持续乙醇摄入通过抑制NRF2通路促进HMGB1及其下游炎性因子表达

目的 分析核因子E2相关因子2(NRF2)在持续乙醇摄入调节小鼠前额叶高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通路及炎性反应中的作用.方法 腹腔注射乙醇构建持续乙醇摄入小鼠模型;并用乙醇干预原代神经元构建乙醇干预细胞模型;NRF2通路特异激动剂特丁基对苯二酚(tBHQ)对模型进行干预,选用实时荧光定量聚合酶链反应检测前额叶及神经元目的基因mRNA水平;选用Western blot检测蛋白表达变化.结果 与对照组相比,乙醇干预组小鼠前额叶炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(P=0.015)、白细胞介素(IL)-1β(P=0.017)及HMGB1通路相关基因HMGB1(P=0.004)、TLR3(P=0.030)、TLR4(P=0.004)mRNA相对表达水平升高;NRF2(P=0.014、0.014)及HO-1(P=0.030、0.012)转录及蛋白表达水平均降低;与单纯乙醇摄入小鼠相比较,tBHQ干预后能够降低IL-1β(P=0.003)、HMGB1(P=0.000)、TLR4(P=0.015)mRNA水平及HMGB1(P=0.043)蛋白表达水平;在神经元实验中,与单纯乙醇干预组相比,tBHQ干预后神经元HMGB1(P=0.001、0.004)转录及蛋白水平明显下降.结论 持续乙醇摄入通过抑制小鼠前额叶NRF2表达,进而激活HMGB1/TLR4通路,促进其下游IL-1β表达.     

七氟醚调控NRF2/HO-1/HMGB1通路减轻缺氧诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 探讨七氟醚对缺氧诱导的小胶质细胞炎症反应的影响,及对转录因子NF-E2相关因子2(NRF2)及血红素加氧酶1(HO-1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通路的调控作用.方法 缺氧不同时间(0、2、4、6、8、12 h)诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,倒置显微镜观察细胞活化形态并计算活化细胞比例;West...     

一氧化碳释放分子2通过影响HMGB1分布及表达减轻心肌细胞缺氧损伤

目的:探讨一氧化碳释放分子(CORM-2)对心肌细胞缺氧的保护作用及其机制。方法:将大鼠心肌细胞H9C2分为4组:正常组(H9C2)、缺氧组(Hypoxia+H9C2)、CORM-2组(CORM-2+Hypoxia+H9C2)和iCORM-2组(iCORM-2+Hypoxia+H9C2)。CCK-8和流式细胞术分别检测心肌细胞活性和凋亡情况;免疫荧光检测HMGB1核浆分布情况;Western Blot检测心肌细胞胞浆内HMGB1表达和总HMGB1的表达情况,以及相关凋亡蛋白表达。结果:缺氧组与正常组比较,细胞活性下降,凋亡率增高(9.5%vs 27.4%,P<0.05),胞浆HMGB1迁移增加,细胞总HMGB1及凋亡相关蛋白表达增加(P<0.05)。CORM-2组与缺氧组相比,细胞的活性升高(P<0.05),凋亡率降低至14.1%,胞浆HMGB1释放量及总表达量减少,Cleaved Caspase-3表达降低,ICORM-2组与缺氧组无明显变化。结论:CORM-2通过影响HMGB1分布及表达减轻心肌细胞缺氧损伤。     

HMGB1与炎性因子在脊髓损伤患者血清中的表达及临床意义

目的 探讨高迁移率族蛋白1(H MGB1)在脊髓损伤患者血清中的表达及其临床意义.方法 收集2007年1月至2014年1月在新疆维吾尔自治区阿克苏市兵团第一师医院就诊的87例脊髓损伤患者作为脊髓损伤组,脊髓损伤的严重程度根据美国脊髓损伤协会(ASIA)残损分级进行评估,分别于脊髓损伤后1、3、7d行静脉采血,另外取87例健康成年人血清做对照组,酶联免疫吸附试验检测患者血清中HMGB1、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并分析HMGB1与IL-1β、IL-6 、TNF-α的相关性及患者损伤程度的关系.结果 脊髓损伤组伤后1、3、7d的HMGB1、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均较高.脊髓损伤患者血清中HMGB1和IL-6水平在损伤后1d明显升高,在3d时水平达峰值AL-1β和TNF-α在伤后1d最高,3、5d后逐渐降低.相关性分析表示伤后1、3d中HMGB1水平与IL-6、IL-1β和TNF-α水平呈正相关(P＜0.05).髓损伤后1、3d,患者血清中HMGB1水平与脊髓损伤的严重程度密切相关(P＜0.05),脊髓损伤的程度越重,患者血清中的HMGB1水平越高.结论 HMGB1在早期脊髓损伤患者血清中的水平显著升高,并可作为早期脊髓损伤严重程度的评估指标之一.     

Nrf2/HO-1通路在氧化应激和炎性反应中的作用

氧化应激是指体内氧化与抗氧化作用失衡,倾向于氧化,导致中性粒细胞炎性浸润、蛋白酶分泌增加、产生高活性分子,如活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)和活性氮自由基(reactive nitrogen species, RNS)以及大量氧化中间产物,如白三烯、血栓素A₂等促炎介质,从而引起细胞凋亡和炎性反应。近年来研究表明,核转录因子红系2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor erythroid-2-related factor 2/heme oxygenase 1, Nrf2/HO-1)通路可以通过抗炎、抗氧化等作用抵抗氧化应激损伤。因此,有效调控Nrf2/HO-1通路可成为治疗氧化应激性疾病和炎性疾病的重要靶点。     

芦荟苷通过下调HMGB1的表达抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖和迁移

目的 探讨芦荟苷对乳酸诱导胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用及可能的分子机制。方法 胃癌BGC-823细胞常规培养,实验分为对照组、乳酸组、不同浓度芦荟苷和乳酸联合组,分组处理后的BGC-823细胞,EdU实验检测胃癌细胞的增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验和tranwell 实验检测细胞迁移能力;Western blot检测CyclinD1、CyclinE1、PCNA、N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9和HMGB1的表达;ELISA检测HMGB1的释放。HMGB1干扰质粒和阴性对照质粒分别转染BGC-823细胞,转染48 h后用乳酸刺激细胞24 h,EdU和划痕实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。结果 EdU结果表明,芦荟苷明显抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖;克隆形成结果表明,芦荟苷和乳酸联合处理的胃癌细胞,细胞克隆数目显著少于乳酸处理组（P<0.05）;划痕和transwell结果均表明,芦荟苷能够抑制乳酸诱导的胃癌细胞迁移（P<0.05）;Western blot结果表明,芦荟苷能够下调乳酸诱导的Cyclin D1,E1,PCNA,N-cadherin,MMP-2,MMP-9和HMGB1的表达;逆转乳酸对E-cadherin表达的抑制作用;ELISA结果发现,芦荟苷有效阻止了乳酸诱导的HMGB1释放（P<0.05）。EdU和划痕结果表明,敲除HMGB1的BGC-823细胞,乳酸诱导的增殖和迁移与阴性质粒转染组相比明显下降。结论 芦荟苷通过下调乳酸诱导的HMGB1表达、释放以及增殖和迁移相关蛋白的表达,抑制乳酸诱导的胃癌细胞的增殖和迁移。     

HMGB1通过RAGE促进肝内胆管癌细胞增殖､侵袭的机制研究

目的:检测高迁徙率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)及其受体晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end-products,RAGE)在肝内胆管癌组织中的表达;探讨HMGB1/RAGE对肝内胆管癌细胞增殖及上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用?方法:免疫组化分析未转移和已转移胆管癌患者标本中HMGB1及RAGE的表达;ELISA法检测胆管癌及胆管结石患者胆汁中HMGB1的含量;CCK8?Transwell检测HMGB1及RAGE抑制剂(FFP-ZM1)对胆管癌细胞增殖?侵袭作用的影响;Western blot检测胆管癌及癌旁组织中p-ERK的表达?结果:HMGB1和RAGE在已转移的胆管癌患者组织标本中高表达,HMGB1可促进胆管癌细胞的EMT过程及胆管癌细胞的生长和侵袭?结论:HMGB1可参与胆管癌细胞的增殖与EMT过程?     

PRMT1通过促进RRM2表达抑制鼻咽癌细胞凋亡

目的 探讨PRMT1能否通过促进RRM2抑制鼻咽癌细胞凋亡。方法 免疫组化和Western blot共同检测鼻咽癌和癌旁组织中PRMT1及RRM2的相对表达量;以人正常鼻黏膜上皮细胞系（HNEpC）作为对照,Western blot实验检测不同鼻咽癌细胞系中PRMT1和RRM2蛋白的相对表达量;对CNE-2细胞中PRMT1分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达PRMT1组（oe PRMT1:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 PRMT1质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及PRMT1小干涉RNA组（si-PRMT1:CNE-2细胞中转染PRMT1小干涉RNA）,对CNE-2细胞中RRM2分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达RRM2组（oe RRM2:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 RRM2质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及RRM2小干涉RNA组（si-RR...     

RNA干扰抑制HMGB1基因表达对子宫内膜癌的增殖抑制作用及其分子机制

目的：研究RNA干扰抑制高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的表达对子宫内膜癌 细胞株HEC-1A的增殖抑制作用及对细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：构建靶向HMGB1 基因的慢病毒shRNA载体,转染子宫内膜癌细胞株HEC-1A,同时利用实时荧光定量RT-PCR和Western印迹检测转染 HMGB1-siRNA后细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平的变化。MTT法和流式细胞术分别检测转染HMGB1-siRNA后 HEC-1A细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化。Western印迹检测转染HMGB1-siRNA后细胞AKT,pAKT和cyclinD1 的蛋白表达水平。结果：慢病毒HMGB1 shRNA载体成功抑制HMGB1 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)在HEC-1A细胞 中的表达;转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的增殖能力明显受抑制(P<0.01),并能阻滞细胞于G0/G1期,且明显 诱导细胞凋亡;转染HMGB1 shRNA组、空白对照组和阴性对照组的总凋亡率分别为(17.89±0.23)%,(4.69±0.20)%和 (4.62±0.17)%,3组之间差异有统计表达学意义(P<0.01)。转染HMGB1 shRNA后细胞pAKT和cyclinD1蛋白表达水平均下 调(均P<0.01)。结论：HMGB1表达下调可以有效地抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖,细胞阻滞于G0/G1期,且可诱 导细胞凋亡,影响磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路及下调cyclinD1的蛋白表达水平可能为其主要作 用机制。     

高迁移率族蛋白1及其炎症信号通路在大鼠扩张型心肌病中的表达及意义

目的 研究高迁移率族蛋白1 (HMGB1)及其炎症信号通路[HMGB1-Toll样受体4(TLR4)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)-核因子κB(NF-κB)细胞因子]在大鼠扩张型心肌病(DCM)中的表达,并探讨其在DCM发生、发展中的意义.方法 以SD大鼠构建DCM模型,雄性大鼠42只,分为对照组(20只)和DCM组(22只).以腹腔注射阿霉素进行造模,DCM组腹腔注射阿霉素1.0 mg/kg(生理盐水稀释至1 mg/mL),对照组腹腔注射等量生理盐水,1周2次,用药6周,停药观察2周.造模后随机抽取2只大鼠行心脏彩超及病理检查证实造模是否成功,余大鼠行心脏彩超检查;留取血标本,进行血清白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑利钠肽(BNP)、C反应蛋白(CRP)水平的测定;处死大鼠留取左心室心肌组织标本,进行心肌组织HMGB1、TLR4、RAGE、NF-κB的mRNA表达测定;进行心肌组织病理及电镜检查.结果 8周后对照组无死亡,DCM组死亡4只,其余18只随机抽取2只大鼠证实造模成功.DCM组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)较对照组明显升高(P＜0.05);左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴收缩率(FS)较对照组明显下降(P＜0.05).DCM组心肌组织HMGB1、TLR4、RAGE、NF-κB mRNA的表达较对照组明显升高(P＜0.05);HMGB1 mRNA与TLR4 mRNA、RAGE mRNA及NF-κB mRNA呈正相关(r=0.873,P=0.005;r=0.949,P=0.000;r=0.898,P=0.002).血清IL-1、IL-6、TNF-α、CRP、BNP水平较对照组明显升高(P＜0.05);HMGB1 mRNA的表达分别与IL 1、IL-6、TNF-α、CRP水平呈正相关(r=0.944,P=0.002;r=0.988,P=0.000;r=0.968,P=0.000;r=0.961,P=0.000).结论 HMGB1及其炎症信号通路(HMGB1-TLR4/RAGE-NF-κB-细胞因子)在大鼠DCM中呈现高表达,并与心腔大小及心功能相关,提示其可能是DCM发生、发展的病理生理机制之一.     

呼吸道合胞病毒通过调控miR-409-3p/SIRT1通路促进支气管上皮细胞凋亡与炎症因子表达

目的 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)对人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)凋亡和炎性因子表达的影响及可能机制.方法 体外培养HBECs,分别转染miR-409-3p抑制剂、SIRT1过表达载体或共转染miR-4...     

不明原因反复早期流产患者体内炎症相关因子的表达及其与HMGB1蛋白的相关性研究

目的 探讨不明原因反复早期流产患者体内炎症相关因子的表达与HMGB1蛋白的相关性。 方法 选择2013年2月-2017年7月在湖北医药学院附属东风总医院产科门诊就诊的不明原因反复早期流产孕妇172例作为流产组,按照1:1配比原则,选择同期参加正常孕期检查未发生不明原因反复早期流产的孕妇172例作为对照组,2组都抽取空腹静脉血进行炎症相关因子与HMGB1表达检测,同时进行相关性分析。 结果 流产组的血清IL-6、TNF-α、HMGB1含量分别为(49.22±10.39)pg/L、(82.49±10.11)pg/L和(99.02±21.49)ng/ml,都明显高于对照组的(27.33±9.82)pg/L、(30.19±6.88)pg/L和(47.99±10.53)ng/ml(均P<0.05)。Pearson分析显示流产组的血清IL-6、TNF-α都与HMGB1呈正相关(r=0.562、0.672,均P<0.05)。多因素条件Logistic回归分析显示,IL-6、TNF-α、HMGB1都为影响不明原因反复早期流产的主要危险因素(均P<0.05)。 结论 不明原因反复早期流产患者体内炎症因子IL-6、TNF-α与HMGB1都呈现高表达状态,且可互相影响,是流产发生的独立危险因素。      

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

低氧刺激THP-1细胞炎症因子的表达及其相关通路的研究

目的观察低氧是否促进人单核细胞炎症因子的分泌,以及探讨其是否通过PI3K/Akt和低氧诱导因子(HIF-1α)信号通路而发挥作用。方法 1体外低氧(1%O2)培养人源单核细胞系THP-1,24 h;2分别加入PI3K抑制剂(LY294002)和HIF-1α抑制剂(KC7F2)预处理THP-1细胞后再进行低氧干预;3在常氧下,分别加入Akt激动剂(胰岛素)和HIF-1α激动剂(二甲氧乙二酰甘氨酸,DMOG)对THP-1细胞进行干预。Western blot检测p-Akt和HIF-1α蛋白表达的水平,ELISA法检测IL-1β和TNF-α分泌的变化。结果与对照组(常氧培养)比较,低氧干预后THP-1细胞p-Akt、HIF-1α的蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α分泌增加,差异有统计学意义(P0.05);与低氧组(低氧培养)比较,PI3K抑制剂预处理能显著降低p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α抑制剂预处理能降低HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能减少IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,Akt激动剂能增加p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α激动剂能增加HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能增加IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05)。结论低氧可能是通过激活PI3K/Akt/HIF-1α信号通路,促进THP-1细胞炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌,从而促进慢性炎症的发展。     

NRF2在不同分化程度浸润性非黏液型肺腺癌中的表达及意义

目的探讨NRF2在不同分化程度浸润性非黏液型肺腺癌(invasive non-mucinous adenocarcinomas, INMA)同病理亚型中的表达差异,及其与淋巴结转移和预后的相关性。方法收集同济大学附属上海市肺科医院2017年11月至2018年6月手术的498例INMA病例,分析HE切片中不同亚型占比并采用免疫组织化学法检测各亚型中NRF2的分布情况;按分化程度分组分析NRF2与淋巴结转移、预后的相关性。结果INMA组织学亚型之间NRF2表达存在差异,在实性型、微乳头型及复杂腺体型中表达水平最高(n=331,H-score平均值226.73±83.357),在腺泡型及乳头型中表达水平次之(n=332,H-score平均值141.74±92.893),在贴壁生长型中表达水平最弱(n=197,H-score平均值58.48±75.753)。NRF2在高级别亚型中呈现高表达趋势,与INMA患者淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关(P<0.001),在低分化组中NRF2阳性与淋巴结转移(P=0.005)具有相关性;NRF2阳性是患者发生复发转移事件的独立危险因素(P<0.001)。结论NRF2在INMA不同组织学亚型中表达差异明显,NRF2阳性与淋巴结转移及预后不良相关。     

人HMGB1真核表达载体的构建及其在单核细胞的表达

目的构建人高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达载体,并探讨其免疫调节作用。方法从HMGB1克隆载体酶切分离HMGB1基因片段,插入增强型绿色荧光蛋白载体pCITE EGFP,菌落PCR和酶谱分析鉴定重组载体。重组表达质粒转染人单核细胞系（U937）,梯度G418筛选,荧光和Western blot检测HMGB1的表达。结果菌落PCR和酶谱分析显示目的基因被正确插入真核表达载体,获得重组质粒pCITE EGFP HMGB1,转染U937细胞随培养基中G418浓度的升高而增强,转染细胞中目的蛋白HMGB1表达量明显升高。结论成功构建重组载体pCITE EGFP HMGB1,并获得稳定表达人HMGB1的单核细胞系,为研究HMGB1对单核巨噬细胞的作用及其机制奠定基础。