EHF病毒在人肾细胞融合中的结构蛋白分子定位分析和人胚肾细胞融合的电镜观察

用辣根过氧化物酶标记ＭｃＡｂＦ（ａｂ＇）_２、ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ、ＭｃＡｂ３Ｄ_８和ＭｃＡｂＡ_（３５），分别对２７例ＥＨＦ患者尿液中融合细胞（ＦＣ）进行免疫酶染色。结果ＭｃＡｂＦ（ａｂ＇）_２检出率为２７／２７（１００％）；ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ为１９／２７（７０．３７％）；ＭｃＡｂ３Ｄ_８为２０／２７（７４．０７％）；ＭｃＡｂＡ_（３５）为２／２７（７．４１％）。人胚肾细胞感染ＥＨＦ病毒后，在偏酸性（ｐＨ６．０）条件下可以产生特异性细胞融合现象，并经电镜证实了细胞之间膜的融合。此结果表明ＥＨＦ病毒可以导致人肾细胞融合，ＥＨＦ患者尿液中ＦＣ的形成可能与ＥＨＦ病毒膜蛋白在宿主细胞膜上的表达有关。     

两种方法检测EHF患者早期血清中病毒结构蛋白抗体的研究

ＥＨＦ病毒抗原经已知抗核蛋白（ＮＰ）的ＭｃＡｂＡ３５及抗膜蛋白的ＭｃＡｂＡ３Ｇ１亲和层析进行分离纯化，再经高压液相色谱（ＨＰＬＣ）进一步纯化，获得了高纯度的ＥＨＦ病毒结构蛋白：ＮＰ、ＭＰ。书ＮＰ、ＭＰ分别滴于ＰＶＤＦ膜，与早期患者血清进行免疫酶斑点试验，检测患者血清中相应结构蛋白的抗体，并结合临床资料进行临床转归分析；同时与ＨＩ、ＲＰＨＩ检测结果相比较。２８例ＥＨＦ患者血清，斑点试验检测仅ＭＰ抗体阳性４例，ＨＩ检出３例；ＲＰＨＩ检测仅ＮＰ抗体阳性１５例，有５例斑点试验同时检出ＭＰ抗体，说明斑点试验对ＭＰ抗体的检测敏感性高（抗体滴度亦高）。联系ＭＰ、ＮＰ抗体的出现与病情转归的关系发现，ＭＰ抗体先出现的患者病情普遍转重，ＮＰ抗体先出现的患者，病情转轻或趋于稳定，ＭＰ、ＮＰ抗体同时出现的患者，其转归介于上述二者之间，且ＨＩ、ＲＰＨＩ和斑点试验检测结果其差别无统计意义。提示斑点试验用于ＥＨＦ患者血清中结构蛋白抗体的检测更敏感，有可能作为患者病情转归的预测指标，值得进一步推广应用。     

EHF病毒在人肾细胞融合中的结构蛋白分子定位分析和人胚？…

用辣根过氧化物酶标记ＭｃＡｂＦ（ａｂ′）２，ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ，ＭｃＡｂ３Ｄ３８和ＭｃＡｂＡ３５，分别对２７例ＥＨＦ患者尿液中融合细胞（ＦＣ）进行免疫酶染色，结果ＭｃＡｂＦ（ａｂ′）２检出率为２７／２７（１００％）；ＭｃＡｂＬＶ４８Ａ为１９／２７（７０．３７％），ＭｃＡｂ３Ｄ８为２０／２７（７４．０７％）；ＭｃＡｂＡ３５为２／２７（７．４１％），人胚肾细胞感染ＥＨＦ病毒后，在偏酸性（ｐＨ６．０）条     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

戊型肝炎患者肝组织中HEV抗原的检测研究

目的：用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单克隆抗体和抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体研究急性戊型肝炎的免疫病理学,探讨二者在临床病理诊断中的应用价值。方法：（１）以杂交瘤技术制备的抗－ＨＥＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ,ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）作为第一抗体,用免疫组化ＬＳＡＢ法检测急性戊型肝炎患者肝组织中的ＨＥＶ抗原。（２）用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体以间接酶标法检测肝组织内的ＨＥＶ抗原。结果：用抗－ＨＥＶ单克隆抗体从１４例急性戊型肝炎肝标本中检出９例ＨＥＶ抗原阳性者（６４．２８％）,其中８例阳性标本用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体检测ＨＥＶＡｇ均为阳性。ＨＥＶ抗原在肝细胞浆表达以胞浆弥漫型为主,尚可见膜型表达。ＨＥＶ抗原阳性细胞集中分布有病变明显区,伴淋巴细胞浸润,病变较轻区也可见随机散在分布,部分     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究

目的：用卵巢癌抗独特型单链抗体６Ｂ１１ｓｃＦｖ代替肿瘤抗原免疫动物，观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应。方法：将６Ｂ１１ｓｃＦｖ交联钥孔虫戚虫血蓝素，辅以弗氏佐剂反复免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗血清。采用间接法ＥＬＩＳＡ，竞争抑制ＥＬＩＳＡ及免疫流式细胞法分析抗血清特性。结果：经ＥＬＩＳＡ检测显示，由６Ｂ１１ｓｃＦｖ刺激产生的抗抗独特型单链抗体（Ａｂ３）能与６Ｂ１１ｓｃＦｖ和卵巢癌组织抗原ＯＣ１６６９特异性结合。竞争抑制ＥＬＩＳＡ表明，Ａｂ３能有效抑制卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９（Ａｂ１）与ＯＣ１６６９的特异性结合。免疫流式分析结果可见，Ａｂ３能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系ＯＶ１细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ细胞表面结合。从以上结果可以证明Ａｂ３与Ａｂ１的抗原结合特性相同。结论：６Ｂ１１ｓｃＦｖ能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应，具有模拟抗原的作用，为６Ｂ１１ｓｃＦｖ作为卵巢癌抗独特型单链抗体疫苗的实际应用提供依据     

抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初…

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。分泌的抗体为ＩｇＧ     

乙型肝炎病毒在成人膜性肾病中的致病作用

为了进一步了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在成人膜性肾病（ＭＮ）发病中的作用。作者应用免疫组化方法对６７例ＭＮ，患者肾组织中的ＨＢＶ抗原进行了检测。年龄小于３０岁者２６例，３０～５０岁者３２例，大于５０岁者９例。肾组织中ＨＢＶ抗原检出率分别是７３．１％（１９／２６），７５％（２４／３２）和３３．３％（３／９）。５０岁以上ＭＮ患者肾组织中ＨＢＶ抗原检出率显著低于５０岁以下年龄组（Ｐ＜０．０５）。ＭＮ患者肾组织中以ＨＢｓＡｇ检出串最高，６７．２％（４５／６７），ＨＢｃＡｇ检出率２２．４％（１５／６７），ＨＢｅＡｇ仅１例阳性；ＨＢＶ抗原总阳性率６８．７％（４６／６７）。以３０例系膜增殖性肾炎（ＭｓＰＧＮ）为对照，ＨＢｓＡｇ检出率１０％（３／３０），ＨＢｃＡｇ、ＨＢｅＡｇ均为阴性。ＨＢＶ抗原总阳性率１０％（３／３０）。ＭＮ组肾组织内ＨＢＶ抗原检出率显著高于ＭｓＰＧＮ组（Ｐ＜０．０１）。本研究结果显示，ＨＢＶ抗原及其相应抗体形成的免疫复合物在膜性肾病，特别是中青年患者的发病机理中起着极其重要的作用，其中ＨＢｓＡｇ可能是最主要的致病抗原。     

自身免疫病患者及肿瘤患者血清干扰素抗体的测定

用ｒＩＦＮα２ｂ和ｒＩＦＮγ作为抗原建立了检测血清中相应抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。在１８８名健康体检者中检出的１例抗ｒＩＦＮα２ｂ阳性，２例ｒＩＦＮγ阳性，类风湿性关节炎患者、全身性红斑狼疮患者、全身性红斑狼疮患者、混合性结缔组织病患者以及肿瘤患者的这二种ＩＦＮ抗体水平（Ａ，ｘ±ｓ）明显高于对照者（Ｐ＜００５）。抗体检出率为２９％～６３％     

流行性出血热病毒单克隆抗体在临床早期诊断中应用的研究

用IFAT检测77例临床诊断为EHF病人的外周血白细胞中的病毒抗原。阳性率为50.6％。2—5病日的早期病人阳性率为64.3％(27/42)。并发现,病日越早,病情越重,阳性率越高。试验中应用了抗EHF病毒McAb4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者对3种McAb的反应表现为5种类型。不同McAb对抗原的检出率不同,混合使用McAb可提高阳性检出率。在EHF病毒抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。若联合检测EHF病毒抗原和急性期血清IgM抗体,可提高早期诊断的阳性率和准确性。     

流行性出血热病毒Vero-E6细胞病变株的分离和鉴定

从EHF患者血清中分离到8株EHF病毒,在E 6细胞中传代适应过程中,发现有5株EHF病毒分别在第4～10代出现规律的细胞病变(CPE),对其中两个CPE株(HFN-04和-19)进行了一系列特异性鉴定试验。实验结果表明:(1)病毒的CPE发展与病毒增殖动态完全一致;(2)CPE株的主要生物学和理化性状均符合EHF病毒;(3)用CPE株病毒感染细胞抗原片检测EHF患者双份血清,其恢复期血清抗体均呈4倍以上增高反应;(4)病毒的CPE可被患者血清及EHF、KHF免疫血清所中和,不能被正常兔血清和Reo病毒1—3型多价血清所中和;(5)CPE株病毒感染的E_6细胞几乎能完全吸收EHF患者血清及EHF、KHF抗血清中的特异性抗体;(6)CPE株病毒感染鼠脑悬液与EHF病毒A9株McAb25-1致敏血球呈阳性血凝反应。据此,首次证实了EHF病毒至少有部分毒株能引起E_6细胞规律性CPE。EHF病毒CPE株的发现为EHF的诊断和防治工作提供了有利条件。     

McAb ELISA IgM捕捉法对EHF快速诊断的研究

采用McAb ELISA捕捉法检测流行性出血热(EHF)患者血清特异性IgM抗体,检测EHF病人血清351份,总阳性率为94.58%,而正常人血清和非EHF病人血清146份全部阴性。第2病日血清中即可检出EHF-IgM抗体,第4、6病日阳性率分别为87.50%和96.43%,第8病日26份血清全部阳性。对1例典型EHF病人血清IgM抗体动态观察,发现病后1周抗体滴度最高,病后1个月明显下降,病后3个月转阴。     

三种特异性血清学方法诊断流行性出血热的评价

本文用IFAT、ELISA、HI平行检测了出血热患者血清161份的出血热病毒抗体，阳性57.9～95.1％；ELISA、HI和IFAT分别于2、4病日出现阳性；ELISA、IFAT分别于60、90病日阴转，HI94病日仍阳性；HI的阳性率（95.1％）高于IFAT（IgM57.9％、IgG88.4％）及ELISA（IgM75.6％、IgG65.9％），其发热期阳性率亦高于其他两法；ELISA-IgM、IgG的阳性率及ELISA-IgM、HI抗体的滴度随病情加重而增加。因此，ELISA（主要是ELISA-IgM）和HI具有高度特异性、敏感度，阳性出现早，HI在三法中灵敏度最高。     

Application of Monoclonal Antibodies against Epidemic Hemorrhagic Fever Virus in Early Clinical Diagnosis and in Viral Antigen Analysis

Indirect fluorescent antibody test (IFAT) was employed to detectviral antigens in the peripheral blood lymphocytes from 77 patients withclinically diagnosed epidemic hemorrhagic fever (EHF). The positive ratewas 50.7%, and it was 64.3% (27/42) for early cases (2nd to 5th day ofdisease). It was found that the earlier and the more severe the cases were,the higher the positive rate was. Three McAbs, 4B9, 4E7 and 3H4 havebeen introduced to IFAT. Five reaction patterns of the three McAbs withviral antigen positive cases were observed. The McAbs showed theirdifferences in respect of positive rate. Combination of McAbs could raisethe positive rate. In the cases of early phase with positive EHFV antigensin the leucocytes, the positive rate of specific IgM in acute phase sera was96.3%. The positive rate and accuracy of EHF early diagnosis could beraised by combined application of detection of the viral antigens andspecific serum IgM in the acute phase.     

间接法ELISA检测流行性出血热抗体

用间接法ELISA检测流行性出血热IgG抗体。54份EHF病人血清全部阳性,32份正常人、19份发热病人和18份误诊为EHF病人的血清全部阴性,与IFA检测结果相同。检测EHF病人系列血清,发病3d就可检出抗EHF IgG,抗体滴度随病程升高,表明间接法ELISA可用于EHF临床诊断。将间接法ELISA与IFA、RPHI和HI平行检测30份EHF病人血清,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1:43 211、1:413、1:253和1:143,有高度相关性,且ELISA比RPHI和HI更能检测出早期抗体。检测疫区人群血清4134份,间接法ELISA检出490份阳性,而IFA仅检出470份。结果表明间接法ELISA有较好的敏感度和特异度,尤其适用于血清流行病学研究。     

THE DURATION OF VIREMIA PATIENTS WITH EPIDEMIC HEMORRHAGIC FEVER

The duration of viremia in patients with epidemic hemorrhagic fever (EHF) was studied using immunofluorescence technique and cell culture assays. The duration of virus in plasma of EHF patients was about 1 week, which was concomitant with the febrile phase of the disease. Comparatively, the separation rate of viruses in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was greater (1.8 times) than in plasma, while the detected peak of EHF (in 4-7 days after onset of the disease) was found to be 2 or 3 days less than that of plasma, thus the detectable viremia was prolonged until the 8th to 11th day of the disease. High titre EHF antibody of IgG, TgM was unable to neutralize the virus in human blood. The results revealed that a blood-cell-associated prolonged viremia is one of the characteristics of EHF infection.     

间接免疫荧光法检测特异性IgG抗体对流行性出血热诊断意义

本文报告用间接免疫荧光法检测特异性IgG抗体对流行性出血热的诊断意义。53例不同病期的出血热患者的血清,其间接荧光抗体的阳性率为49/53(占92.45％)。有77.36％的患者血清,检出IgG抗体的时间是在发病后的1～2周。血清中IgG的滴度与疾病的严重性无密切相关。另25例非EHF患者,其血清特异性IgG抗体均为阴性。可见检测特异性IgG抗体对EHF的诊断颇为有用。     

感染犬弓首线虫鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原检测

采用间接 ELISA 和双抗体夹心 ELISA 检测感染犬弓首线虫小鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原。间接 ELISA 用犬弓首线虫幼虫排泄分泌抗原(TES-Ag)包板,二抗用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG。夹心 ELISA 用豚鼠抗 TES-Ag 的 IgG 包板,第二抗体用辣根过氧化物酶标记的兔抗TES-Ag 的 IgG。结果表明,感染后第1天血清循环抗原即为阳性,第15天血清抗体出现阳性,第87天实验结束时,血清抗体和循环抗原均是阳性。