金荞麦提取物抑制肿瘤细胞侵袭、转移和HT-1080细胞产生Ⅳ型胶原酶的研究

目的探讨金荞麦提取物对肿瘤细胞侵袭和转移的影响。方法以人工重组基底膜及小鼠黑色素瘤高转移株自发性肺转移模型观察了金荞麦提取物对Ｂ１６－ＢＬ６细胞的体外抗侵袭活性和体内抗转移作用；用聚丙烯酰胺凝胶电泳法进一步观察了其对人纤维肉瘤ＨＴ－１０８０细胞Ⅳ型胶原酶的产生及活性的影响；同时用ＷＳＴ法观察了该药的细胞毒性。结果金荞麦提取物在１００ｍｇＬ－１剂量下能明显抑制Ｂ１６－ＢＬ６细胞侵袭；在２００ｍｇｋｇ－１剂量下能有效抑制Ｂ１６－ＢＬ６黑色素瘤细胞在Ｃ５７／ＢＬ６小鼠体内自发性肺转移。该药对Ｂ１６－ＢＬ６和ＨＴ－１０８０细胞无明显细胞毒作用。该药能抑制ＨＴ－１０８０细胞Ⅳ胶原酶的产生，但对酶的活性无明显影响。结论金荞麦提取物具有明显的抗癌侵袭和转移的作用。     

抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用。结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM。动物实验中PYM 10 mg·kg^-1对H22肝癌的抑制率为60.6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90.8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间。结论3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。     

抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用。结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM。动物实验中PYM10mg·kg-1对H22肝癌的抑制率为60·6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90·8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间。结论3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。     

抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素偶联物的抗肿瘤作用

目的观察抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素（LDM）偶联物的抗肿瘤作用。方法 用MTT法测定其对肿瘤细胞的增殖抑制作用；用小鼠移植性肝癌H22观察体内抗肿瘤作用。结果3G11-LDM偶联物保留了单抗3G11与IV型胶原酶和靶细胞H22细胞的结合能力，体外试验H22细胞显示比游离LDM更强的细胞增殖抑制作用。体内3G11-LDM偶联物0.05和0.10 mg·kg^-1对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率分别为87.8%和97.2%，而游离LDM 0.05 mg·kg^-1的抑瘤率为67.1%， 且3G11-LDM偶联物组小鼠的中位生存时间比LDM组明显延长。结论3G11-LDM偶联物对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用比LDM强，可能成为抗肿瘤靶向药物。     

Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭和转移

肿瘤的发生是一复杂过程,包含了血管生成、肿瘤侵袭与转移等多个步骤.在此过程中,肿瘤细胞分泌许多蛋白水解酶以降解基底膜和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)[1].基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)就是其中一类zn2 依赖的内源性蛋白水解酶[2].Ⅳ型胶原酶是MMPs家族的一个成员,主要降解细胞外基质中的Ⅳ型胶原成分,与肿瘤的侵袭和转移关系密切,是近年来国内外研究的一个热点[3].     

抗癌抗生素力达霉素与抗IV型胶原酶单链抗体的基因工程组装融合蛋白

目的　以IV型胶原酶为靶点,研制兼具有抗肿瘤侵袭转移和强烈杀伤肿瘤细胞的新型单抗导向药物。方法　力达霉素(LDM)分子由力达蛋白(LDP)和力达发色团(LDC)两部分组成。从基因工程转化菌中提取融合蛋白（LDP-Fv）并与LDC 组装重建,制备高效抗癌抗生素力达霉素与单链抗体的组装融合蛋白（LDM-Fv）。通过ELISA、酶谱分析、Boyden 小室体外侵袭实验及克隆形成测定,观察其生物学活性。结果　LDM-Fv能特异性与肿瘤细胞的IV型胶原酶结合并抑制其活性,LDP-Fv有阻断肿瘤细胞侵袭的能力,但无细胞毒性,加入LDC制成的组装融合蛋白LDM-Fv对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,并明显强于丝裂霉素和阿霉素。结论　LDM-Fv可能成为一种新型高效、小型化抗肿瘤导向药物。     

抗癌抗生素力达霉素与抗IV型胶原酶单链抗体的基因工程组装融合蛋白

目的　以IV型胶原酶为靶点 ,研制兼具有抗肿瘤侵袭转移和强烈杀伤肿瘤细胞的新型单抗导向药物。方法　力达霉素 (LDM)分子由力达蛋白 (LDP)和力达发色团 (LDC)两部分组成。从基因工程转化菌中提取融合蛋白 (LDP Fv)并与LDC组装重建 ,制备高效抗癌抗生素力达霉素与单链抗体的组装融合蛋白 (LDM Fv)。通过ELISA、酶谱分析、Boyden小室体外侵袭实验及克隆形成测定 ,观察其生物学活性。结果　LDM Fv能特异性与肿瘤细胞的IV型胶原酶结合并抑制其活性 ,LDP Fv有阻断肿瘤细胞侵袭的能力 ,但无细胞毒性 ,加入LDC制成的组装融合蛋白LDM Fv对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用 ,并明显强于丝裂霉素和阿霉素。结论　LDM Fv可能成为一种新型高效、小型化抗肿瘤导向药物     

筋骨草和茯苓配伍合用抑制乳腺癌细胞侵袭转移作用及初步机制研究

目的研究筋骨草和茯苓联合用药对高转移性乳腺癌MDA-MB-231(三阴型乳腺癌)和SK-BR-3(HER-2过表达乳腺癌)细胞侵袭转移的作用及分子机制。方法以筋骨草有效部位——总环烯醚萜类化合物和茯苓有效部位——三萜类化合物为研究对象。采用细胞黏附实验、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞黏附、运动和侵袭能力。Western blot法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白和MAPK通路蛋白表达。结果筋骨草和茯苓合用对MDA-MB-231和SK-BR-3细胞的黏附、迁移和侵袭能力有明显的抑制作用,配伍比例为10∶1时具有较好的协同效应。两药合用还可逆转乳腺癌细胞EMT,主要表现在上皮性标志物β-catenin、E-cadherin、ZO-1表达增加,间质性标志物Vimentin表达降低。进一步研究发现,两药合用明显降低p-ERK1/2、p-JNK和p-p38的蛋白表达。结论筋骨草和茯苓合用能有效地抑制高转移性乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3细胞的侵袭和转移,作用机制可能与其调控MAPK通路,逆转肿瘤细胞EMT有关。