芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的:观察芝麻素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CF)增殖及胶原分泌的影响,并探讨其可能机制。方法:应用双酶消化和差速贴壁法获得纯化的心肌成纤维细胞,采用MTT法测定芝麻素对AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖的影响,羟脯氨酸法测定胶原含量,ELISA法测定转化生长因子β1(TGF-β1)水平,比色法测定细胞总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量。结果:芝麻素可显著抑制AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖和胶原分泌,抑制TGF-β1表达(P<0.05或P<0.01),同时可提高细胞抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:芝麻素可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,其机制可能与提高成纤维细胞的抗氧化能力、减少氧化损伤、下调TGF-β1蛋白表达有关。     

自噬对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及迁移的影响及机制

目的 观察自噬对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblats,CFs)增殖及迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 消化法培养新生大鼠CFs,AngⅡ诱导新生大鼠CFs增殖,MTT比色法、细胞划痕实验分别检测细胞增殖及迁移情况;Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)、beclin-1及DGKξ蛋白的表达;DGKξ shRNA慢病毒感染CFs下调DGKξ蛋白水平,观察其对CFs自噬的影响.结果 AngⅡ10-7 mol·L-1明显促进CFs增殖并增加自噬相关蛋白LC3及beclin-1的表达;自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmoL/L)及氯喹(CQ,5tmol/L)可逆转AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移;AngⅡ诱导CFs增殖的同时DGKξ蛋白表达明显下调;DGKξ下调增加AngⅡ诱导的自噬相关蛋白LC3及beclin-1表达.结论 AngⅡ通过激活自噬诱导CFs增殖及迁移,其作用机制可能与DGKξ蛋白下降有关.     

阿魏酸钠抑制心肌成纤维细胞增殖的作用及机制

目的:研究阿魏酸钠(SF)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用及其机制。方法:培养新生鼠心肌成纤维细胞分为3组:对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组和AngⅡ+SF组。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期改变;免疫荧光法检测TGFβ1蛋白表达。结果:AngⅡ作用24h后MTTOD值显著高于对照组(P<0.01)。不同浓度SF(0.04mg/ml,0.08mg/ml,0.16mg/ml)组MTTOD值均显著低于AngⅡ组(P<0.01),呈剂量依赖性。AngⅡ组S期细胞百分率明显高于对照组,G0/G1期细胞百分率则明显低于对照组(P<0.01)。AngⅡ+SF组S期细胞百分率显著低于AngⅡ组,G0/G1期细胞百分率显著高于AngⅡ组(P<0.01),且呈剂量依赖性。AngⅡ组TGFβ1蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),AngⅡ+SF组显著低于AngⅡ组(P<0.01)。结论:阿魏酸钠可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其效应呈现剂量依赖性,作用机制与降低TGFβ1蛋白表达有关。     

小檗碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的作用及机制研究

目的研究小檗碱(Ber)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖、羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量、化学比色法测定NO含量和NOS活力、ELISA法测定TGF-β1含量。结果小檗碱在1.25~10 mg/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高NO含量和NOS活力、降低TGF-β1含量。结论小檗碱可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成的作用,对抑制心肌纤维化,改善心室重构有积极意义,其作用机制与促进心肌成纤维细胞分泌NO、减少TGF-β1含量有关。     

异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的:探讨异丙酚(Propofol)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFb)增殖的机制。方法:用AngⅡ建立诱导新生大鼠CFb纤维化模型。将心肌细胞分为对照组、AngⅡ组和异丙酚组。用流式细胞仪测定各组细胞的周期分布;用ELISA法测定各组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;用Western Blot法测定各组细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达量;用免疫细胞化学化法测定各组细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)的表达。结果:100μmol/L的异丙酚对AngⅡ诱导的大鼠CFb的增殖抑制效果最显著(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组细胞G_0/G_1期细胞百分率降低(P<0.01),S期和G_2/M期细胞百分率升高(P<0.01);异丙酚组细胞的G_0/G_1期细胞百分率高于AngⅡ组(P<0.01),S期和G_2/M期细胞百分率低于AngⅡ组(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组大鼠的CFbⅠ、Ⅲ型胶原含量增加(P<0.01);异丙酚组大鼠的CFbⅠ、Ⅲ型胶原含量低于AngⅡ组(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组大鼠CFb中TGF-β1的蛋表达升高(P<0.01),异丙酚组大鼠CFb中TGF-β1的表达低于AngⅡ组(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组大鼠CFb中ERK1/2和cPKCα的表达增加(P<0.01);异丙酚组大鼠CFb中ERK1/2和cPKCα的表达低于AngⅡ组。结论:异丙酚能够抑制AngⅡ诱导的大鼠CFb的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的增加,其机制与降低细胞中TGF-β1的蛋白表达和抑制ERK1/2、cPKCα通路有关。     

RhoA对AngⅡ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的构建dominant negative N19RhoA重组腺病毒并感染血管外膜成纤维细胞(AF),观察RhoA对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的AF增殖的影响。方法运用pAdEasy-1腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因N19RhoA的腺病毒重组质粒pAd-CMV-N19RhoA-eGFP,并感染体外培养的大鼠AF,然后用1×10-7mol/L的AngⅡ处理24 h。Rho pull-down分析法测定RhoA活性;BrdU ELISA法检测AF的增殖情况。以同时构建的pAd-CMV-eGFP作为对照。结果1×10-7mol/L AngⅡ处理感染pAd-CMV-N19 RhoA-eGFP的AF 30 min后,其GTP-RhoA的表达明显升高,提示AngⅡ可激活RhoA信号分子;感染pAd-CMV-N19 RhoA-eGFP的AF,AngⅡ诱导的BrdU掺入明显受到抑制。结论RhoA信号分子对AngⅡ诱导的AF增殖具有调节作用。     

RhoA对AngⅡ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 构建dominant negative N19RhoA重组腺病毒并感染血管外膜成纤维细胞(AF),观察RhoA对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的AF增殖的影响.方法 运用pAdEasy-1腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因N19RhoA的腺病毒重组质粒pAd-CMV-N19RhoA-eGFP,并感染体外培养的大鼠AF,然后用1×10-7 mol/L的AngⅡ处理24 h.Rho pull-down分析法测定RhoA活性;BrdU ELISA法检测AF的增殖情况.以同时构建的pAd-CMV-eGFP作为对照.结果 1×10-7 mol/L AngⅡ处理感染pAd-CMV-N19RhoA-eGFP的AF 30 min后,其GTP-RhoA的表达明显升高,提示AngⅡ可激活RhoA信号分子;感染pAd-CMV-N19RhoA-eGFP的AF,AngⅡ诱导的BrdU掺入明显受到抑制.结论 RhoA信号分子对AngⅡ诱导的AF增殖具有调节作用.     

血管紧张素Ⅱ2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞，观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果在血管紧张素Ⅱ刺激下，ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０４６２±００２６）增殖能力明显强于正常组成纤维细胞（０３８９±００２１，Ｐ＜００１），纤维连接蛋白基因及蛋白质表达与正常组成纤维细胞比较显著增加，（３４１±４１）％、（１６２±２３）％（Ｐ＜００１）。结论ＡＴ２受体对ＡＴ１受体介导的细胞增殖和分泌纤维连接蛋白有一定的抑制作用     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:研究槲皮素(Quercetin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖的影响,并探讨其对心肌纤维化的可能作用机制.方法:采用细胞培养技术在体外建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖建立心肌纤维化细胞模型,采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,分别观察蛋白激酶A抑制剂(H-89)、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(genistein)及槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响.结果:genistein抑制AngⅡ诱导心脏成纤维细胞增殖作用(P＜0.01),加入Que后其抑制作用更加显著(P＜0.01),但对H-89的抑制作用不明显(P＞0.05),说明Que与genistein有协同作用,部分通过酪氨酸激酶途径抑制AngⅡ(10-6mol/L)诱导的细胞增殖.结论:槲皮素通过部分酪氨酸激酶途径抑制CFb增殖.     

越橘中原花青素抑制新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及其作用机制

目的 研究越橘中原花青素对血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, AngⅡ) 诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardiac fibroblast, CFb) 增殖的影响及其作用机制。方法 用 AngⅡ诱导新生大鼠 CFb 增殖,采用 MTT 法检测细胞增殖,ELISA 法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及转化生长因子β1 (TGF-β1) 的量,硝酸还原酶法、分光光度法检测 NO、一氧化氮合酶 (iNOS) 活性,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学法测定 p27 蛋白的量。结果 原花青素 (25、50、100 mg/L) 可抑制 AngⅡ 诱导的 CFb 增殖、胶原合成增加及TGF-β1蛋白量增多,并明显提高 CFb NO 的量、iNOS 的活性,同模型组比较差异有显著性 ( P ＜0.05、0.01),且呈现剂量依赖性。流式细胞仪检测表明 G0/G1 期细胞比例随原花青素质量浓度增加而增加,S期细胞比例随原花青素质量浓度增加而减少,与模型组相比差异有显著性 ( P ＜005、0.01),免疫细胞化学染色结果也表明原花青素可增加 p27 的蛋白表达,与模型组相比具有统计学意义 ( P ＜0.01)。结论 原花青素通过促进 p27 的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而抑制 CFb 增殖和胶原分泌量的增加。     

川芎嗪对Nogo基因调控心肌成纤维细胞增殖作用的影响

【摘要】 目的 探讨Nogo基因对心脏成纤维细胞增殖的调控作用,以及川芎嗪干预心肌成纤维细胞增殖的机理。方法 培养新生大鼠心肌成纤维细胞,以实时荧光定量PCR和Western blot方法检测血管紧张素Ⅱ和不同浓度川芎嗪对培养心肌成纤维细胞Nogo表达和胶原合成的影响。结果 在川芎嗪干预后,由血管紧张素Ⅱ诱导的Nogo-A mRNA、胶原Ⅰ mRNA表达升高出现了下降(P<0.05),而Nogo-B mRNA的表达下降在川芎嗪干预后有所恢复,与对照组相比,Nogo-A蛋白和Nogo-B蛋白亦出现类似变化。结论 血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞胶原蛋白合成增加,而川芎嗪对其具有抑制作用,川芎嗪的抗纤维化作用可能与Nogo基因的调控作用有关。     

大黄素对血管紧张素Ⅱ刺激人肾成纤维细胞增殖、胶原表达的抑制效应研究

目的：研究大黄素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激人肾成纤维细胞（KFB）增殖、胶原表达等的抑制效应。方法：用^H-TdR掺入法，流式细胞仪及免疫组化化学技术观察了AngⅡ1对KFB增殖，细胞周期及I型胶原表达的影响以及大黄素对AngⅡ作用于KFB的保护效应。结果：①AngⅡ10^-10mol/L至10^-6mol/L增加KFB^3H-TdR掺入率，第1、3天呈计量依赖关系（r1=0.709,P＜0．01；r3=0.806,P＜0．01）；不同浓度的大黄素（30－100μg/ml）第1、3和5抑制了AngⅡ10^-6mol/L诱导的KFB^3H-TdR掺入率，呈剂量依赖性特点。②AngⅡ在10^-6mol/L明显促进KFBG1向S期转化（P＜0．01）；大黄素在100μg/ml抑制了KFBG1向S期转化（P＜0．01）。③AngⅡ在10^-6mol/L增加了KFBI型胶原表达（P＜0．05），大黄素明显降低了AngⅡ诱导的I型胶原表达（P＜0．05）。结论：大黄素可抑制AngⅡ诱导的KFB增殖，I型胶原表达，在预防肾间质纤维化可能起重要作用。     

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究苦参碱 (matrine)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardialfibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型 ,采用MTT法检测Mat对CFb增殖的影响 ;羟脯氨酸测定检测CFB胶原合成量 ;RT PCR检测Mat作用下CFb的Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP 13)、组织金属白酶抑制因子 1(TIMP 1)、TGFβ 1的基因表达情况。结果 :①在一定范围内 ,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成 (P <0 .0 1) ,②苦参碱可以降低Ⅰ型胶原和TGFβ 1基因mRNA表达 ,③苦参碱可以提高MMP 13基因mRNA表达。结论 :苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原合成增加 ,从而发挥有效的抗心肌纤维化作用     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的：观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ（ Ang Ⅱ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响,探讨其可能机制。方法应用血清药理学方法制备大鼠含药血清,采用复合酶消化和差速贴壁法原代培养心肌成纤维细胞,MTT法测定芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响, ELISA法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与转化生长因子β1（ TGF－β1）水平,比色法测定细胞总抗氧化能力（ T－AOC）及丙二醛（ MDA）含量,Western blot法测定Smad3活化水平。结果芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌（ P＜0.05,P＜0.01）,降低TGF－β1含量及Smad3活化水平（P＜0.05,P＜0.01）。此外,芝麻素含药血清可明显提高成纤维细胞抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA生成（ P＜0.05,P＜0.01）。对照血清对上述各项指标均无明显影响。结论芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖与胶原分泌,其机制可能与改善氧化应激状态、调节TGF－β1／Smad信号通路有关。     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的调节作用

目的：探讨缬沙坦对血管紧张素Ⅱ（angiontensinⅡ,AngⅡ）诱导的大鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）增殖的调节作用,并探讨其新的作用机制.方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;用不同浓度的缬沙坦（10-5、10-6、10-7 mol/L）对AngⅡ诱导CFs增殖干预,应用四氮唑盐试验（MTT）和3H-TdR掺入法检测其对心脏成纤维细胞的增值作用.结果：在一定范围内,缬沙坦以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFs的增殖（P＜0.01）.结论：缬沙坦能降低AngⅡ诱导的大鼠CFs的增值作用,是抗心肌纤维化发生的有效药物.     

RhoA／Rho激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

【目的】探讨RhoMRho激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）刺激心肌成纤维细胞（cadiac fibroblasts，CFBs）增殖和胶原合成中的作用。【方法】采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFBs,并用AngⅡ诱导CFBs增殖和胶原合成。采用四氮唑盐比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸法测定CFBs胶原含量．RT-PCR检测RhoA/Rho激酶mRNA的表达，Western blot检测肌球蛋白结合亚基磷酸化（phosphorylation of myosin—binding subunit，MBS-P）表达作为Rho激酶功能活化的标志。【结果】AngⅡ（10-Tmol／L）刺激48h可诱导新生SD大鼠CFBs的Rho激酶活化（P〈0．01），上调RhoA、Rho激酶mRNA表达（P〈0．05，P〈0．05）；Rho激酶特异性抑制剂HYDROXYFASUDIL（h4413）对AngⅡ刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用（P〈0．05，P〈0．05）。【结论】RhoMRho激酶信通路可能在调控AngⅡ刺激CFBs增殖和胶原合成中发挥重要作用。     

血管紧张素Ⅱ对肾成纤维细胞增殖及分泌白细胞介素—6的影响

目的 研究血管紧张素（Ang)Ⅱ对人肾成纤维细胞（KFB）增殖及分泌白细胞介素（IL－6）的影响，为完善Ang Ⅱ致肾纤维化机理提供新实验依据。方法 分离培养人胎肾成纤维细胞，经鉴定后分别采用MTT法和放射免疫分析法（RIA）检测AngⅡ对KFB增殖及分泌IL－6的影响。结果 10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于KFB后48及72小时，可明显促进细胞增殖；无AngⅡ刺激时，体外培养的正常人KFB可分泌微量的IL－6，且呈时间依赖性，10^-7-10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于细胞6小时，即可迅速而显著地刺激细胞分泌IL－6，10^-6mol/L AngⅡ作用24－48小时，均可显著增加细胞IL－6的分泌。结论 不同浓度的Ang Ⅱ（10^-7-10^-6mol/L)作用于人KFB后，可促进细胞增殖，提高细胞对IL－6的分泌量。推测这可能是在各种肾脏疾病进展时，AngⅡ 参与肾小管间质病变、促进肾纤维化的机制之一。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用。方法用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖。结果AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用。结论HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的 检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用.方法 用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖.结果 AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用.结论 HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用.