斑点杂交与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA的临床意义

ＨＢＶ ＤＮＡ是一种十分重要的ＨＢＶ感染标志 ,是直接反映ＨＢＶ的存在、病毒活动性复制与具有传染性的标志 ,对于确定ＨＢＶ感染的诊断有重要价值[1] 。目前ＨＢＶ感染的基因诊断技术已从定性发展到定量[2 ] 。斑点杂交定性检测不能直接反映病毒负荷量。近年来 ,荧光定量ＰＣＲ逐渐应用于临床检测ＨＢＶ ＤＮＡ。通过对 10 5例慢性乙型肝炎患者用斑点杂交与荧光定量ＰＣＲ两种方法同时进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ检测 ,以了解两种方法的一致性 ,探讨两者的临床应用价值及问题。1　材料和方法1.1　研究对象　 2 0 0 1年 3至 7月间中山医科大学…     

PCR法检测献血员血清HBV—DNA

输血是传播乙型肝炎的重要途径；判断献血员是否带有HB2Ag，目前主要采用免疫学方法；近年来随着分子生物学的发展，笔者用PCR法检测100份献血者HBV—DNA，以求从分子水平揭示献血员血清中HBV—DNA状况，为保证血源质量寻找依据。     

乙肝患者血清中HBV DNA含量的测定及其意义

乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖于血清特异抗原抗体和ＨＢＶＤＮＡ的检测。我们用定量ＰＣＲ方法检测乙肝患者血清ＨＢＶＤＮＡ ,以探讨不同免疫标志的乙肝患者血清中ＨＢＶＤＮＡ含量及其意义。1　材料和方法1 1　研究对象　对象为本院 1999年 3月～ 1999年 5月住院及门诊的乙型肝炎患者 43例 ,全部乙肝病例均为临床确诊的乙型肝炎患者。年龄在 19岁～ 5 0岁 ,其中男 2 5例 ,女18例。另选择 7例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性 ,肝功能正常作为对照。血清采用经高压灭菌的 1 5ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管分装 ,于 - 2 0℃冻存待检。1 2　…     

荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

207例乙肝患者血清HDV RNA和HBV DNA检测及其意义探讨

对２０７例急性，慢性，亚急重型乙型肝炎患者的外周血进行了丁肝病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ和乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的检测，结果检出ＨＤＶＲＮＡ阳性２８例（１３．５％）。其中，在抗－ＨＢｅ阳性者和ＨＤＶＲＮＡ检出率较高，为１８．９％，ＨＢｅＡｇ阳性者中的ＨＤＶＲＮＡ检出率较低，为７．９％，在本文２８例ＨＤＶＲＮＡ阳性的患者中６例（２１．４％）检出ＨＢＶＤＮＡ；而在其余１７９例ＨＤＶＲＮＡ阴性病例中，则有６５     

乙肝患者血清HBV DNA检出率分析

探讨ＰＣＲ技术测定ＨＢＶ ＤＮＡ的临床应用价值。用ＰＣＲ法与ＥＬＩＳＡ法测定乙国清标志物。结果表明ＨＢＶ ＤＮＡ在乙肝患者血清平均检出率５４．８％。人为ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率与乙现毒所处的临床阶段,基因的整合与突变及抗病毒药物的应用相关。     

FQ—PCR检测乙型肝炎患者血清HBVDNA

目的评价荧光定量聚合酶链反应 (FQ- PCR)检测 HBV DNA的临床应用价值。方法用 FQ- PCR和酶联免疫吸附试验 (EL ISA)分别检测乙型肝炎患者血清 2 5 1份和健康体检者血清 116份的 HBV DNA和 HBV血清标志物。结果 HBs Ag、HBe Ag和抗 - HBc3项阳性、HBs Ag、抗 - HBe和抗 - HBc3项阳性以及抗 - HBs、抗 - HBe、抗- HBc同时或分别阳性的样品 ,HBV DNA阳性率分别为 96 .5 %、5 6 .6 %和 12 .3% ,HBV DNA拷贝数分别为 1.12× 10 8/ ml、1.45× 10 6/ m l和 6 .6 1× 10 4/ m l。用 EL ISA检测 HBe Ag阳性率仅为 FQ- PCR检测 HBV DNA阳性率的5 5 .4%。结论 FQ- PCR对乙型肝炎早期诊断 ,传染性的判断及疗效考核有临床实用意义     

HBV—DNA检测中血清裂解处理效果探讨

待检样品中的DNA是聚合酶链反应（PCR）的模板，能否有效提取是决定PCR检测阳性率高低的关键步骤。我们在采用PCR法检测HBV－DNA时，按试剂盒要求裂解条件是煮沸100℃15min，但我院地处高原地区，海拔1630m，煮沸只能达到95℃，为了探讨裂解效果，提高检测的阳性率，选用了三种裂解方法进行血清裂解处理；并对血清做了乙型肝炎标志物检测。结果报告如下。1材料和方法1．1仪8＊＊R9801D型扩增仪，紫外透射分析仪（西安开元公司）；DY－600型中压电泳仪（广东汕头医用设备厂）【高速离心机TGL－16B（上海安亭科学仪器厂）。1．2试…     

PCR杂交梳法在HBV检测中的应用

聚合酶链反应（PCR）以其灵敏性高、特异性强的特点,近年来正广泛应用于乙型肝炎病毒（HBV）感染的研究和诊断。然而,实践证明,PCR影响结果的因素很多,这主要是由于过去PCR产物分析的手段较落后。如琼脂糖凝胶电泳（即一次PCR）的方法只能判断产物的大小,并不能鉴别产物的特异性,因此不可避免地会出现一些难以判别的非特异产物[1],而造成人为主观因素导致的误差,出现假阳性和重复性差等现象。另外,在实际应用中PCR大约只可以将约103个模板DNA分子扩增出来[2、3],而不是理论上的只要具有一个拷贝的模板就可以被反应系统扩…     

乙型肝炎血清标志物与HBV-DNA定量结果对比分析

目的 探讨乙型肝炎(下称乙肝)病毒血清标志物(HBV-M)与HBV-DNA定量检测的关系及临床意义.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定HBV-M,用实时荧光定量聚合酶链反应测定法(PCR)检测HBV-DNA.结果 在HBsAg( )、HBeAg( )、抗-HBc( )血清中HBV-DNA的阳性率及含量最高,HBeAg与HBV-DNA含量关系密切,并呈正相关,但部分HBeAg阴性或抗-HBe( )及抗-HBc( )患者,也有较高的HBV-DNA阳性率及含量.结论 单从HBV-M模式很难准确判断HBV病毒的复制程度及传染性强弱,而定量PCR的准确度高、特异性强,更能真实反映HBV病毒的复制情况,是评价传染性的可靠指标,对乙肝患者的诊断、治疗及疗效观察有重要指导意义.     

乙型肝炎患者及其配偶HBV血清标志物检测结果分析

为了比较分析乙型肝炎患者HBV血清标志物之间的相关性及其配偶HBV的感染情况，我们采用ELISA法和荧光PCR法对216例乙型肝炎患者及其配偶进行HBVM与HBV DNA定量及肝功能等方面的检测。     

HBV-DNA定量与乙肝病毒感染免疫学检测结果对比分析及意义

本文采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)和ELISA两种方法同时检测了 310份血清 ,并对结果进行了对比分析 ,结果显示 :80例HBsAg (+)、HBeAg (+)、HBcAg (+)组的血清HBVDNA检出率为 92 5 % (74例 ) ,平均拷贝数为 4 10× 10 10 /ml,6 8例HBsAg (+)、HBeAb (+)、HBcAb (+)组血清HBVDNA检出率为32 35 % (2 2例 ) ,平均拷贝数为 1 31× 10 9/ml,70例HBsAg (+)、HBeAb (+)组血清HBVDNA检出率为45 71% (32例 ) ,平均拷贝数为 4 0 8× 10 8/ml;32例HBV M全阴性组血清HBVDNA检出率为 6 .6 7% (2例 ) ,平均拷贝数为 1 5 4× 10 8/ml。结果表明 :HBV -M阴性的病人也可能有HBVDNA阳性 ,因此为临床提供HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗 ,应选择乙肝两对半标志物检测的同时做PCRHBVDNA定量检测     

1 031例乙肝病毒携带者HBV-DNA含量与血清标志物的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒携带者血清中HBV－DNA定量结果与乙肝血清标志物的关系。方法：采用定量聚合酶链反应（PCR）法检测1031例乙型肝炎病毒携带者血清中DNA含量，与HBV标志物作对比研究。结果：血清HBeAg阳性组HBV－DNA含量明显高于抗HBe或抗HBc阳性组。结论：定量PCR法检测HBV－DNA具有较强的特异性和灵敏度，为临床了解病毒复制情况，督促乙肝携带者治疗及制定治疗方案、疗效观察提供了确切依据。     

PCR酶免定量检测乙型肝炎病毒DNA及其临床意义

我们采用ＰＣＲ酶免定量检测法（ＰＣＲ通用捕集法）检测乙肝病毒携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量,以探讨乙肝患者病毒复制与乙肝病毒标志物之间的关系及其临床意义。１ 材料和方法１．１ 研究对象 为２００１年１月～５月来我院门诊就诊的患者,共３６６人,全部病例均为ＨＢＶ血清学标志物阳性患者,年龄在１０～６７岁,其中男性２２３例,女性１４３例。另选择３０例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性、肝功能正常者作为对照组。血清采用经高压灭菌的 ０．５ｍｌ Ｅｐ－ｐｅｎｄｏｒｆ管分装于－２０℃保存,３天内检测完毕。１．２ 试剂…     

乙肝患者血清中HBV—PreS2抗原和抗体的检测及临床意义

前S2（PreS2）蛋白是1981年TioUais等[1]首先发现由HBsAg编码区的前S2编码的蛋白质,它与乙肝感染和复制的关系日益受到重视,有研究表明在HBV活动性复制时肝细胞上往往有PreS2蛋白抗原表达[2],急性HBV感染恢复期首先有抗-PreS2产生,并具有保护作用[3]。本文用EIA法检测了急、慢性乙肝患者血清中PreS2抗原和抗体,并探讨与其他肝炎血清标志的关系及临床意义。1材料和方法1．l标本来源：万例急性乙型肝炎（CAH）,11例慢性迁延性肝炎（CPH）患者均选自无锡市第一人民医院和传染病医院,临床均符合lop年上海第六病毒性肝炎会讨…     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最