HMGB1通过TLR4促进心肌缺血损伤并调节脾脏CD4~+、CD8~+T细胞和Th17细胞比例

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通过Toll样受体4 (TLR4)调控心肌缺血损伤及对脾脏组织CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及Th17细胞亚群的影响。方法 C57BL/6野生型小鼠(WT)和TLR4基因敲除(TLR4-/-)小鼠各30只,随机分为对照组、异丙肾上腺素诱导心肌缺血(ISO)组和ISO联合重组HMGB1(r HMGB1)组。采用心脏超声检查小鼠心功能,应用HE染色和天狼星红染色观察心肌组织病理学变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,流式细胞术检测脾脏组织中CD4~+T细胞、CD8~+T细胞和Th17细胞亚群的比例。结果与对照组相比,ISO组小鼠诱发心脏功能损害、心肌组织坏死和纤维化、心肌细胞凋亡,脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例升高;与ISO组小鼠相比,ISO联合r HMGB1组心脏功能损害、心肌组织坏死和纤维化、心肌细胞凋亡状况均加重,脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例更高;与ISO联合r HMGB1组野生型小鼠相比,ISO联合r HMGB1组TLR4-/-小鼠心脏功能损害、心肌组织坏死和纤维化和心肌细胞凋亡减轻,脾脏组织CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例显著降低。结论 HMGB1通过TLR4诱发心肌缺血时心肌组织损伤,并上调脾脏组织CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例,从而可能促进心肌组织炎症损伤。     

CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型中CD4~+T细胞亚群格局及其作用

本研究主要关注BALB/c小鼠感染柯萨奇病毒B3型(CVB3)后CD4+T细胞亚群格局的变化及其对病毒性心肌炎发病的贡献度。CVB3腹腔感染小鼠后第7d,通过小鼠体重下降率、心肌损伤血清学指标肌酸激酶(CK)活性以及心肌组织病理学改变等多项指标证实小鼠心肌炎模型的成功建立。经Real-time PCR检测感染第7d脾脏CD4+T细胞亚群主要细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-17F及转录因子Foxp3表达情况;以流式细胞术检测了CD4+T细胞各亚群比例,并通过多元线性回归分析法评估了各T细胞亚群对病毒性心肌炎发病的影响。结果显示,与对照组相比,CVB3感染小鼠脾脏IL-17A、IL-17F、IFN-γ表达均显著上升(分别约为12、8.5、5倍),而IL-4和Foxp3表达无明显变化。CVB3感染小鼠脾脏中CD4+IL-17+Th17细胞的上调幅度最为明显,约2.75倍,其次为IFN-γ+Th1细胞,上调约2.27倍,而Th2和Treg细胞无明显变化。进一步统计学分析显示,Th17对病毒性心肌炎发病的贡献度最高(1.808),Th1次之,贡献度为1.581,而Th2和Treg对病毒性心肌炎发病无显著影响,提示CD4+T细胞亚群格局变化与病毒性心肌炎发病密切相关,其中以Th17对心肌炎发病的贡献度尤为显著。     

CVB3诱导Th17/Treg失衡导致小鼠病毒性胰腺炎

目的构建CVB3诱导的小鼠胰腺炎模型, 观察胰腺组织病理学损伤和浸润Th17/Treg细胞的占比变化。方法 BALB/c小鼠腹腔注射CVB3构建急性病毒性胰腺炎模型, 通过HE染色观察胰腺病理学改变;q-PCR检测胰腺组织病毒核酸载量和细胞因子(IFN-γ、IL-6和IL-17)mRNA的相对表达量;流式细胞术检测胰腺组织浸润细胞CD45+CD3+T细胞、CD4+和CD8+T细胞、Th17和Treg细胞占比。结果 CVB3感染第3天胰腺组织病毒核酸载量为0.96±0.18, 且随感染时间点推移而逐渐降低;与3dpi组相比, 7dpi组胰腺组织病毒核酸载量有降低趋势(0.96±0.18 vs. 0.62±0.14), 但无统计学差异。胰腺组织炎症细胞浸润在7dpi后明显增加, 损伤评分>2;浸润的Th17细胞(1.05±0.21 vs. 22.13±5.79)和Treg细胞(3.11±0.78 vs. 8.25±1.30)在CD4+T细胞中占比在感染后7天同时升高(P<0.05), 且Th17/Treg比值也明显增高(P<0.01)。与对照组相比, CVB3感染第7天,...     

三七丹参片通过免疫调节发挥对病毒性心肌炎小鼠的治疗作用北大核心CSCD

目的:研究三七丹参片经免疫调节发挥对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的治疗作用。方法:90只小鼠随机分为正常对照组、模型组、三七丹参片低(0.43 g/kg)、中(0.86 g/kg)、高(1.72 g/kg)剂量组、阳性对照组(利巴韦林,1 mg/kg),每组15只。除正常对照组外,其余各组均经腹腔注射柯萨奇B3病毒(CVB3)构建病毒性心肌炎模型,并于建模成功后给予相应剂量药物,连续给药10 d,1次/d。末次给药结束12 h后,超声心动图检测心脏射血分数(EF)、心率(HR);HE染色观察小鼠心肌损伤情况;ELISA检测心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白、肌红蛋白水平;流式细胞术检测脾脏CD4~+T/CD8~+T、辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)淋巴细胞比例;免疫荧光检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在心肌组织中的表达水平;免疫组化法检测Th17转录因子维甲酸相关孤核受体γt(RoRγt)、Treg转录因子叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白在心肌组织中阳性表达水平;TUNEL法检测小鼠心肌细胞凋亡率;Western blot检测心肌组织中IL-17、IL-10、先天免疫力蛋白泛素蛋白酶2(Senp2)、免疫炎症反应相关通路蛋白Toll样受体-4(TLR4)、果蝇双翅边缘缺刻同源基因1(Notch1)表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠死亡率增高、心肌细胞坏死及炎症浸润等病理损伤加重,肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白、肌红蛋白等心肌损伤标志物表达、心肌细胞凋亡率、心肌组织MIF表达、RoRγt阳性表达、Th17/Treg、CD4~+T/CD8~+T、IL-17、IL-10、TLR4、Notch1蛋白表达升高(P<0.05),EF、HR、Foxp3阳性表达、Senp2蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,三七丹参片各剂量组及阳性对照组小鼠死亡减少,炎症及免疫功能相关蛋白表达与模型组相反,心功能提高,心肌损伤相关指标表达降低、Th17/Treg及CD4~+T/CD8~+T趋于平衡,且上述指标变化差异均有统计学意义(P<0.05),三七丹参片剂量越高上述指标变化越明显(P<0.05);阳性对照组与三七丹参片中剂量组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三七丹参片可能通过调节免疫功能,降低炎症反应,来改善VMC小鼠心肌损伤及凋亡,且其降低免疫炎症反应作用可能与抑制Notch1、TLR4通路激活有关。     

NF-κB寡核苷酸对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达影响的研究

为探讨NF-κB寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达的影响,建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,将NF-κB ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、模型组和实验组。42d后用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏Th17、Treg百分率、凋亡率;qRT-PCR检测IL-17、TGF-β和IL-6mRNA表达;用ELISA检测血清和关节液IL-17、TGF-β、IL-6含量。结果显示实验组大鼠脾脏Th17占CD4~+T细胞比例及IL-17和IL-6mRNA表达、血清和关节液中IL-17和IL-6的水平均低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Th17凋亡百分率低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg占CD4~+T细胞比例及TGF-βmRNA表达、血清和关节液中TGF-β的水平均高于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg凋亡百分率与模型组相比明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。由此可知,NF-κB ODN调节CD4~+T细胞Th17、Treg之间细胞平衡及相关细胞因子的分泌,对CIA有较好的治疗作用。     

辐射损伤后T细胞亚群的免疫重建特点及中药山茱萸的调节作用

目的:探讨小鼠辐射损伤后T细胞亚群免疫重建特点及山茱萸的调节作用。方法:采用X射线2.6 Gy单次全身照射建立小鼠辐射损伤模型及山茱萸实验模型,分别在辐射前后,检测小鼠血常规变化;应用流式细胞术检测CD3+、CD4+和CD8+T细胞及其Th1、Tc1、Th2、Th17和Treg亚群的比例。结果:辐射后第3天,外周血和脾脏中淋巴细胞总数及T细胞(包括CD4+、CD8+)比例显著降低(P0.05);T细胞在辐射后第5天开始重建,其中以CD8+T细胞为主,CD4+T细胞在第8天恢复重建。但T细胞分泌IFN-γ能力(Th1/Tc1)低于正常对照组(P0.05)。相反,Th2、Th17、Treg亚群比例显著增高(P0.05)。与照射组相比,山茱萸处理小鼠Th1亚群比例明显上调(P0.05),Th2、Th17、Treg亚群的比例或数量显著下降(P0.05)。结论:X射线单次照射后,CD8+T细胞免疫重建早于CD4+T细胞,但IFN-γ分泌能力较弱。山茱萸可显著上调Th1比例,抑制Th2、Th17、Treg增殖,改善辐射诱导T细胞亚群失衡,增强辐射损伤后Th1类细胞亚群的免疫重建优势。     

芪芍五味子复方制剂对病毒性心肌炎小鼠免疫调节机制的研究

目的研究黄芪、赤芍、五味子组成的芪芍五味子复方制剂调节病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子表达的机制。方法 Balb/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组、中药高、中、低剂量组及VitC和病毒唑联用组。小鼠接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC模型,流式细胞仪检测外周血CD4(+Th)和CD8(+Ts)淋巴细胞亚群数目及比值,ELISA检测IFN-γ、IL-4水平,心肌作组织病理学检查。结果与正常小鼠比较,病毒对照组小鼠外周血CD4+和CD8+淋巴细胞亚群数目下降,CD4+/CD8+下降,血清IFN-γ水平升高,IL-4水平降低(P0.05),中药治疗组小鼠淋巴细胞亚群数目及CD4+/CD8+均高于病毒对照组(P0.05),IFN-γ水平高于病毒对照组及VitC和病毒唑联用组(P0.05),同时小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻。结论芪芍五味子复方制剂能调节外周血T淋巴细胞数目及比值,诱生Th1型细胞因子IFN-γ减轻CVB3感染小鼠心肌损伤,起到保护作用。     

白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡及JAK1/STAT3信号通路蛋白的影响北大核心CSCD

目的:基于蛋白酪氨酸激酶1/信号转导因子3(JAK1/STAT3)信号通路探讨白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:动物实验分为对照组、模型组、实验组、抑制剂组,模型组、实验组、抑制剂组小鼠尾静脉注射印度墨水及灌胃麦角蛋白复制过敏性紫癜模型,实验组、抑制剂组小鼠每日灌胃0.1 g/kg白芍药总苷和AG490,连续处理4周。ELISA测定各组小鼠血清IL-10及IL-17含量;流式细胞术检测各组小鼠血清Treg、Th17变化;Western blot检测各组小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达。结果:与对照组相比,模型组、实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和IL-10含量明显下降,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显升高(均P<0.05);与模型组相比,实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和血清IL-10含量明显升高,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显降低(均P<0.05)。结论:白芍总苷可通过抑制JAK2/STAT3信号通路调控过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡。     

大黄酸对IgA肾病Peyer结T细胞亚群的调节作用

目的探讨Peyer结T细胞亚群失衡在IgA肾病(IgAN)发病机制中的作用及大黄酸对其的调节作用。方法采用牛血清白蛋白+LPS+CCl4法建立IgA肾病大鼠模型。将32只SD雄性大鼠随机分成对照组、IgA肾病模型组、大黄酸预防组和大黄酸治疗组。10周末采用免疫荧光检测肾小球IgA沉积,ELISA方法检测血清中Th1类细胞因子IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4含量。用流式细胞术测定各组Peyer结CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞、γδT细胞亚群和IgA+B细胞(IgA+B220+)的比例。结果和对照组相比,模型组中Th2类细胞因子IL-4含量增加而Th1类细胞因子IFN-γ的含量降低(P均0.05);模型组中CD4+T细胞、CD4+/CD8+、IgA+B220+B细胞比例升高(P均0.05);模型组中γδT细胞亚群的比例增加,CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞的比例降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。大黄酸预防组和大黄酸治疗组均可减少IL-4含量、CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+比例和IgA+B220+B细胞比例,并提高IFN-γ的含量。结论 Peyer结Th细胞亚群失衡在IgAN发病机制中起到一定的作用,而大黄酸对Peyer结T细胞亚群平衡具有调节作用。     

小儿支气管哮喘患者血清T淋巴细胞亚群的表达及临床意义分析

目的探究小儿支气管哮喘患者血清T淋巴细胞亚群的表达特点及其临床意义。方法选取本院2018年1月～2019年1月收治的86例支气管哮喘患儿作为观察组,另选择同一时期在本院进行体检的86例健康儿童作为对照组。比较两组儿童血清中血CD3~+、CD4~+、CD8~+和CD4~+/CD8~+水平、Th1、Th2、Th17、Treg和Th1/Th2、Th17/Treg水平。结果观察组儿童CD4~+、CD4~+/CD8~+明显高于对照组,CD8~+明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组儿童血清中Th1、Treg、Th1/Th2表达水平明显低于对照组,Th2、Th17、Th17/Treg表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管哮喘发病与血清中T细胞亚群的表达异常密切相关,Th1/Th2和Th17/Treg平衡失调,和支气管哮喘发病程度和发展情况有关。因此小儿支气管哮喘中血清T淋巴细胞亚群的表达水平变化有着重要的临床意义,能为小儿支气管哮喘的发展及预后提供参考依据。     

成人哮喘患者Treg/Th17细胞失衡与呼出气一氧化氮的相关性研究

目的:探讨成人哮喘患者Treg/Th17细胞失衡与呼出气一氧化氮(FeNO)的相关关系。方法:募集成人哮喘患者17例,慢性咳嗽非哮喘患者16例。所有患者均检测FeNO值,并用ELISA法检测血浆IL-17的表达水平,流式细胞术检测外周血中Treg、Th17细胞占CD4~+T淋巴细胞比例。比较两组患者FeNO水平的差异及其与Treg/Th17的相关关系。结果:与慢性咳嗽组相比,哮喘组血浆IL-17浓度升高(P<0.05)、外周血Th17/CD4~+T细胞比值升高(P<0.001)、FeNO水平升高(P<0.001)、Treg/Th17细胞的比值降低(P<0.001),而Treg/CD4~+细胞比值无明显变化(P>0.05)。哮喘组FeNO值与外周血Treg/CD4~+T细胞比值无明显相关性,而与Th17细胞占CD4~+T淋巴细胞比例呈正相关(r=0.663,P=0.01),与Treg/Th17细胞比值呈负相关(r=-0.757,P=0.002)。结论:哮喘患者FeNO水平升高与Treg/Th17失衡有关,主要与Th17细胞表达升高有关。     

HIV感染者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/-调节性T细胞表达水平对疾病进展的影响

目的:探讨HIV感染者外周血中CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)、CD4+ CD25+ CD127low/-Treg的水平及其与其他免疫指标的关系.方法:采集68例未经抗HIV治疗的HIV/AIDS患者(长期不进展组即LTNP组29例、典型进展的HIV感染组27例、AIDS组12例)及20例健康成人的外周抗凝全血,经免疫荧光染色,应用流式细胞仪分析CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg的含量,并进行统计学分析.结果:除CD8+T细胞外,HIV/AIDS患者外周血中CD4+T细胞、NK细胞、CD4 +/CD8+结果均明显低于健康对照组(P＜0.05);随着疾病的进展,LTNP组、HIV组、AIDS组CD4+T细胞百分比、绝对值计数,CD8+T细胞绝对计数,NK细胞绝对计数,CD4 +/CD8+比值逐渐下降,而CD8+T细胞百分比逐渐上升.对CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4+ CD25+CD127low/-Treg百分含量、绝对计数进行多重比较发现,各组间CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4-CD25+ CD127low/-Treg所占CD4+T细胞百分含量的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/ Treg细胞百分含量逐渐上升,LTNP组与健康对照组之间、HIV组和AIDS组之间CD4+ CD25+Foxp3+/CD127low/ Treg绝对计数差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组间的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3-/CD127low/-Treg绝对计数逐渐下降.结论:CD4+ CD25+ Foxp3 +/CD127low/-Treg在HIV持续感染的免疫发病机制中有一定作用.     

NOD/Ltj小鼠Ⅰ型糖尿病不同发病阶段细胞免疫状态研究

目的:通过对NOD/Ltj小鼠在未发病、发病初期与发病末期不同组织器官中CD4~+T、CD8~+T细胞,Th1、Th2、Th17亚群,iNKT细胞频率及亚群,细胞因子、相关转录因子进行观察分析,进一步了解NOD/Ltj小鼠Ⅰ型糖尿病不同发病阶段细胞免疫功能状态。方法:选用雌性NOD/Ltj小鼠为实验对象。血糖仪检测小鼠空腹血糖值,根据尿糖阳性且连续2次≥11. 1 mmol/L作为T1D发病标准将动物分为未发病组、发病初期组、发病末期组。流式细胞技术(FCM)检测各组小鼠外周血、胸腺、脾脏、肝脏中CD4~+T、CD8~+T细胞,Th1、Th2、Th17亚群,iNKT细胞频率及亚群比例以及腹股沟淋巴结CD4~+T、CD8~+T细胞; CBA检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-17A、IL-4、IL-10; WB检测PLZF、T-bet、GATA-3、ROR-γt。结果:①与未发病组比较,发病初期组CD4~+、CD8~+T细胞频率在脾脏、肝脏、胸腺、腹股沟淋巴结中均显著增加(P0. 05);与发病初期组比较,发病末期CD4~+T细胞频率在肝脏、胸腺、腹股沟淋巴结及外周血中均显著降低(P0. 05)。②在脾脏、肝脏中,与未发病组和发病初期组比较,发病末期组Th1亚群比例显著增加(P0. 05);在肝脏中,与发病初期组比较,发病末期组Th2、Th17亚群水平显著升高(P0. 05)。③与未发病组比较,发病初期组肝脏、腹股沟淋巴结中iNKT细胞频率均显著增高(P0. 05);与发病初期组比较,发病末期组外周血、肝脏中iNKT细胞频率显著降低(P0. 05);与未发病组比较,发病初期组和发病末期组胸腺iNKT1亚群比例均显著增加,iNKT2亚群比例均显著降低(P0. 05),脾脏、肝脏、腹股沟淋巴结iNKT1及iNKT2亚群比例三组两两比较均差异均无统计学意义(P0. 05)。④在脾脏和腹股沟淋巴结中致炎性细胞因子和抑炎性细胞因子水平在发病初期较未发病组和发病末期组均显著升高(P0. 05);在肝脏中致炎性细胞因子水平随小鼠病情进展逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(P0. 05);抑炎性细胞因子水平在发病初期最高,发病末期显著降低(P0. 05)。⑤胸腺PLZF相对表达量,三组两两比较差异均无统计学意义(P0. 05);脾脏和肝,与未发病组和发病初期组比较,发病末期组T-bet相对表达量显著增加(P0. 05)。结论:①发病初期CD4~+T和CD8~+T细胞的增加,特别是CD4~+T细胞的增加以及Th亚群的失衡是导致胰岛炎重要的免疫基础;②发病初期iNKT细胞频率的增加以及胸腺iNKT1/iNKT2亚群比例的翻转,提示了iNKT细胞在NOD/Ltj小鼠发病初期可能参与了T1D的发生。     

转录因子IRF8抑制Th17细胞分化并减轻T细胞免疫介导的小鼠结肠炎

 目的：转录因子干扰素调节因子（interferon regulatory factor, IRF）家族与Th17的发育密切相关,近年来发现Th17细胞在炎症性肠病的发病中发挥重要作用,本研究探讨IRF8对Th17发育及T细胞转染免疫介导的小鼠实验性肠炎的影响。方法：(1)采用流式细胞术分选野生型（WT）或IRF8全基因敲除(IRF8 -/-)小鼠脾脏和淋巴结的naive CD4 +T细胞(CD4 + CD62L +CD44 low),在Th1、Th2或Th17极化的条件下培养,采用流式细胞术检测Th1、Th2和Th17的比例。(2)建立实验性肠炎模型：采用免疫磁珠法分选WT或IRF8 -/-小鼠中的脾脏和淋巴结中CD4 +CD25 +Treg,WT小鼠的CD4 + CD45RB hi T细胞单独或者分别联合WT或IRF8 -/-小鼠的CD4 +CD25 +Treg腹腔注射给RAG1 -/-小鼠;WT或IRF8 -/-小鼠的naive CD4 + CD45RB hi T细胞腹腔注射给RAG1 -/-小鼠;观察上述小鼠每周体重的变化,第5周时处死小鼠,进行结肠炎病理评分和肠系膜淋巴结T淋巴细胞亚群检测。结果：(1)IRF8 -/-较WT的naive CD4 +T细胞在极化条件下向Th17细胞分化更明显(P<001),而对Th1和Th2细胞的分化无影响(P>0.05)。(2)CD4 + CD45RB hi T细胞转染给RAG1 -/-小鼠,IRF8 -/-较WT供体鼠引起的RAG1 -/-小鼠体重显著降低(P<0.05),结肠炎评分显著增高（P<0.05）,且肠系膜淋巴结中IL-17 +CD4 +细胞比例明显增高(P<0.01),而 IFN-γ +CD4 + 和 Foxp3 +CD4 +细胞比例无影响(P>0.05);IRF8 -/-小鼠的CD4 +CD25 +Treg对WT小鼠CD4 + CD45RB hi T细胞转染给RAG1 -/-小鼠诱发的免疫介导的结肠炎显示出正常的免疫抑制作用。结论：转录因子IRF8基因敲除促进CD4 +T细胞向Th17细胞分化,促进转染naive CD4 +T细胞诱导的实验性结肠炎的发生,IRF8基因敲除小鼠Treg细胞免疫抑制功能正常。     

Decorin提升小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性

目的评价高表达核心蛋白聚糖(Decorin)的小鼠乳腺癌细胞系4T1对正常小鼠脾细胞的免疫激活效应,明确Decorin对抗肿瘤免疫的调节作用。方法采用携带Decorin基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad.DCN感染小鼠乳腺癌细胞系4T1。与小鼠脾细胞共培养3d后,通过流式细胞术检测小鼠脾细胞的CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、T记忆细胞(Tm)和T调节细胞(Treg)的百分比;利用实时定量PCR(qPCR)技术检测Th1类细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的表达,Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)的表达,以及与杀伤相关基因穿孔素与颗粒酶B的表达。结果与小鼠乳腺癌细胞系4T1共培养后,小鼠脾细胞CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、Treg细胞比例无明显改变,但Tm细胞比例显著升高;同时,细胞因子、穿孔素和颗粒酶B表达下调。但是,病毒感染的4T1细胞,特别是Ad.DCN感染的4T1细胞可显著抑制Treg细胞,并部分逆转细胞因子表达的下调。结论 Decorin高表达可增强正常小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性,从而激活抗肿瘤免疫反应。     

不同宫颈癌临床分期患者外周血中T淋巴细胞及NK细胞的表达分析

目的分析宫颈癌患者外周血中T淋巴细胞及其亚群以及NK细胞的表达情况。方法前瞻性分析145例在我院就诊的宫颈癌患者的临床资料,按照宫颈癌FIGO临床分期差别分为:宫颈癌Ⅰ期38例、宫颈癌Ⅱ期42例、宫颈癌Ⅲ期35例、宫颈癌Ⅳ期30例;同期选择体检正常女性30例作为对照组。应用流式细胞仪检测各组患者外周血CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞亚群、调节性T细胞(Treg)以及NK细胞数量,同时计算各亚群的比例以及Treg占CD4^+T细胞的比例。应用多元Logistic回归分析评估各细胞亚群数量及比例与宫颈癌临床分期的相关性。结果与对照组相比,宫颈癌患者CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、NK细胞数量以及CD4^+/CD8^+比值均较低,Treg/CD4^+比值较高(均P <0.05),而CD8^+T细胞数量差异无统计学意义(均P>0. 05)。随宫颈癌病理严重程度递增,CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、NK细胞数量以及CD4^+/CD8^+比值逐步降低,Treg/CD4^+比值逐步增高(均P <0.05),而CD8^+T细胞数量差异无统计学意义(均P>0.05)。多元Logistic回归分析显示,Treg/CD4^+比值是宫颈癌临床分期的危险因素,CD4^+T细胞、CD4^+/CD8^+比值及NK细胞是其保护性因素(均P<0.05)。结论宫颈癌患者细胞免疫功能均不同程度降低,晚期患者降低最显著。检测T淋巴细胞亚群及NK细胞可用于宫颈癌患者免疫监测,为临床治疗及预后评估提供参考。     

生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠脾脏T淋巴细胞影响的研究

研究中药生脉饮与黄芩茎叶总黄酮合剂(以下简称生黄合剂)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠免疫调节机制的影响,探讨生黄合剂治疗VMC的免疫调节机制。用柯萨奇病毒B组3型(CVB3)感染BALB/c小鼠建立VMC模型,随机分为正常组、生黄合剂治疗组、生脉饮组、抗病毒口服液组、病毒对照组。药物治疗组均灌胃给药,0.2ml/10g,一日2次。感染病毒10d后,应用HE染色观察各组小鼠心肌损伤情况及小鼠的生存情况,应用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平。应用生黄合剂治疗后小鼠各脏器出现的病理性损伤明显减轻,CD3+及CD4+T细胞数量增加(P0.05),CD4+/CD8+比值明显高于模型组(P0.05)。生黄合剂可通过调节机体的T淋巴细胞比例来发挥其有益的免疫调节作用。     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞的变化及意义.方法:选取15例急性乙型肝炎(Acute Hepatitis B,AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、40例无症状携带者(Asymptomatic HBV carriers,AsC)及30例健康对照者,分别采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA检测外周血CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞百分率、核转录因子foxhead winged-helix box protein 3 (Foxp3)/retinoid-related orphan receptor gamma-t (RORγt) mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(Transforming growth factor-31,TGF-β1)/IL-17的水平.结果:AHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);而CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγtmRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).CHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-31水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组相比,AsC组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mR-NA、TGF-β1水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异(P＞0.05).结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞可能与HBV感染的状态有关.     

MBD2对Th2/Th17细胞平衡的调控及其在哮喘中的作用研究北大核心CSCD

目的:探究甲基CpG结合区域蛋白2(MBD2)在哮喘中的作用及其对Th2/Th17分化的影响。方法:在条件性敲除CD4+T细胞中MBD2表达的小鼠构建以中性粒细胞浸润为主的哮喘模型,并将小鼠分为4组:WT生理盐水组(A组)、WT哮喘组(B组)、CD4CreMBD2fl/fl生理盐水组(C组)、CD4CreMBD2fl/fl哮喘组(D组),每组10只。应用RT-PCR和Western blot实验检测MBD2在各组小鼠脾脏组织中的表达;使用乙酰胆碱(Mch)激发试验检测各组小鼠的气道高反应;收集小鼠肺泡灌洗液(BALF),使用血细胞计数法计算其中的细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量,ELISA法检测细胞因子IL-4与IL-17的表达,HE染色观察各组小鼠肺组织的病理学改变;免疫磁珠分选各组小鼠脾脏中的CD4+T细胞,流式细胞术、RT-PCR及ELISA分别检测Th2、Th17细胞比例及其相关细胞因子的表达水平;分离并培养小鼠na?ve CD4+T细胞,通过慢病毒载体以靶向沉默细胞中MBD2基因表达,流式细胞术检测其对na?ve CD4+T细胞Th2与Th17分化的影响。结果:与A、B组小鼠相比,C组与D组小鼠脾脏组织中MBD2的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01);A组与C组小鼠肺组织结构正常,而B组小鼠肺组织中支气管黏膜充血水肿,管腔狭窄,黏膜上皮细胞出现大量坏死脱落,大量炎症细胞浸润,D组介于A组与B组之间;与A组小鼠相比,B组与D组小鼠的气道反应性显著增高(P<0.05),且BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、IL-4及IL-17均显著增加(P<0.05),C组中仅有嗜酸性粒细胞及IL-4明显增加(P<0.01);而与B组相比,D组小鼠中嗜酸性粒细胞及IL-4表达均明显增加(P<0.05)。在脾脏淋巴细胞中,B组与D组小鼠的Th2、Th17细胞比例、GATA3和RORγt mRNA及IL-4与IL-17表达水平均较A、C组小鼠显著增加(P<0.01),与B组相比,D组小鼠中以Th2细胞及相关细胞因子占主导地位(P<0.05);成功利用慢病毒载体沉默小鼠na?ve CD4+T细胞MBD2的表达,且沉默其表达后能显著促进Th2细胞的分化比例(P<0.05),而Th17细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:敲除CD4+T细胞中MBD2基因表达可通过促进Th2细胞及IL-4细胞因子表达,而抑制Th17细胞及IL-17表达从而改善以中性粒细胞浸润为主的重症哮喘。     

热致死发酵乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白过敏小鼠的免疫调节作用

目的:观察热致死的发酵乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白(BLG)致敏小鼠Th1/Th2细胞平衡、血清抗体水平及T细胞亚群数量的影响,探讨其缓解过敏反应的作用。方法:用牛乳BLG和弗氏佐剂的混合液腹腔注射诱发BALB/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验动物随机分为空白组、致敏组和不同剂量的热致死发酵乳杆菌组。采用ELISA法测定各组小鼠血清总IgE、BLG特异性IgE和总IgG含量。体外分离培养各组小鼠脾细胞,采用ELISA法检测细胞上清液中Th1型细胞因子(IL-12、IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)水平,采用流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD3+、CD4+和CD8+T百分含量。结果:发酵乳杆菌组小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ/IL-4比值为13.53,显著高于致敏组的3.34(P<0.05);血清总IgE、BLG特异性IgE和总IgG水平显著降低(P<0.05);脾细胞中CD3+和CD4+T细胞比例升高,CD4+/CD8+比值趋近正常组。特别是高剂量的热致死发酵乳杆菌组小鼠脾细胞培养上清液中抑制IL-4分泌的效果显著优于致敏组(P>0.05),且该组小鼠血清的抗体水平和CD4+/CD8+比值与空白组相比无差异(P>0.05)。结论:热致死的发酵乳杆菌干预可改善小鼠的BLG过敏症状,其作用可能与促进Th1占优势的Th1/Th2细胞平衡,阻断IgE、IgG分泌及平衡T细胞亚群数量相关。