LR12肽通过调控TLR-4/NF-κB信号通路对坏死性小肠结肠炎新生小鼠肠道损伤的影响

目的 探讨LR12肽对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生小鼠肠道损伤的影响及其作用机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠18只(雌性6只,雄性12只),8周龄,体重16～23 g.雌鼠受孕后产幼鼠60只,根据随机数字表法分为对照组、模型组、LR12-scr组和LR12组,每组15只.对照组不采取任何操作,其余三组建立NEC...     

阿奇霉素经 TLR-4／NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的机制研究

目的：探讨阿奇霉素通过TLR‐4／NF‐κB信号通路干预慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠炎症的机制。方法36只SD大鼠分为健康对照组、模型组、阿奇霉素组。模型组及阿奇霉素组采用烟熏联合气管内滴入脂多糖1个月建立COPD大鼠模型。阿奇霉素组烟熏前30 min给予50 mg／kg阿奇霉素灌胃,健康对照组及模型组给予等量生理盐水。1个月后,处死大鼠,苏木素‐伊红（HE）染色观察肺组织病理形态;ELISA法检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、IL‐1β、IL‐6水平;RT‐PCR检测Toll样受体4（TLR4）及核因子‐κB（NF‐κB）、磷酸化p65（pp65） mRNA表达;Western blot检测 TLR4、pp65、基质金属蛋白酶2（MMP‐2）及MMP‐9表达水平。并对大鼠支气管肺泡灌洗液进行细胞分类和计数。结果与模型组比较,阿奇霉素组能改善肺组织形态,降低中性粒细胞数（P＜0．01）,减少肺组织匀浆中 TNF‐α、IL‐1β、IL‐6、MMP‐2及MMP‐9的分泌（P＜0．01）,并抑制TLR4表达及pp65（P＜0．01）。结论阿奇霉素能通过TLR‐4／NF‐κB信号通路干预COPD大鼠炎症。     

TLR4/NF-κB信号通路在儿童过敏性紫癜发病机制中的研究

目的 探讨TLR4/NF-κB信号通路及其下游炎症因子IL-6、IL-17水平变化在过敏性紫癜(HSP)及紫癜性肾炎(HSPN)发病机制中的作用和意义。方法 选取HSP、HSPN患儿各30例为实验组,入组患儿均为首发并且近1个月内无糖皮质激素、免疫抑制剂或细胞毒性药物等特殊药物使用史,另选取我院儿童保健门诊健康体检儿童30例作为正常对照组,均于无菌操作下采集清晨空腹静脉血6 ml分3支管,1支用于流式细胞仪检测TLR4蛋白的表达量,另1支采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测NF-κB。再取1支2 ml肝素抗凝管离心用于ELISA法检测的IL-6、IL-17含量。结果 (1)HSPN组和HSP组TLR4蛋白表达量分别是：(54.13±6.95)%、(39.37±4.35)%,NF-κB水平分别是：(207.78±121.23)ng/L、(163.33±65.45)ng/L,均高于对照组TLR4:(12.31±1.63)%、NF-κB:(98.24±35.64)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)HSPN组和HSP组血清IL-6:(28.29±3.30)ng/L、(2...     

基于TLR4/NF-κB信号通路上调miR-143对颅内动脉瘤模型大鼠的干预作用

目的 观察通过TLR4/NF-κB信号通路上调miR-143对颅内动脉瘤模型大鼠的干预作用。方法 2020年12月—2021年9月于同济大学附属东方医院神经外科进行实验,选取SPF级SD大鼠60只随机数字表法分为空白组、模型组、上调组和下调组,各15只,除空白组外,其余大鼠建立颅内动脉瘤模型,造模成功后模型组转染空载质粒,上调组转染miR-143过表达质粒,下调组转染miR-143沉默质粒。miR-143慢病毒滴定测定miR-143基因表达量。评估大鼠颅内动脉瘤成瘤率,测定各组大鼠血清转化生长因子β₁(TGF-β₁)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9水平及大鼠颅内动脉TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达量。结果 模型组miR-143基因表达量高于空白组(P<0.05),miR-143基因表达量下调组>模型组>上调组(F/P=7.484/0.001);模型组血清TGF-β₁、TNF-α、VEGF、MMP-2、MMP-9水平高于空白组(...     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-κB信号通路的影响

目的 探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4细胞)增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF-κB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制.方法 以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15 μmol/L),培养24、48、72 h.采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF-κB通路相关基因mRNA的差异表达.结果 辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用(均P＜0.01),且呈时间与剂量依赖性.15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72 h细胞抑制率分别达到45.75％、92.91％、96.46％,而细胞早期凋亡率分别为30.25％、64.34％、87.38％.与对照组相比,15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞48 h组中NF-κB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调.结论 辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF-κB通路相关基因的表达有关.     

白术多糖对类风湿性关节炎大鼠的抗炎作用及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨白术多糖(PAMK)对类风湿性关节炎(RA)大鼠的抗炎作用及其对Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法 采用Ⅱ型胶原诱导建立RA大鼠模型,造模成功后将大鼠分为模型组、阳性药物组(雷公藤多苷片)、PAMK低、高剂量组,同时设置正常对照组,每组12只。给予雷公藤多苷片或PAMK灌胃给药,1次/d,连续4周。测量大鼠体质量、足趾容积和关节炎指数;计算胸腺指数和脾脏指数;HE染色观察踝关节滑膜组织病理学变化;ELISA法检测血清及踝关节滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测踝关节滑膜组织中总蛋白Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化核因子κB p65[p-NF-κB p65(Ser536)]及核蛋白NF-κB p65表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠可见滑膜增生、层次不清等病理学改变,体质量降低(P<0.05),足趾容积、关节炎指数以及胸腺、脾脏指数升高(P<0.05),血清及踝关节滑膜组织中IL-1β、...     

miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

TLR4通过NF-κB/TGF-β信号通路调节结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应

目的 验证Toll样受体4(TLR4)在核因子-κB(NF-κB)/转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调节结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应和细胞活力,并探究其作用机制。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）,将所有细胞分为4组：TLR4过表达质粒（OE-TLR4组）、空白质粒（Empty vector组）、TLR4小干扰RNA(si-TLR4组)和对照si-NC(si-NC组)。将TLR4过表达质粒、空白质粒、TLR4小干扰RNA及其相应对照si-NC转染至RAW264.7细胞系中,随后使用结核分枝杆菌H37Rv菌株感染细胞。采用克隆形成实验检测细菌菌落数,CCK-8实验检测细胞活力。采用ELISA方法检测上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白（IκB、p-IκB、SMAD2、p-SMAD2）的表达水平。结果 TLR4在结核分枝杆菌H37Rv菌株感染的RAW264.7细胞中表达水平显著高于未感染的细胞。与Empty vector组相比,OE-TLR4组细胞细...     

TLR4/NF-κB信号通路在肾缺血再灌注损伤中的作用机制

目的 探讨Toll样受体4/核因子-κB(Toll- like receptor 4/nuclear factor-κB,TLR4/NF-κB)信号通路在肾缺血再灌注(renal ischemia-reperfusion,RIR)损伤中的作用机制。方法 96只健康SD大鼠随机分为4组,即假手术(Sham)组、模型(Model)组、Model+TAK242(TLR4抑制剂,10mg/kg)组和Model+LPS(TLR4激活剂,5mg/kg)组,每组24只。除Sham组外,其他组采用夹闭双侧肾动脉45min的方法复制RIR大鼠模型;造模前7天开始,各组分别1次/天腹腔注射给药。再灌注6h后,检测血清肾功能指标,HE染色法行肾组织病理学检查;透射电子显微镜观察肾小管上皮细胞超微结构改变;RT-PCR法检测肾组织TLR4、NF-κB p65mRNA表达;Western blot法检测肾组织TNF-α、IL-1β、TLR4、NF-κB p65mRNA和蛋白表达。结果 与Sham组比较,Model组血清BUN、SCr水平升高(P<0.05);肾组织可见肾小球体积增大、肾小管管腔扩张、炎性细胞浸润等病理学改变,病理评分升高(P<0.05);肾小管上皮细胞可见线粒体肿胀、膜破裂、嵴断裂,内质网扩张,核糖体减少等超微结构病变;肾组织TNF-α、IL-1β蛋白表达量升高,TLR4、NF-κB p65mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。与Model组比较,Model+TAK242组BUN、SCr水平降低(P<0.05),肾组织病变和肾小管上皮细胞超微结构改变均明显改善,TNF-α、IL-1β蛋白表达量降低,TLR4、NF-κB p65mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05);Model+LPS组BUN、SCr水平升高(P<0.05),肾组织病变和肾小管上皮细胞超微结构改变均明显加重,TNF-α、IL-1β蛋白表达量升高,TLR4、NF-κB p65mRNA和蛋白表达量升高(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路可能通过调节炎性反应参与RIR损伤过程。     

葛根素对急性痛风性关节炎大鼠TLR4/NF-κB通路的影响*

目的 观察葛根素治疗急性痛风性关节炎（AGA）大鼠的效果,并基于TLR4/NF-κB信号通路讨论葛根素治疗AGA的作用机制。方法 选取60只雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组及葛根素组,每组15只。复制模型并进行药物干预2周后,记录AGA大鼠治疗前后关节肿胀程度,光学显微镜下观察膝关节滑膜组织病理切片,应用ELISA法和免疫组织化学法分别检测关节腔冲洗液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量和关节滑膜组织Toll样受体4（TLR4）、核转录因子-κB（NF-κB）表达量。结果 AGA大鼠药物干预后,观察各项指标均得到不同程度的改善。3组AGA大鼠关节肿胀度、关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量和关节滑膜组织TLR4、NF-κB表达量比较,差异均有统计学意义（P?<0.05）;与模型组、秋水仙碱组比较,葛根素组大鼠关节肿胀程度减轻,关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量均下降,关节滑膜组织TLR4、NF-kB表达量均下调（P?<0.05）。结论 葛根素治疗AGA大鼠的作用机制可能与葛根素抑制TLR4/NF-kB信号通路,抑制下游炎症因子IL-1β、TNF-α的产生有关,从而减轻AGA炎症反应程度,起到治疗作用。     

miR-21 靶向TLR-4/MyD88信号通路介导冷空气诱导的气道免疫失调

目的探讨miR-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制。方法气-液双相法培养人
永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE,通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性miR-21,
miR-164,miR-155的水平改变。通过构建TLR-4 3’UTR端及其结合位点突变质粒,并与miR-21模拟物、miR-21抑制物以及对
照共转染BEAS-2B及16HBE细胞,进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为miR-21的靶蛋白。利用lipofectamine2000分别将
miR-21模拟物、miR-21模拟对照物、miR-21抑制物、miR-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞,并给予常温（37 ℃）培
养或冷暴露（30 ℃）,以Western Blot法检测各实验组TLR-4/MyD88蛋白水平。结果低温诱导气道上皮细胞内miR-21水平提
高（P<0.05）,而miR-164及miR-155无显著变化。低温提高气道上皮细胞内miR-21水平呈时间依赖性。双荧光素酶报告实验
证实,TLR-4为miR-21的直接靶蛋白。Western Blotting法检测结果显示转染miR-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温
培养下TLR-4/MyD88 蛋白水平显著低于对照组（P<0.05）,低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/MyD88 的蛋白水平（P<
0.05）;而使用miR-21抑制物处理,可部分抑制低温诱导的TLR-4/MyD88的蛋白水平下调（P<0.05）。结论低温刺激可能通过
提高气道上皮细胞内miR-21水平,降低TLR-4/MyD88蛋白水平,影响气道上皮免疫功能。
     

乌司他丁通过miR-146a调节TLR4/NF-κB信号通路减轻失血性休克大鼠肾炎性损伤研究

目的探讨乌司他丁能否在醋酸钠林格液的基础上影响miR-146a及TLR4/NF-κB信号通路以进一步削弱失血性休克大鼠的肾组织炎性损伤。方法24只健康SD大鼠建立失血性休克模型,分为休克未复苏组（SR组）、醋酸钠林格液复苏组（AR组）和乌司他丁联用醋酸钠林格液复苏组（UR组）,每组各8只。应用实时定量PCR技术检测各组大鼠肾组织中miR-146a和促炎因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1、IL-6及抑炎因子IL-4、IL-10的mRNA表达量,并通过Western blotting检测TLR4、NF-κB的相对蛋白表达量。光镜下观察各组大鼠肾组织在病理学方面的改变。结果与SR组比较,AR组和UR组肾组织中miR-146a的mRNA表达水平均有明显升高（P < 0.01）;而与AR组相比,UR组中miR-146a的mRNA表达仍有升高（P < 0.01）。与SR组相比,AR组和UR组中TNF-α的mRNA表达水平均有明显降低（P < 0.01）,而与AR组相比,UR组中TNF-α的mRNA表达仍有明显降低（P < 0.01）。与SR组比较,AR组和UR组中IL-1和IL-6的mRNA表达均有明显降低（P < 0.01）,而UR组与AR组差异无统计学意义（P>0.05）。与SR组和AR组相比,UR组中IL-4和IL-10的mRNA表达均明显升高（P < 0.01）;而SR组和AR组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。与SR组相比,AR组和UR组的TLR4和NF-κB蛋白表达水平均有明显降低（P < 0.01）,而与AR组相比,UR组中TLR4和NF-κB的表达仍有明显降低（P < 0.01）。光镜下可见,与SR组相比,AR组和UR组肾组织的病理损伤程度均有明显减轻,但UR组较AR组减轻程度更为明显。结论乌司他丁可能在醋酸钠林格液减轻创伤失血性休克大鼠肾组织炎性损伤的基础上进一步发挥保护作用,其机制可能与上调miR-146a的表达,抑制TLR4/NF-κB信号通路及调控炎症因子表达有关。     

绿原酸通过TLR4/NF-κB信号通路调控脓毒症大鼠肠上皮细胞屏障功能的研究

目的 观察绿原酸通过调控TLR4/NF-κB信号通路减轻脓毒症(sepsis)大鼠肠道氧化应激损伤、改善肠上皮细胞屏障功能的作用。方法 选取SD大鼠60只,采用随机数字表法分成假手术组、模型对照组、绿原酸(低、高剂量)组,每组15只。术后24 h,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10;比色法测定小肠组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用Western blotting法测定小肠组织中的蛋白表达[密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)及TLR-4/NF-κB通路相关的蛋白]。结果 与模型对照组[(4.45±0.14)分]比较,低剂量组[(4.17±0.22)分]、高剂量组[(1.95±0.08)分]Chiu评分明显下降(t=4.159、60.048,均P<0.001);高剂量组血清TNF-α、IL-6、IL-10水平及小肠组织中NO、MDA含量均显著降低(均P<0.05),SOD含量、Claudin-1、ZO-1蛋白表达量及MyD88...     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

中药调控NF-κB信号通路干预胃溃疡研究进展

胃溃疡(gastric ulcer, GU)是一种临床常见多发病。GU易反复发作,长期应用抑酸药治疗不良反应大。中医药对于GU的治疗具有多靶点、多疗效、不良反应少等优点。研究表明,胃溃疡发生机制与氧化应激、炎性反应等密切相关,核因子-κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB)作为炎性反应的核心因子,参与多种炎性、氧化反应。故本文以中医药为基础,NF-κB为切入点,总结中医药干预NF-κB信号通路治疗GU相关文献,发现抑制NF-κB信号通路,可通过调控炎症、氧化、细胞凋亡等机制,下调肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等因子,降低超氧化物歧化酶(auperoxide dismutase, SOD)、过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO),促细胞凋亡蛋白、caspase-3活性,增加还原型谷胱甘肽(glutat...     

姜黄素调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对细菌性阴道炎大鼠炎症反应和阴道菌群的影响

目的：探究姜黄素(CUR)调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对细菌性阴道炎(BV)大鼠炎症反应和阴道菌群的影响。方法：随机把SD大鼠分为对照(Ctrl)组、BV组,低、高剂量CUR(L-CUR、H-CUR)组、TLR4抑制剂组,采用加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)混合细菌悬液阴道注入法建立BV模型(Ctrl组除外);Diff-Quik染色检测阴道分泌物中细胞构成变化;HE染色观察阴道组织病理学变化;ELISA检测阴道分泌物中炎性因子表达情况;高通量测序分析阴道菌群变化[Shannon指数(多样性)、Chao指数(丰富度)及门、属水平变化);Western Blot检测阴道组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果：与Ctrl组比较,BV组大鼠阴道分泌物中阴道上皮细胞较少,可见大量白细胞,同时IL-10、TNF-α、IL-1β表达增加(P<0.05);阴道组织发生明显病理改变,阴道壁增厚,可见明显充血水肿、炎性细胞浸润,大量坏死组织脱落;阴道菌群Shannon指数、Chao指...