抗痢疾志贺氏2型菌单克隆抗体的制备和鉴定

志贺氏菌(Shigella)是细菌性痢疾的病原菌。抗志贺氏菌单克隆抗体(McAb)的制备,对菌痢的临床诊断、流行病学调查和基因工程疫苗的研究有一定意义。 试验所用材料 细菌株和BALB/c小鼠来自流研所;Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞来自病毒所。 免疫和细胞融合 免疫程序参见文献。按常规方法进行细胞融合,融合后细胞接种在3块96孔板中,置二氧化碳孵箱内培养。     

改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体

目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库.方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDNA反应;通过优化PCR反应,将Lambda酶外切及葡...     

抗人c-erbB2单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的:制备小鼠抗人c-erbB2mAb,并进行特异性鉴定。方法:应用计算机软件分析人源c-erbB2抗原表位,人工合成羧基端含优势表位的13肽,与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化和免疫组化染色法筛选出稳定分泌抗天然人源c-erbB2mAb的杂交瘤细胞株。用交叉反应试验和阻断试验检测mAb的特异性。结果:获得1株可稳定分泌抗天然人源c-erbB2抗体的杂交瘤细胞株。该mAb与已知的c erbB2抗原阳性的乳腺癌标本起反应;与其他不表达c-erbB2分子的细胞不起反应。用合成的13肽阻断后,失去与c-erbB2抗原的反应性。结论:用合成的13肽作为免疫原成功地制备出1株抗c-erbB2的mAb。     

前列腺特异性抗原单克隆抗体的研制及其初步鉴定

本研究利用从正常男性精液中提取纯化的前列腺特异性抗原免疫小鼠，建立了２株可持续稳定分泌抗前列腺特异性抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为Ｐ１３和Ｐ２６。此２株杂交瘤细胞在体外连续传代培养半以上，冻存后复苏仍可保持抗体分泌能力，利用所制备的单克隆抗体对良性前列腺肥大，前列腺癌，乳腺癌，胃癌，食道癌和卵巢癌病人的病理切片标本进行免疫线化测定，证明其有一定的前列腺特异性。     

志贺菌福氏2a301菌株torA基因改变的研究

目的探讨志贺菌福氏2a301菌株torA基因的改变以及与TorA(trimethylamine N-oxide TMAO reduetase，三甲胺N-氧化物还原酶)转运相关的TAT分泌系统的存在。方法利用酶活性检测和Western blot方法来验证志贺菌福氏2a301测序菌株torA基因发生的碱基置换，并且利用正常大肠杆菌中torA基因的克隆转化来研究TAT分泌系统的存在。结果实验表明志贺菌福氏2a301菌株不具有TorA酶活性，不表达TorA蛋白，和序列分析的结果相符；但是，将torA基因克隆子转化入301菌株后，转化子获得了TorA酶活性，表达了TorA蛋白。结论在志贺菌福氏2a301菌株中torA基因发生了改变，但具有完整的TAT分泌途径，可以转运蛋白。     

单克隆抗体与肿瘤特异性抗原

人肿瘤特异性抗原的研究是一个具有重要理论和实践意义的课题。在理论上,它有助于细胞癌变机理的阐明;在实践上,它有助于肿瘤的预防、诊断和治疗。多年来,许多科学家在从事于研究各种人肿瘤特异性抗原是否存在,质量和稳定性如何等问题。他们用异体抗血清去检测肿瘤特异性抗原或     

抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定

目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。     

THBS2 特异性单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的应用进行鉴定,最后采用免疫沉淀法对36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2进行检测。结果:获得了10株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌抗体;10株单抗经ELISA、Western blot和免疫沉淀证实均能特异性识别人THBS2,且发现THBS2在胰腺癌患者血清中的表达水平显著高于正常人(P0.000 1)。结论:成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人THBS2单克隆抗体,为血清THBS2的检测奠定了基础。     

单克隆抗体鉴定大鼠特异性转化相关抗原(TAP)

作者以前曾报告了(Chan et al.,BBRC 134:1223,1986)在几株MO-MSV转化大鼠细胞中(包括ts-110 MO-MSV转化细胞系,6M_2)(Blair et al.,Virology 95:303,1979),用单克隆抗体检测到MO-MSV活化的转化相关蛋白(TAP)及其进一步鉴定的结果。利用单克隆抗体亲和柱色谱法已经提纯了细胞外TAP,并发现这种蛋白具有有丝分裂原     

抗鸡巴氐杆菌荚膜抗原及菌体表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用美国标准菌株×75(5:A)、P1059(8:A)制备荚膜A型抗原及×75和P1059菌体抗原,分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞分别与Sp 2/O、NS-1、NS-0骨髓瘤细胞融合,用ELISA检测建立了抗荚膜A型杂交瘤细胞系2株(1B_1、2B_7),抗×75菌体表面抗原的杂交瘤细胞株13株(1A_7、1A_6、1D_4、1D_(10)、2B_5、2A_3、3C_1、5C_3、2C_2、1B_5、1A_4、3D_6、4A_7),抗P1059菌体表面抗原的杂交瘤细胞株1株(3B_7)。     

抗烟曲霉菌单克隆抗体鉴定和初步应用

目的 :制备抗烟曲霉菌单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测烟曲霉菌抗原方法。方法 :用基因重组烟曲霉菌半乳糖甘蛋白 (AFMP1)抗原 ,免疫BALB/c小鼠 ,制备单克隆抗体 ,选择针对不同抗原决定簇单抗配对 ,建立双抗夹心ELISA法检测烟曲霉菌抗原。结果 :筛选出 3株稳定分泌抗烟曲霉菌单抗杂交瘤细胞株 ,IgG亚类鉴定分别为IgG1、IgG2a、IgG2b ,抗体亲和常数分别为 1 2× 10 10 、4 5 6× 10 9和 1 81× 10 10 mol/L ,免疫印迹证实单抗特异性识别烟曲霉菌培养上清和细胞裂解产物 ,相加试验表明 3株单抗是针对不同抗原决定簇 ,组成配对双抗夹心ELISA法 ,检测最高灵敏度为 0 1ng/ml,可测范围为 0 1～ 6 0ng/ml。结论 :3株杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高 ,组成配对夹心ELISA法可用于快速检测烟曲霉菌抗原。     

抗人骨肉瘤单克隆抗体5D3的特异性鉴定

目的 鉴定抗人骨肉瘤单克隆抗体（mAb)5D3的特异性。方法 用免疫组化染色法检测mAb 5D3与骨肉瘤细胞系、骨肉瘤组织、其它肿瘤组织及正常组织的反应性。结果 免疫组化染色检测发现，mAb 5D3相应抗原在部分骨源性肿瘤，特别是骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系呈高度表达，中度以上染色者占阳性总数的77％以上，主要分布于细胞核上。14种正常组织中未见阳性反应。结论 mAb 5D3具有高度特异性，为骨肉瘤的早期诊断及免疫治疗提供了可能性。     

宋内氏福氏2a双价志贺氏菌芳香族氨基酸营养缺陷…

ＦＳ５４是本室构建的宋内氏福氏２ａ双价志贺氏菌杂交株，具有志贺氏菌的毒力。本研究通过遗传重组，给ＦＳ５４株引入了ａｒｏＤ基因的转座子Ｔｎ１０插入失活性，构建了ＦＳ５４株的芳香族氨基酸营养缺陷型减毒株，并进一步去除了Ｔｎ１０所携带的四环素抗性和宋内氏Ｉ相大质粒上所携带的卡那霉素抗性，得到了宋内氏福氏２ａ双价志贺氏菌芳香族氨基酸营养缺陷型减毒     

抗HCVNS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)是一种单链正链ＲＮＡ病毒 ,可通过输血等方式传播 ,引起急、慢性肝炎。目前 ,ＨＣＶ的常规诊断方法主要有抗ＨＣＶ ＩｇＧ ,抗ＨＣＶ ＩｇＭ及ＨＣＶ ＲＮＡ的ＲＴ ＰＣＲ检测。对ＨＣＶ抗原的检测文献报道较少。我们利用基因工程表达的ＨＣＶＮＳ3蛋白作为免疫原 ,研制其单克隆抗体(ｍＡｂ) ,试图用于ＨＣＶ抗原诊断的研究。1材料和方法1 1　材料　Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,由南京军区实验动物中心提供。Ｓｐ2 / 0小鼠骨髓瘤细胞 ,从解放军 30 2医院引进 ,液氮保存。ＨＣＶＮＳ3蛋白及ＣＰ9,ＣＰ10抗原 ,由南京军区军事医学…     

抗结肠肿瘤相关抗原单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗结肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体(mAb)并对其进行初步的鉴定及功能研究。方法:将结肠癌细胞系或磨碎的结肠癌组织免疫小鼠,按常规方法进行细胞融合,采用活细胞周围花环形成的方法进行阳性克隆的筛选。用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析及酶免疫组织化学的方法进行初步鉴定,并用抗体介导的补体依赖的细胞毒试验(CDC)进行初步的功能研究。结果:获得了2株分泌抗结肠肿瘤相关抗原mAb杂交瘤细胞株3A12和6A8。流式细胞仪检测,2株杂交瘤分泌的抗体均能在结肠癌细胞系中均为阳性。普通石蜡切片及组织芯片的免疫酶组织化学染色结果,显示2株mAb均在结肠肿瘤组织中有较高的阳性率。2株mAb分别与靶细胞及补体作用后,对于靶细胞的杀伤率分别为98.1%和42.4%。结论:成功地制备了2株识别结肠癌细胞表面抗原的mAb,在结肠癌的诊断和治疗中可能具有潜在的应用价值。     

抗可溶性抗原鼠单克隆抗体的特性分析和鉴定

<正> 随着小鼠B淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体(McAb)技术的发展,预计今后80％左右的常规动物多克隆抗体(PcAb)将被McAb取代。McAb在分子结构、亲和力、稳定性、效价和抗原位点(或称决定簇)特异性方面都与PcAb不同,因而在实际工作中必须对获得的McAb进行更多的鉴定,以使成为更加稳定、标准和特异的制剂。近几年来,我们研究室     

抗福氏志贺氏菌2a膜成份McAb的特异性及其生物学作用的初步研究

为了分析志贺氏菌的毒力相关及保护相关因子。作者采用3种不同的福氏2a膜成份为免疫原制备了9株McAb。经抗原的蛋白酶消化试验,抗原的过碘酸钠氧化试验及免疫印迹等方法分析表明,其中抗细菌膜蛋白5株(1A1,1A6,1B3,1B5,1D3),分子量范围为14～78kD;4株抗细菌LPS(2A3,3A6,C5,O2),其抗原决定簇位于细菌表面。 应用检测志贺氏菌毒力的接触性溶血试验及小鼠被动保护试验等初步观察了McAb的生物学作用。结果显示抗LPS的McAb既     

抗迟缓爱德华菌单克隆抗体的制备及鉴定

迟缓爱德华菌(Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａ)是爱德华菌属中对人和鱼类均具有致病性的病原体,经口或创伤感染后,可引起肠胃炎、败血症等严重疾病〔１〕,鱼类感染后可导致肝肾损害。目前,对该菌所致疾病的诊断主要靠临诊观察和细菌学检查,难以做到准确、及时。鉴于国内外尚未见抗该菌单克隆抗体（ｍＡｂ）的报道,我们制备了抗该菌的ｍＡｂ,以为临床诊断和保护水产资源提供新的检测方法。１材料和方法１．１材料迟缓爱德华菌标准菌株,由青岛海洋大学生命学院提供;大肠杆菌和伤寒杆菌,由本校微生物学教研室惠赠。创伤弧菌和鳗弧菌购自北…