HBsAg阴性HBV DNA阳性标本的病毒载量及基因型分析

目的 分析邯郸地区核酸检测无偿献血者低病毒载量HBV DNA标本的血清学及基因型情况。方法 选取邯郸市中心血站2020年1—8月乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阴性或单试剂阳性合并华益美核酸检测(nucleic acid testing, NAT)阳性的献血者标本,经罗氏核酸定性检测为HBV DNA阳性的标本,对其进行化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CLIA)、核酸定量及基因型测序试验,并对其血清学及基因型进行分析。结果 77 351份献血者标本中,定性检测HBV DNA阳性28份,核酸定量检测数值<5～1 371.00 IU/ml,其中25份<100 IU/ml,占89.29%。基因型分布：C型18份,占64.29%;B型5份,占17.86%;未定型5份,占17.86%。6份血清学检测全阴性的窗口期标本中,C型5份;22份隐匿性乙肝病毒感染(occult hepatitis B infection, OBI)标本中,C型13份、B型5份。结论 邯郸地区无偿献血者核酸检测HBV DNA标本大多呈病毒低水平复制,且基因型以C型和...     

两种HCV RNA载量检测试剂相关性分析

目的:分析进口与国产试剂在HCV RNA定量检测中的相关性,评价国产HCV RNA荧光定量PCR试剂在不同病毒载量时的检测能力.方法:以美国Roche 公司COBAS Amplipreo/cobas TaqMan HCV test试剂(Roche试剂)对标本的HCV RNA 定量为标准,评价某国产HCV荧光定量PCR试剂(DA试剂)对不同病毒滴度标本的检测性能.分析两种试剂检测HCV RNA结果的相关性,对DA试剂在不同病毒载量时的检测能力进行评价.结果:两种试剂检测结果存在线性相关(R2=0.916,P＜0.01),Roche试剂检测结果[(5.68±1.22)IU/ml,lg]高于DA试剂检测结果[(4.16±1.24)IU/ml,lg],差别有统计学意义(P＜0.01);对检测HCV高病毒载量[(≥5～＜7)IU/ml,lg和≥7IU/ml,lg]组,两种试剂相关性较高(R2分别为0.781 、0.729,P＜0.01)对低HCV病毒载量(≥3～＜5)IU/ml,lg组,两种试剂相关性较低(R2=0.483,P＜0.01);病毒载量在(≥3～＜4)IU/ml,lg组,DA试剂假阴性为45.4%(5/11);病毒载量(≥1.18～＜3)IU/ml,lg组及＜1.18 IU/ml,lg组,DA试剂均未检出.结论:与Roche试剂相比,DA试剂在高病毒载量标本的相关性较好,低病毒载量标本的相关性低于高病毒载量标本.DA试剂检测HCV RNA的线性范围较窄,与Roche试剂相比存在一定差距.