ZWINT在RLR抗病毒先天免疫信号通路中的作用

目的探究ZWINT(ZW10 interacting kinetochore protein)对TBK1(TANK-binding kinase 1)或仙台病毒(Sendai virus,SeV)诱导的RLR(RIG-I like receptor)抗病毒先天免疫信号通路的影响。方法应用免疫共沉淀的方法检测ZWINT与RLR信号通路分子TBK1、VISA、RIG-I之间的相互作用;用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验验证ZWINT对TBK1或SeV诱导的IRF3二聚化的作用;利用双荧光素酶报告基因实验检测TBK1或SeV介导下ZWINT对干扰素启动子IFN-β的激活效果;通过实时荧光定量PCR实验检测ZWINT对SeV诱导的IFN-β转录的影响。结果 ZWINT与TBK1、VISA和RIG-I都有相互作用,过表达ZWINT增强了TBK1或SeV诱导的IRF3的二聚化水平以及IFN-β启动子的活性,此外,过表达ZWINT也加强了SeV诱导的IFN-β的转录。结论ZWINT是RLR抗病毒先天免疫信号通路中的正调控因子。     

miR-107 靶向NID2 通过Notch 信号通路调控肺癌细胞的增殖侵袭

目的:miR-107 靶向NID2 调控Notch 信号通路影响肺癌的侵袭和增殖。方法:免疫组化检测NID2 在肺癌组织和正常肺组织中的表达;PCR 检测miR-107 在肺癌组织中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107 对NID2 转录活性的影响;肿瘤细胞成球实验检测miR-107 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的迁移能力的影响;Western blot 检测过表达miR-107 后Notch 信号通路的蛋白表达水平。结果:和正常肺组织比较,NID2 在肺癌组织中表达较高;miR-107 在肺癌组织中表达明显降低;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-107 可以直接调控NID2 的转录活性;过表达miR-107 后,肺癌细胞A549 的增殖、侵袭和迁移能力明显降低;过表达miR-107 后,Notch1、hes-1、presenilin1 蛋白表达下调。结论:miR-107靶向NID2 的表达,通过Notch 通路调控肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

接头蛋白STING介导信号通路在抗病毒感染中的研究进展

干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferon gene,STING)是一种介导胞内DNA诱导固有免疫应答的重要接头蛋白,在机体抗病毒免疫反应中起关键作用。宿主细胞通过模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)识别入侵病原体的DNA,将信号传递给STING,导致TANK连接激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)和干扰素调控因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)磷酸化,从而促进Ⅰ型IFN的上调表达,进而抑制病毒复制。文章介绍了STING分子的结构、转导通路以及分子调控机制,重点概述STING介导的信号通路在抗病毒感染中的作用以及病毒对该信号通路的调控机制,以期为抗病毒药物的研究提供新的靶点和思路。     

KCNE2表达下调通过靶向激活calcineurin-NFAT信号通路

<正>KCNE2是电压依赖性离子通道的辅助β亚基,在维持心电稳定性中起着十分重要的作用。有研究发现,KCNE2基因敲除小鼠发生心肌肥大、纤维化和收缩力减弱。我们以往的研究发现,KCNE2具有双向调节ICa,L的作用,通过RNAi降低心肌细胞KCNE2表达时,ICa,L明显增大。而我们     

低氧介导信号通路调控肿瘤细胞上皮间质转化的研究进展

低氧微环境普遍存在于实体瘤中,且与实体瘤的发展和转移紧密相关。低氧诱导因子(HIF)作为响应低氧环境的主要转录因子,可促进肿瘤细胞增殖、生存、血管形成和上皮间质转化(EMT)等。EMT是上皮细胞表型向间质细胞表型转化的生物学过程,主要与其信号通路、转录因子、炎症因子及miRNAs相关,在肿瘤侵袭和转移中起着重要作用。本文总结了低氧信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、Notch信号通路、NF-κB信号通路、Hedgehog(Hh)信号通路以及PI3K/Akt信号通路等相关信号通路对肿瘤EMT的影响。     

葡萄糖通过mTORC1信号通路调控成纤维细胞增殖

目的 研究葡萄糖对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 将小鼠皮肤成纤维细胞培养在含不同浓度葡萄糖的培养基里,用MTT法检测细胞增殖,7-MGTP pulldown实验检测细胞翻译起始情况,Western blot检测mTORC1信号通路分子的活化.结果 与培养基葡萄糖浓度为5.5 mmol/L相比较,当浓度为15 mmol/L时,促进细胞增殖,与7-MGTP结合的翻译起始复合物增加,mTORC1信号通路活化;当25 mmol/L时,抑制细胞增殖,与7-MGTP结合的翻译始复合物减少,mTORC1信号通路中与细胞增殖相关的4EBP1和与细胞生存相关的Akt的磷酸化减弱.结论 葡萄糖通过对mTORC1信号通路的双向调节作用调控成纤维细胞增殖.     

NO-sGC-cGMP信号通路通过cGK调控PAI-2基因表达

目的:体外分析环磷酸鸟苷是否(cGMP)通过cGMP依赖性蛋白激酶(cGK)调控人纤溶酶原激活物抑制剂2(PAI-2)基因启动子活性,阐明PAI-2基因表达的分子调控机制。方法:构建cGK的真核过表达载体及其小干扰RNA(siRNA)敲减体系,以及PAI-2基因启动子缺失突变序列双萤光素酶报告载体,瞬时转染人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs),在可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)特异性刺激剂BAY 41-2272处理前后,real-time PCR检测PKG1(cGK编码基因)和PAI-2基因的mRNA水平。结果:cGK过表达能显著上调细胞内PKG1的mRNA水平和蛋白表达水平,cGK siRNA则能显著降低其表达(P0.01);BAY 41-2272处理HPASMCs后,PKG1基因和PAI-2基因的mRNA水平均明显升高,而cGK siRNA则能抑制该上调作用(P0.01);双萤光素酶报告基因实验显示,cGK过表达显著上调PAI-2基因启动子活性,而cGK敲减组其活性与对照组比较差异无统计学显著性;BAY 41-2272处理后PAI-2基因启动子缺失突变体PAI-2-Prom-M1组和PAI-2-Prom-M2组的萤光素酶相对活性显著增强,其它启动子缺失突变体组其活性与对照组比较差异无统计学显著性。结论:NO-sGC-cGMP信号通路通过cGK调控PAI-2表达,PAI-2基因转录起始位点5’侧翼区的-1 000 bp～-800 bp是其表达调控的关键区域之一。     

NOD1和NOD2介导的信号通路及其抗病毒免疫应答研究进展

NOD1和NOD 2蛋白为胞浆内模式识别受体,其识别进入胞内的细菌胞壁及其降解产物,介导NF-κB和MAPKs信号途径,产生相关效应分子,介导了抗病原微生物免疫应答.近年来的最新研究发现,NOD1受体还通过ISGF3信号途径诱导产生1型干扰素,NOD2受体能识别ssRNA和病毒基因组ssRNA,通过MAVs信号途径激活IRF3,诱导产生1型干扰素,1型干扰素又可正向调控NOD1和NOD2功能性表达.NOD1和NOD2通过介导新的信号途径诱导产生大量的1型干扰素,并参与抗病毒固有免疫应答.因而,对NOD1和NOD2介导的抗病毒免疫应答新认识,将为防治病毒感染性疾病的研究提供新策略.     

p38 MAPK信号通路参与受体介导的细胞内吞的调控

目的：观察p38 MAPK信号转导通路在受体介导的细胞内吞中的作用。方法：利用Alexa 594标记的转铁蛋白作为受体介导的内吞作用的观察指标，来研究p38特异性抑制剂SB203580或ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理以及p38基因敲除对该过程的影响。 结果：在受体介导的细胞内吞中，p38被磷酸化激活。SB203580的预处理或p38基因的敲除都能阻断受体介导的细胞内吞，而PD98059的预处理对该过程没有影响。 结论：p38 MAPK信号转导通路参与了受体介导的细胞内吞的调控。     

ERK 信号通路介导银屑病角质形成细胞过度增殖的调控机制

银屑病是常见的慢性、 复发性、 炎症性皮肤病, 角质形成细胞 ( keratinocyte, KC) 增殖分化失 调作为其发病原因之一, 具体机制尚未明确。 细胞外信号调节激酶 ( extracellular signal regulated kinase, ERK) 信号通路在其中发挥着重要作用, 微小 RNA (microRNA, miRNA)、 长链非编码 RNA ( lncRNA)、 细胞因子等作为 ERK 信号通路的上游分子参与调控银屑病表皮角质形成细胞的增殖与分化过程。 文章旨在 对这一通路在银屑病角质形成细胞过度增殖中的作用机制做一综述。     

山奈酚通过调控AMPK / Nrf2 / HO-1 信号通路缓解ox-LDL 介导的内皮细胞损伤

目的:探讨山奈酚(Kaempferol)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响及其分子机制。方法:将HUVECs 随机分为6 组:对照(control)组、ox-LDL 组、Kaempferol+ox-LDL 组、Kaempferol+ox-LDL+Compound C 组、Kaempferol+ox-LDL+si-Nrf2 组和Kaempferol+ox-LDL+si-HO-1 组。MTT 方法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和ROS 水平,Western blot 检测蛋白表达水平。结果:与对照组相比,ox-LDL 处理组的细胞活力下降;凋亡率增加,Cleaved-caspase-3 蛋白水平上调而Bcl-2 下调;TNF-α、IL-1β、IL-6、血管细胞黏附分子(VCAM1)、细胞间黏附分子(ICAM1)和选择素E(E-selectin)的表达升高;活性氧簇(ROS)水平提高而超氧化物歧化酶(SOD)水平下降;p-AMPK、Nrf2 和HO-1 的蛋白水平也减少。与ox-LDL 组相比,山奈酚处理能够缓解以上细胞活力、凋亡及氧化应激等方面的损伤反应,上调p-AMPK、Nrf2 和HO-1 的蛋白水平。Compound C、si-Nrf2 和si-HO-1 处理能够抑制AMPK/ Nrf2/ HO-1 信号通路,提高ROS 的生成,抑制山奈酚对ox-LDL 诱导HUVECs 损伤的拮抗作用。结论:山奈酚能够缓解ox-LDL 诱导的内皮损伤,这与山奈酚促进AMPK/ Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。     

脊髓星形胶质细胞通过调控Cx43-JNK通路介导吗啡耐受

目的探讨脊髓星形胶质细胞是否通过调控Cx43-JNK通路介导大鼠慢性吗啡耐受。方法采用SD成年大鼠,连续7 d鞘内注射吗啡(15μg/10μl)建立慢性吗啡镇痛耐受动物模型。采用热水甩尾法测定甩尾潜伏期以观察吗啡的镇痛效果。应用Western blot法检测脊髓Cx43、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和GFAP的表达;免疫组织荧光染色法检测脊髓GFAP的免疫反应性。结果在吗啡耐受形成的过程中,慢性鞘内注射吗啡引起大鼠脊髓GFAP表达逐渐增多,吗啡耐受时脊髓p-JNK、p-c-Jun和Cx43的表达明显增多;氟代柠檬酸(Fluorocitric acid,1 nmol/10μL)可以拮抗吗啡镇痛耐受,并且明显地抑制慢性吗啡所致的脊髓Cx43的上调,以及JNK及c-Jun的激活。结论脊髓Cx43-JNK通路参与星形胶质细胞介导的大鼠慢性吗啡镇痛耐受。     

氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中Wnt信号通路介导基因的调控

背景：研究发现氯化锂有促进毛囊干细胞向毛囊上皮定向分化的作用,但其分子调节机制仍不清楚。 目的：通过外源性因子氯化锂干预人毛囊干细胞,观察Wnt信号通路中主要下游分子及目的基因的改变,探讨氯化锂对毛囊干细胞定向分化的诱导作用。 方法：取正常成人除皱术后的头皮,采用两步酶消化法结合手术显微镜分选毛囊干细胞,采用角蛋白10抗体-异硫氰酸荧光素鉴定毛囊干细胞。以外源性因子氯化锂干预人毛囊干细胞。 结果与结论：氯化锂干预5 d后可发现毛囊干细胞体积变大,核浆比减小,Wnt信号通路中β-catenin、cyclinD1表达增强,GSK3β、Tcf3表达减弱,c-myc在氯化锂浓度低时增强浓度高时减弱。提示氯化锂可影响毛囊干细胞中Wnt信号通路β-catenin、GSK3β、Tcf3、c-myc和cyclinD1的表达水平,可能对毛囊干细胞的分化起到重要作用。     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

ERK信号通路的信号转导调控机制

胞外信号调控激酶（ERK）是发现的第1个丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）,它调控多种重要的细胞生物学过程,包括细胞增殖、分化和凋亡等。ERK信号级联反应能够特异地介导广泛的生物学过程,其机制主要是通过信号的反馈调控,与支架蛋白的相互作用,亚细胞定位的改变,在级联反应的每一个环节存在不同功能的多种组分,细胞内非磷酸酶抑制物和G蛋白等的调控实现的。     

NO/PKG介导Ca2+/Calcineurin信号通路调控血管平滑肌细胞增殖

目的研究NO/PKG介导Ca2 /钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的调控。方法植块法原代培养W istar大鼠VSMCs。W estern blot测定CaN表达,定磷法测定CaN活性。MTT法测定VSMCs的增殖,丫啶橙/溴化乙锭荧光染色法测定VSMCs的活性。结果SNAP和Sp-8-pCPT-cGMPS使苯肾上腺素(PE)诱发的VSMCs吸光度分别降低,而Rp-8-pCPT-cGMPS则可使吸光度增加。维拉帕米预处理VSMCs后,PE诱发的VSMCs吸光度降低,并且上述吸光度可以被SNAP或Sp-8-pCPT-cGMPS进一步抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMPS轻微升高。环胞素A预处理VSMCs后,PE诱发的VSMC吸光度降低,但是这一数值不能被SNAP、Sp-8-pCPT-cGMPS或Rp-8-pCPT-cGMPS进一步抑制或升高。SNAP和Sp-8-pCPT-cGMPS抑制PE诱发的CaN表达与活性。结论NO/PKG抑制血管SMCs增殖,但并不影响SMCs存活率;NO/PKG这一作用是介导SMCs内游离钙/CaN信号通路实现的。     

瓜蒌皮提取物通过调控PI3K/AKT信号通路介导的自噬而减轻肥胖小鼠慢性炎症

目的:探讨瓜蒌皮提取物(FTPE)对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织慢性炎症的影响及作用机制.方法:雄性C57BL/6J小鼠随机选取10只为对照组,其余小鼠喂养高脂饲料建立肥胖模型,造模成功后分为模型组、PI3K抑制剂(LY294002,7.5 mg/kg)组、低剂量(2 mL/kg)FTPE(FTPE-L)组、高剂量(...     

miR-199a-3p 通过靶向 CABLES-1 调控流体剪切力介导的成骨细胞增殖

目的 探讨miR-199a-3p在流体剪切力(fluid shear stress, FSS)诱导成骨细胞增殖中的作用及其可能的分子机制。方法 对成骨细胞MC3T3-E1加载1.2 Pa FSS,时间分别为0、15、30、45、60、75、90 min。使用miR-199a-3p模拟物或miR-199a-3p抑制物转染MC3T3-E1细胞。使用将过表达的miR-199a-3p以及其阴性对照分别转染MC3T3-E1细胞,并以1.2 Pa FSS处理45 min。将pcDNA NC、pcDNA-CABLES-1、si RNA NC、si RNA CABLES-1转染至MC3T3-E1细胞中。分别共转染pc DNA-CABLES-1与miR-199a-3p mimic以及si RNA-CABLES-1与miR-199a-3p inhibitor。CCK-8实验检测细胞活性;RT-qPCR检测CABLES-1、 miR-199a-3p、CDK 6、Cyclin D1、PCNA表达水平;荧光素酶报告实验检测CABLES-1和miR-199a-3p的靶向关系。免疫荧光检测CABLES-1蛋白表达。...