下调lncRNA Neat1表达通过减少NF-κB P65的细胞核转位保护大鼠心肌缺血再灌注损伤北大核心CSCD

目的:探究下调长链非编码RNA核内富集转录物1(lncRNA Neat1)表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、shRNA NC组和sh-Neat1组,采用左前降支结扎法构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,采用ELISA检测血清心损伤标志物肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,检测大鼠心率(HR)和左心室射血分数(LVEF),生化试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,HE染色和MASSON染色观察大鼠心肌病理变化,Western blot检测心肌组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)、纤维连接蛋白(FN)、核因子NF-κB P65的表达,荧光定量PCR检测心肌组织中lncRNA Neat1、IL-6和TNF-αmRNA的表达,免疫荧光检测NF-κB P65细胞核转位情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠lncRNA Neat1、Mb、cTnⅠ、CK-MB、MDA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、HR、α-SMA、TGF-β、FN、p-NF-κB P65/NF-κB P65水平升高,LVEF和SOD水平降低(P<0.05);与模型组比较,sh-Neat1组lncRNA Neat1、Mb、cTnI、CK-MB、MDA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、HR、α-SMA、TGF-β、FN、p-NF-κB P65/NF-κB P65水平降低,LVEF和SOD水平升高(P<0.05)。结论:lncRNA Neat1在心肌缺血再灌注损伤中高表达,干扰lncRNA Neat1后可保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,改善心肌纤维化,可能与减少NF-κB P65细胞核转位有关。     

miR-195缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应

目的探讨miR-195对脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分成空白对照组、脂多糖组(LPS)、LPS+miR-NC组、LPS+miR-195组;RT-PCR检测转染后miR-195表达量;ELISA检测心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI);流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核形的变化;Western blot检测氧化应激相关蛋白表达(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α);试剂盒检测氧化应激标记物SOD活性;ELISA检测炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)。结果与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组miR-195表达量、氧化应激标记物水平(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α)、抗氧化酶SOD活性均显著升高(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI)、细胞凋亡率、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)均显著降低(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-...     

二肽基肽酶4抑制剂抑制Wnt/β-catenin信号通路改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化

目的探讨二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法将50只SPF级SD大鼠,体重(200±20)g,随机分为对照组(Control group)、模型组(Model group)、二肽基肽酶4抑制剂组(DPP-4 inhibitor group)、氯化锂组(LiCl group)及氯化锂+DPP-4组(LiCl+DPP-4 inhibitor group),每组10只。利用腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)的方法构建慢性心力衰竭大鼠模型。利用超声检测各组大鼠心功能;HE及Masson染色检测各组大鼠心脏病理学改变;Western blot检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,α-SMA, GSK-3β,p-GSK-3β及β-catenin蛋白的表达。结果与模型组相比,DPP-4inhibitor组大鼠心功能显著改善,心脏组织病理损伤及心肌纤维化减轻,心脏组织中TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显减少,p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达也显著降低(P0.05);LiCl加重慢性心力衰竭大鼠模型的心脏功能、病理损伤及心肌纤维化程度,增加TGF-β1和α-SMA蛋白表达,并显著增加p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达;但是DPP-4抑制剂能够减轻甚至部分逆转LiCl对慢性心力衰竭大鼠的影响。结论二肽基肽酶4抑制剂改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化,与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达相关。     

上调miR-133a表达水平对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察上调微小RNA-133a(miR-133a)的表达水平对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响。方法:以同源正常血压Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为正常对照组,另将SHR随机分为SHR组、SHR+腺相关病毒(AAV)组和SHR+携带miR-133a的腺相关病毒(miR-133a-AAV)组。通过冠脉灌注法将miR-133a-AAV转染至SHR大鼠的心脏,监测大鼠的尾动脉压,Masson染色观察心肌胶原沉积情况,real-time PCR检测心肌组织中miR-133a的表达水平,免疫组化法和Western blot法检测心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平。结果:与WKY大鼠相比,SHR的尾动脉压明显升高,心肌组织中miR133a表达水平降低,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高,出现心肌纤维化;上调SHR心肌miR-133a的表达水平后,心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平降低。结论:上调心肌组织中miR-133a的表达水平,对高血压导致的大鼠心肌纤维化有改善作用,其机制可能与抑制心肌组织中TGF-β1和CTGF蛋白表达有关。     

miR-145介导Notch2/Jagged-2信号通路改善心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤

目的 探讨miR-145对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的保护作用及可能的机制.方法 按随机数字表法将30只SD大鼠分为假手术组(Sham)、模型组(I/R)和miR-145 mimic组(miR-145);HE染色检测各组大鼠心肌组织病理变化;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;ELISA试剂盒检测大鼠肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;qPCR检测各组大鼠心肌miR-145、Notch2及Jagged-2 mRNA的表达;Western blot检测大鼠心肌中Notch2及Jagged-2蛋白表达.结果 miR-145可减轻大鼠心肌病理损伤,降低心肌细胞凋亡,使大鼠体内CK-MB、cTnT及LDH水平显著降低,抑制炎症反应,降低IL-6、IL-1β及TNF-α水平,抑制Notch2及Jagged-2 mRNA及蛋白表达.结论 miR-145对I/R大鼠心肌组织损伤有一定的改善作用,可能是通过抑制Notch2/Jagged-2信号通路活性实现的.     

上调miR-200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成

目的探讨miR-200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs,免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs;取新鲜培养的第2代PSCs,设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组、TGF-β1+miR-200a mimic组,Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达,荧光定量PCR检测α-SMA、collagenⅠmRNA及miR-200a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P0.05),且呈时间依赖性;转染miR-200a mimic后,在相同浓度的TGF-β1刺激下,α-SMA和collagenⅠ的蛋白和mRNA表达明显降低(P0.01)。结论上调miR-200a的表达,可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用,其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。     

白茅苷对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的影响

目的探究白茅苷(imperatorin,Imp)对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的影响及作用机制。方法将大鼠随机分为:假手术组(Ctrl组)、模型组(MCAO组)、MCAO+Imp(2.5、5、10 mg)组,MCAO法诱导缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型。检测心肌组织病理学改变,增殖、凋亡相关蛋白表达,心肌损伤和炎症因子含量,及信号通路表达。结果白茅苷能改善MCAO新生大鼠心肌组织病理损伤,上调心肌组织Ki67、PCNA表达(P<0.01),上调Bcl-2、下调Bax、Caspase-3和Caspase-9表达(P<0.01),降低Mb、cTnI和CK-MB血清含量(P<0.01),减少IL-1β、iNOS和IL-6,增加IL-10含量(P<0.01),同时下调TGF-β1、P-P65/P65和TNF-α表达水平(P<0.01)。结论白茅苷能减轻缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠的心肌损伤,并抑制免疫反应,其机制与抑制TGF-β1/NF-κB p65/TNF-α炎症通路活化相关。     

丹皮酚通过抑制miR-21表达减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的研究丹皮酚(PAE)通过抑制微小RNA-21(miR-21)减轻博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化的相关机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、BLM组、阳性对照(PC)组、PAE组,比较各组大鼠的肺纤维化相关指标,miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平,及Smad7、TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平;将制备好的纤维细胞分为对照组,TGF-β1组,PAE-L组,PAE-M组,PAE-H组,miR-21抑制剂组,检测各组细胞中miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平及Smad7、COLIA1、α-SMA蛋白水平,并验证miR-21与Smad7的靶向关系。结果与对照组相比,BLM组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度,miR-21mRNA表达水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白表达水平显著升高均显著升高(P<0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度均显著降低(P<0.01);与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠肺组织中miR-21 mRN...     

miR-146a介导PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞诱导的肝纤维化

目的探讨微小RNA(miR)-146a在转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的肝星状细胞活化中的作用,并通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路观察其对肝纤维化的影响。方法采用四氯化碳(CC1_4)建立肝纤维化大鼠模型,检测大鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅰ型胶原(Ⅰ-C)水平,Masson染色观察肝组织病变,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织miR-146a表达,蛋白免疫印迹实验(Westem blot)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PI3K和磷酸化(P)-Akt蛋白表达。HSC (肝星状细胞)-T6细胞分为Normal组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组和TGF-β1+miR-M组。TGF-β1+miR-NC组和TGF-β1+miR-M组分别转染miR-146a mimics阴性对照物和miR-146a mimics,然后除Normal组外,其余各组采用TGF-β1诱导HSC-T6细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞增殖情况,Real-time PCR法检测miR-146a表达,Western blot法检测α-SMA、Ⅲ-C、Ⅰ-C、PI3K和p-Akt蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原沉积明显增加,纤维增生显著;血清HA、LN、PCⅢ和Ⅳ-C水平显著升高;肝组织miR-146a表达明显降低;而PI3K和P-Akt蛋白表达明显增加。TGF-β1组和TGF-β1+miR-NC组HSC-T6细胞各指标差异均无统计学意义。与TGF-β1+miR-NC组比较,TGF-β1+miR-M组miR-14表达明显增加,细胞活性、α-SMA表达、Ⅲ-C和Ⅰ-C均明显降低,PI3K和P-Akt蛋白表达明显下调。结论 miR-146a能够抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞活化,其抗肝纤维化机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

红景天苷对平原移居高原大鼠心脏损伤的保护作用研究

目的研究红景天苷对平原移居高原大鼠心脏的保护作用及其可能机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为平原对照组、高原缺氧组、高原供氧组、红景天苷高剂量组和红景天苷低剂量组(100、50 mg·kg~(-1)·d-1),每组10只。红景天苷给药组用1 ml食用油混溶后灌胃,其余组用1 ml食用油灌胃,每天1次,持续给药30 d。末次给药后,记录大鼠的一般情况;测定大鼠体质量、心率、血压、心脏指数、胸腺指数、脾指数、肝脏指数,肝脏ADP(二磷酸腺苷)、ATP(三磷酸腺苷),脾脏CD4、CD3,血清cTn-Ⅰ(心肌肌钙蛋白-Ⅰ)、CK(肌酸激酶)、CK-MB(肌酸激酶同工酶)、Mb(肌红蛋白)、心肌炎标记分子白介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10),心脏组织TGF-β1、NF-κB p65和TNF-α水平以及全血RBC(红细胞计数)、HBG(血红蛋白)的水平,并做心脏HE染色。结果与平原对照组相比,高原缺氧组大鼠心率、收缩压、舒张压显著增高(P0.05);体质量、心脏指数、胸腺指数、肝指数、脾指数以及CD3、ADP和ATP水平均显著降低(P0.05),血清cTn-Ⅰ、CK、IL-1β、iNOS、IL-6水平和全血RBC、HBG水平均显著升高(P0.05),而IL-10水平显著降低;心肌组织TGF-β1、NF-κB p65和TNF-α的表达水平均显著上调(P0.01)。高、低剂量组的红景天苷均能不同程度改善上述缺氧表现。心脏HE染色结果显示,与高原缺氧组大鼠心肌比较,红景天苷高、低剂量组大鼠和供氧组大鼠心肌缺氧病变改善明显。结论红景天苷对平原移居高原大鼠心脏具有保护作用,其可能机制与抑制TGF-β1/NF-κB p65/TNF-α炎症通路有关。     

糖尿病大鼠肾组织中miR-21和SnoN表达的变化

目的探讨糖尿病(DM)大鼠肾组织中微小核糖核酸-21(miR-21)和核转录共抑制因子(SnoN)在肾纤维化过程中的表达变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素复制DM大鼠模型,并设对照组(NC),每组n=8。10周后处死大鼠,观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色、Western blot及RT-q PCR检测miR-21、SnoN、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3(Ser423/425)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)的表达。结果与对照组相比,DM组肾组织p-Smad3(Ser423/425)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达增加(P0.05),SnoN、E-cadherin蛋白表达减少(P0.05),但SnoN mRNA和miR-21表达明显上调(P0.05),并伴有collagenⅠ、collagenⅢ和FN在间质沉积增多。结论 TGF-β1可能上调miR-21表达,抑制SnoN翻译水平的表达,促进DN的纤维化病变。     

淫羊藿苷对IgA肾病大鼠纤维化和炎症反应的调控作用

目的Ig A肾病(Ig A nephropathy,Ig AN)是最常见的原发性肾小球肾炎。本文旨在探索淫羊藿苷对Ig AN大鼠纤维化和炎症反应的影响。方法牛血清球蛋白(bovine gamma globulin,BGG)处理建立Ig AN大鼠模型。免疫组化和蛋白印迹检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1),IV胶原蛋白(type IV collagen,Col IV)和纤连蛋白(Fibronectin)1蛋白水平。酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β),IL-6和IL-18水平。蛋白印迹分析细胞核中抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、NF-κB P65和抗血管细胞黏附蛋白(vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1)表达。结果与对照组相比,Ig AN模型组尿蛋白,血清肌酐和尿素氮水平明显升高(P<0.05)。模型加药组尿蛋白,血清肌酐和尿素氮水平明显低于Ig AN模型组(P<0.05)。Ig AN模型组TGF-β1、Col-IV和Fibronectin 1表达水平显著高于对照组(P<0.01)。淫羊藿苷处理Ig AN模型大鼠后,TGF-β1、Col-IV和Fibronectin 1表达水平明显下降(P<0.05)。而且,Ig AN模型组血清中IL-1β、IL-6和IL-18水平明显高于对照组(P<0.05)。与Ig AN模型组相比,模型加药组IL-1β、IL-6和IL-18水平明显降低(P<0.05)。另外,Ig AN模型大鼠肾脏组织细胞核的NF-κB P65、TNF-α和VCAM-1蛋白水平显著高于对照组(P<0.01)。与Ig AN模型组相比,模型加药组大鼠肾脏组织细胞核的NF-κB P65、TNF-α和VCAM-1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论淫羊藿苷可改善Ig AN大鼠纤维化水平并抑制炎症反应。     

神经调节蛋白1β与卡托普利对慢性心衰大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1的影响

目的:探讨神经调节蛋白1β(neuregulin-1β,NRG-1β)与卡托普利联合应用对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。方法:将青年雄性SpragueDawley大鼠随机分为假手术组、心衰组、NRG组、卡托普利组和联合用药组,采用腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘法制备心衰模型。通过超声心动图评价大鼠心功能;Masson染色检测心肌纤维化程度,并计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);放射免疫法检测血浆中血管紧张素II(Ang II)的浓度;Western blot检测各组大鼠左心室心肌组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;透射电镜观察左室心肌的超微结构。结果:与心衰组比较,NRG组、卡托普利组及联合用药组左心室舒张末直径和心肌纤维化程度明显降低,射血分数明显升高(P0.05);TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显降低(P0.05);电镜下显示,NRG组、卡托普利组及联合用药组心肌纤维化程度较心衰组明显减轻,而与NRG组和卡托普利组相比,联合用药组效果更加显著(P0.05)。结论:神经调节蛋白1β与卡托普利单用及联合应用均可有效改善心功能、抑制心肌纤维化,且联合用药的疗效优于单独用药。     

IL-22经Wnt/β-catenin通路抑制肝星状细胞致纤维化作用

目的:研究IL-22抑制HSC致肝纤维化的作用和机制,探索Wnt/β-catenin通路在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法:采用TGF-β1激活HSC,荧光定量PCR和Western blot检测细胞激活过程中β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达变化情况。应用不同浓度和不同时间的重组大鼠IL-22刺激大鼠HSC,CCK8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用TGF-β1预处理HSC,再用最适浓度IL-22干预,对比干预前后HSC增殖情况,并检测β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达变化情况。结果:TGF-β1激活HSC后,β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。IL-22以浓度依赖性和时间依赖性抑制HSC增殖(P0.05),并降低β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),但对HSC凋亡率无显著影响(P0.05)。IL-22可以显著抑制TGF-β1诱导的HSC激活,并显著降低β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin参与了HSC激活和分泌α-SMA过程,IL-22以浓度依赖性和时间依赖性抑制HSC活性,这种作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路实现的。     

长链非编码RNA HOTAIR 靶向miR-138 对脓毒症诱导的大鼠心肌炎症 反应和氧化应激的影响及作用机制研究

目的:探究同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)与miR-138对脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、CLP组、siRNA+CLP组、si-HOTAIR+CLP组,构建大鼠CLP模型, PanoView b1500检测大鼠左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末压(LVEDP),RT-PCR检测HOTAIR和miR-138表达水平,HE染色检测心肌病理损伤,试剂盒检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、心肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平,Western blot检测NF-κB信号通路蛋白表达水平;将心肌细胞分为Control组、LPS组、siRNA+LPS组、si-HOTAIR+LPS组、si-HOTAIR+LPS+inhibitor组,RT-PCR检测HOTAIR和miR-138表达水平,荧光素酶报告检测HOTAIR与miR-138靶向关系, MTT检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测MDA和SOD的水平,Western blot检测NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果:在动物实验中,与Control组比较,CLP组LVSP、细胞活性、miR-138、SOD水平显著降低,LVEDP、病理性改变、细胞凋亡率、HOTAIR、cTnⅠ、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及NF-κB通路蛋白表达水平显著升高;与CLP组比较,si-HOTAIR+CLP组LVSP、细胞活性、miR-138、SOD水平显著升高,LVEDP、病理性改变、细胞凋亡率、HOTAIR、cTnⅠ、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及NF-κB通路蛋白表达水平显著降低。在细胞实验中,与Control组比较,LPS组细胞活性、miR-138、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、HOTAIR、MDA、NF-κB通路蛋白表达水平显著升高;与LPS组比较,si-HOTAIR+LPS组细胞活性、miR-138、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、HOTAIR、MDA、NF-κB通路蛋白显著降低;与si-HOTAIR+LPS组比较,si-HOTAIR+LPS+inhibitor组细胞活性、SOD水平降低,细胞凋亡率、MDA、NF-κB通路蛋白表达水平升高。在荧光素酶报告实验中,与HOTAIR wt组比较,HOTAIR wt+miR-138 mimic组荧光素酶活性显著降低。结论:HOTAIR可以通过沉默miR-138,促进脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激,其作用机制与NF-κB信号通路激活有关。     

Dectin-1通过调节巨噬细胞极化影响心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨Dectin-1通过影响巨噬细胞极化改善心肌梗死(myocardial infarction,MI)后心脏重塑的作用机制。方法SD大鼠随机分为3组:假手术组(sham组)、心肌梗死组(MI组)和AAV9-si-Dectin-1组,采用永久性结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型;采用超声系统检测各组大鼠心功能指标(心率、LVEDD、LVESD、LVEF和LVFS);qRT-PCR和Western blot检测各组大鼠心肌组织中Dectin-1的表达;TTC染色检测各组大鼠心肌组织梗死面积;Masson染色检测各组大鼠心肌组织纤维化水平;Western blot检测各组大鼠心肌组织巨噬细胞标记物蛋白(iNOS、CD86、Arg-1和CD163)的表达水平;ELISA检测各组大鼠心肌组织中炎性因子(IL-1β、IL-6和IL-10)的表达水平。结果 Dectin-1在MI组中的表达水平显著增加(P0.001),而在AAV9-si-Dectin-1组中表达水平显著下降(P0.001);沉默Dectin-1使大鼠LVEDD、LVESD减少(P0.05,P0.05),LVEF、LVFS增加(P0.05,P0.05);与MI组相比,AAV9-si-Dectin-1组大鼠心肌组织的梗死面积明显减少(P0.01),心肌组织纤维化水平明显降低(P0.01),大鼠心肌组织中iNOS和CD86蛋白表达水平下调(P0.05,P0.05),Arg-1和CD163蛋白表达水平显著上调(P0.001,P0.001);沉默Dectin-1使大鼠心肌组织中IL-1β、IL-6含量显著减少(P0.001,P0.001),IL-10含量增加(P0.05)。结论沉默Dectin-1的表达可以改善MI诱导的心肌重塑,其机制可能与M2巨噬细胞的极化和成纤维中胶原蛋白生成的减少有关。     

肾组织内miR-29a下调促进叶酸诱导的急性肾损伤

目的 探讨miR-29a在急性肾损伤(AKI)中的作用.方法 12只雄性CD1小鼠随机分为2组:对照组、叶酸组.检测血清肌酐、尿素氮,PAS染色观察病理变化,TUNEL染色观察细胞凋亡程度,qPCR检测基因IL-6、TNF-α、α-SMA、TGF-β1、miR-29a的表达,Western blot检测α-SMA、TGF-β1蛋白的表达.结果 与对照组比,叶酸组血清肌酐、尿素氮升高,PAS染色显示肾小管扩张、刷状缘消失,TUNEL染色提示细胞凋亡增加,IL-6、TNF-α、α-SMA、TGF-β1表达上调,miR-29a表达下调.结论 miR-29可能参与AKI的发生发展.     

内皮间质转化参与阿霉素诱导的大鼠心肌纤维化

目的研究阿霉素对心肌纤维化形成的机制。方法构建大鼠阿霉素心肌纤维化模型,HE染色和Masson染色检测心肌病理变化,RT-q PCR和免疫组化检测纤维化相关基因Col1α、Col3α和TGF-β1的表达。免疫荧光技术检测心肌组织内皮细胞标志物v WF和间质细胞标志物α-SMA的表达。结果给大鼠腹腔注射阿霉素(2 mg/kg,每周1次)出现心室腔扩大、心壁变薄、心肌纤维间隙增宽、心肌溶解、心肌纤维化、心肌血管内皮损伤和通透性增加。随着阿霉素作用时间延长,实验组相比于对照组心肌纤维化程度明显(P0.05),纤维化相关因子Col1α、Col3α和TGF-β1的表达增多(P0.05),阿霉素心肌纤维化大鼠心脏血管内皮细胞出现内皮间质转化。结论阿霉素可诱导大鼠不可逆的心肌纤维化,内皮间质转化参与阿霉素心肌纤维化的形成。     

上调miR-181a抑制香烟提取物诱导的支气管上皮细胞致炎因子生成与collagen IV、fibronectin和α-SMA表达

目的:探讨微小RNA-181a(miR-181a)对香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells, HBECs)致炎因子生成与IV型胶原蛋白(collagen IV)、纤连蛋白(fibronectin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并分析其可能的机制。方法:RT-qPCR检测CSE诱导下HBECs中miR-181a的表达情况。转染miR-181a mimic后经ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平;Western blot检测collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达;并进一步评估NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活性。结果:CSE可显著增加HBECs中致炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β1的生成,显著上调collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达,同时细胞内miR-181a的表达明显降低(P0.05);转染miR-181a mimic可显著抑制CSE诱导的HBECs致炎因子生成及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达(P0.05)。此外,Western blot的结果显示转染miR-181a mimic可抑制CSE诱导的NF-κB/TGF-β1/Smad3信号活性(P0.05)。结论:上调miR-181a表达可部分逆转CSE诱导的HBECs致炎因子的释放及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达,其作用机制可能与抑制NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活化有关。     

CXXC5 对心房颤动大鼠心肌纤维化的影响及机制

目的:探讨锌指蛋白5(CXXC5)在心房颤动大鼠心肌纤维化中的表达及其对心肌纤维化的影响及可能机制。方法:将40只大鼠分为对照组(正常大鼠组)、空白对照组(心房颤动模型大鼠组)、阴性对照组(心房颤动大鼠尾静脉注射阴性对照病毒组)和过表达CXXC5组(心房颤动大鼠尾静脉注射过表达CXXC5病毒),每组10只。空白对照组、阴性对照组和过表达CXXC5组大鼠建立心房颤动心肌纤维化模型(腹部皮下注射异丙肾上腺素建立心房颤动心肌纤维化模型)。伊红-苏木素(HE)染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化,并测定胶原容积分数(CVF);采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定心肌组织中Ⅰ型胶原、CXXC5、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7 mRNA水平;采用Western blot法测定大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、CXXC5、TGF-β1、Smad7蛋白水平。结果:HE染色和Masson染色显示:对照组大鼠心肌组织形态学正常;空白对照组和阴性对照组大鼠心肌细胞排列紊乱,间质胶原纤维增多,心肌纤维化严重;过表达CXXC5组大鼠心肌细胞排列稍紊乱,心肌纤维化较轻;模型组大鼠CVF明显高于对照组(P0.05)。与对照组相比,其他3组大鼠CVF升高(P0.05),CXXC5、Smad7 mRNA和蛋白水平升高(P0.05),Ⅰ型胶原、TGF-β1 mRNA和蛋白水平降低(P0.05);与空白对照组和阴性对照组相比,过表达CXXC5组大鼠CVF降低(P0.05),心肌组织中CXXC5、Smad7 mRNA和蛋白水平升高(P0.05),Ⅰ型胶原、TGF-β1 mRNA和蛋白水平降低(P0.05);空白对照组和阴性对照组大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、CXXC5、TGF-β1、Smad7 mRNA和蛋白水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:心房颤动心肌纤维化大鼠心肌组织CXXC5水平降低,TGF-β1/Smad7信号通路激活;过表达CXXC5可通过抑制TGF-β1/Smad7信号通路抑制心房颤动大鼠心肌纤维化。