亚硒酸钠抑制人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT的表达

目的 探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT表达的作用及其机制.方法用含亚硒酸钠(0μmol/L、0.5μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测亚硒酸钠对SGC-7901的...     

毒胡萝卜内酯对人晶状体上皮细胞HLE-B3生长抑制作用的研究

目的： 探讨青胡萝卜内酯(TG)对人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞系的生长抑制作用及其机制。方法：采用MTT法分析TG对HLE-B3细胞生长抑制作用，流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳观察TG对HLE-B3细胞凋亡诱导作用，Western blotting分析凋亡诱导过程中的相关蛋白的变化。此外，应用荧光分光光度计分析处理后不同时间的细胞内Ca2+浓度变化。结果：不同剂量的TG对HLE-B3细胞生长有不同的抑制作用，并呈现出时间和剂量依赖性关系，12 h、24 h和48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为：（2.27±0.61）μmol/L、（0.77±0.12）μmol/L和（0.15±0.04）μmol/L。0.01、0.1、1和10μmol/L TG明显诱导HLE-B3细胞凋亡。在凋亡诱导过程中，1 μmol/L的TG孵育细胞4 h后开始抑制SERCA2蛋白，引起细胞胞浆内Ca2+负载，并且刺激凋亡诱导蛋白Bax和凋亡执行蛋白caspase3的表达增加。结论：TG能够抑制HLE-B3细胞生长并诱导其凋亡，其机制可能是促发了内质网途径介导的凋亡过程。     

亚硒酸钠通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制

目的通过检测亚硒酸钠诱导人胃癌SGC-7901细胞系凋亡过程中Bax/Bcl-2、线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)表达的变化,探讨亚硒酸钠诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。方法将人胃癌细胞系SGC-7901细胞加入不同浓度亚硒酸钠(2.5、5.0、10.0mol/L)的培养液中培养24h、48h,免疫细胞化学法和免疫印迹法(Western blotting)检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;以罗丹明123(rhodamine123)为细胞染色剂,采用流式细胞技术检测细胞的线粒体膜电位的变化;Western blotting检测细胞质Cyt C和线粒体Cyt C蛋白含量的变化。结果免疫细胞化学法和Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够能够提高Bax蛋白的表达(P0.05)、降低Bcl-2蛋白的表达(P0.05),且呈剂量依懒性;流式细胞术结果显示,亚硒酸钠能够降低细胞线粒体膜电位;提示:亚硒酸钠可以通过改变Bax、Bcl-2蛋白的含量,降低线粒体的膜电位来诱导细胞凋亡。Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够提高细胞质Cyt C蛋白的表达(P0.05)并降低线粒体内Cyt C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内的Cyt C向细胞质内释放。结论亚硒酸钠通过上调Bax并下调Bcl-2蛋白表达,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到细胞质,通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的探讨吲哚-3-甲醇（13C）对人肝癌细胞株SMMC．7721的增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的13C（100、150、200、250、300、350Ixmol／L）处理细胞48h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测凋亡相关蛋白。结果13C能够抑制SMMC．7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250μmol／L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol／L时,大量细胞凋亡。13C浓度高于200μmol／L时CytC、Cleavedcaspase．9和Cleavedcaspase．3蛋白表达明显增加,且随着13C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加。结论13C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC．7721增殖并诱导其发生凋亡。     

硒通过核内积累IKK α诱导Jurkat细胞自噬依赖的caspase 8激活

目的重点探索超营养剂量的亚硒酸钠诱导白血病Jurkat细胞自噬和凋亡的分子机制。方法 Western blot实验,明确亚硒酸钠对IKKα、P73、UVRAG以及凋亡标志性蛋白天冬氨酸蛋白水解酶8(caspase 8)的表达及活性影响。用细胞转染技术,明确相关信号分子在Jurkat细胞死亡过程中发挥的作用。间接免疫荧光实验用于判断相关分子在细胞内的定位情况。结果 20μmol/L亚硒酸钠可有效促进Jurkat细胞发生自噬和caspase 8相关的细胞凋亡(P0.05),且caspase 8的活化依赖于细胞内的自噬水平(P0.05)。此外,IKKα在细胞核内发生积累(P0.05),进一步调节P73及自噬关键蛋白UVRAG的含量改变(P0.05)。结论超营养剂量的亚硒酸钠通过核内积累IKKα,诱导Jurkat细胞发生自噬依赖的caspase 8激活及凋亡。     

光敏化姜黄素对人肝癌细胞HepG2的增殖影响

目的：研究姜黄素的光敏化效应并探讨光敏化姜黄素对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖和凋亡的影响。方法：采用人肝癌细胞株HepG2进行研究。细胞用不同浓度的姜黄素（2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L）孵育2 h后,用0.4 J/cm2剂量的紫光照射,光照的功率为10 mW。利用MTT法测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞的抑制作用,观察其紫光光敏化效应。在选择的姜黄素剂量下,分别用不同剂量的紫光照射,检测能量密度改变后光敏化姜黄素对细胞的杀伤作用。最终选定在20μmol/L浓度下,姜黄素用0.2 J/cm2紫光照射其对细胞的杀伤作用。利用Hoechst33342染色从形态学上在观察光敏化姜黄素对HepG2细胞的促凋亡效应,采用流式细胞仪定量检测光敏化姜黄素的凋亡率。结果 ：姜黄素在紫光下具有光敏化效应,IC50从单独作用的92.49μmol/L降到27.06μmol/L,且这种效应在低浓度姜黄素低剂量的能量密度下更加明显。形态学和流式细胞仪检测到光敏化姜黄素的促凋亡效应,且凋亡率是同剂量姜黄素作用的3倍。结论：紫光照射可明显增强低剂量姜黄素对HepG2的细胞毒性,并可显著诱导细胞凋亡。     

亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制的研究

目的和方法：实验观察亚硒酸钠对人急性髓性白血病细胞系ＨＬ－ ６０ 细胞生长增殖、诱导分化、细胞内自由基产生和清除系统以及胞内环核苷酸累积的影响,探索亚硒酸钠对人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞作用机制。结果：８ ×１０６ｍｏｌＬ 或更高浓度的亚硒酸钠均可显著抑制ＨＬ－ ６０ 细胞的生长增殖,作用５ ｄ 可在一定程度上诱导ＨＬ－ ６０ 细胞向成熟粒细胞方向分化。８ ×１０６ ｍｏｌＬ 亚硒酸钠作用一段时间,可增强自由基清除系统酶活性,减低胞内自由基水平,降低细胞内ｃＧＭＰ 累积而对ｃＡＭＰ 累积无明显影响。结论：硒的抗白血病作用可能与亚硒酸钠的这些作用相关     

土槿乙酸抑制体外人胃癌细胞的生长

目的探讨土槿乙酸(PLAB)对人胃癌细胞生长的影响及机制。方法RT-PCR法检测MGC803细胞中PPARγmRNA的表达;MTT法检测细胞的生长;Hoechst333342/PI双染色法和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期。结果PLAB(0.1~10μmol/L)作用MGC803细胞72 h显著抑制细胞增殖。PLAB(10μmol/L)作用后,G2期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G2期阻滞。作用72 h后,细胞出现核染色质凝集,DNA片断化等凋亡特征。在MGC803细胞中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)表达较弱,经PLAB(10μmol/L)作用48 h表达水平显著增加(P<0.01)。结论PLAB能在体外明显诱导MGC803细胞G2期阻滞和凋亡,该作用可能与PPARγ激活有关。     

姜黄素对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响

目的:姜黄素对前列腺癌细胞株LNCap增殖和凋亡的影响。 方法:用不同剂量的姜黄素分别处理LNCap细胞，显微镜下观察细胞形态；MTT法检测细胞生长情况；流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡率；然后检测姜黄素处理LNCap细胞后培养液中总前列腺特异抗原（PSA）的变化，并用免疫印迹Western blotting技术检测雄激素受体（AR）的表达。 结果:姜黄素能够抑制前列腺癌细胞LNCap的增殖和生长，40 μmol/L作用24 h最强，细胞存活率为对照的40%；姜黄素诱导LNCap细胞凋亡，细胞形态呈凋亡特征，且40 μmol/L作用最强，凋亡率为9.23%；姜黄素抑制LNCap细胞PSA表达，且40 μmol/L姜黄素处理细胞24 h对PSA表达的抑制作用最强，PSA含量仅为对照的20%；Western blotting检测结果显示姜黄素抑制AR的表达，并且对AR表达的抑制程度依赖于姜黄素的浓度。 结论:姜黄素抑制LNCap细胞增殖，诱导细胞凋亡，且表现出时间和剂量依赖性。姜黄素抑制LNCap细胞PSA与AR 受体的表达。     

过氧化氢诱发小脑皮质神经元凋亡

采用分离细胞培养的新生SD大鼠小脑皮质神经元，用Ara－c抑制非神经元细胞生长，研究了过氧化氢能否诱导种经元凋亡．用荧光染料Hoechst33258染色鉴别凋亡神经元，可见凋亡神经元的细胞核体积缩小至正常神经元的40％～50％，核形不规则，核内染色质块状深染．少量神经元可见到不规则的核碎片及凋亡小体。结果表明：（1）小剂量过氧化氢（50μmol／L）作用12h，可见1％～3％神经元凋亡，与对照组比较，无明显差异；24、36h凋亡神经元比对照组显著增多；48h凋亡神经元数量达高峰。（2）大剂量过氧化氢（70μmol/L）作用12h，凋亡神经元的出现明显增多，作用24、36h凋亡神经元增加均比小剂量组更显著，出现高峰更早、更高．（3）对照组随培养时间延长凋亡细胞的数量增长速度比较缓慢．以上结果提示过氧化氢能诱发小脑皮质神经元凋亡，尤以大剂量过氧化氢的诱发作用为更强．     

亚硒酸钠通过AMPK/mTOR通路调控白血病NB4细胞凋亡

 目的 研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法 分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及P70S6K的磷酸化水平、流式细胞术检测NB4细胞凋亡率;免疫共沉淀法检测AMPK和mTOR的相互作用。结果 亚硒酸钠可以上调NB4细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR及P70S6K的磷酸化水平;AICAR和亚硒酸钠单独处理具有类似的促进NB4细胞凋亡的效果;干扰AMPK后,mTOR及P70S6K的磷酸化水平上升,亚硒酸钠对NB4细胞的促凋亡作用被拮抗;AMPK和mTOR有直接相互作用。结论 亚硒酸钠可通过激活AMPK表达,抑制mTOR及P70S6K,促进NB4细胞凋亡。     

Selenite activates caspase-independent necrotic cell death in Jurkat T cells and J774.2 macrophages by affecting mitochondrial oxidant generation

Sodium selenite, a common dietary form of selenium, is recognized as essential in animal and human nutrition. Mechanisms regulating the inflammatory response of the immune system involve regulation of apoptosis and control of reactive oxygen species (ROS) production. In this study, the effect of sodium selenite on ROS production and cell-death rates in macrophages and T cells was investigated. Exposing Jurkat T cells or J774.2 macrophages to >5 micro M sodium selenite induced cell death. In both Jurkat T cells and J774.2 macrophages, rapid loss of the cell's capacity to generate dichlorofluorescein-sensitive ROS preceded cell death. The main cellular source of ROS was found to be the mitochondria electron-transfer chain. DEVDase activity in the cells remained unchanged and even decreased with time, as well as DNA fragmentation level, which was almost unaffected, indicating cell death with necrotic characteristics. tert-Butyl hydroperoxide at a concentration of 5 micro M was beneficial in attenuating the rate of cell death. The superoxide scavenger Tiron was tested for its ability to protect the cells against selenium. Tiron completely protected the J774.2 macrophage cell line against selenium and attenuated the cell death effect in Jurkat T cells. In the presence of the superoxide dismutase-mimicking compound tempol, selenium's macrophage-killing effect was inhibited. Therefore, our results show that, at least in vitro, selenite induces changes in the balance between mitochondrial superoxide and hydrogen peroxide production, which can facilitate cell death in immune system cells. This may be one mechanism by which selenium down-regulates the immune system's inflammatory response and protects against overproduction of peroxides.     

羟基喜树碱通过激活NF-κB诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡

 目的: 探讨NF-κB信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中所起的作用。方法: 突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染Bcap-37细胞，并用G418进行阳性克隆选择；采用MTT法测定细胞的增殖活力，琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡，流式细胞仪进行细胞周期分析，Western blotting法和DIG-EMSA研究细胞凋亡途径。结果: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制作用，琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带；羟基喜树碱可通过降解IκBα 蛋白进而激活NF-κB，并使NF-κB发生核移位；羟基喜树碱没有激活突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染细胞的NF-κB，并且转染细胞凋亡受到抑制。结论: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制和诱导凋亡作用；NF-κB 信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中起着促进凋亡的作用。     

沙棘黄酮类化合物对人乳腺癌细胞生长抑制和凋亡诱导的研究

为研究沙棘籽渣黄酮类化合物(FHR)对人乳腺癌细胞Bcap-37的生长抑制和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制,本项研究应用CCK-8法检测FHR对Bcap-37的生长抑制效应,流式细胞术(FCM)分析细胞周期及凋亡率,透射电镜观察细胞凋亡的超微结构表征,半定量RT-PCR方法和Westernblot方法检测与细胞周期及凋亡调控相关基因的转录和表达的变化。结果表明,FHR可明显抑制Bcap-37的增殖,并呈剂量依赖性;FCM分析发现在FHR1000μg/ml作用24h后能阻断Bcap-37细胞于G2/M期,并伴有少量的亚G1峰出现;TEM观察Bcap-37细胞经FHR作用后具有典型的凋亡形态学特征;半定量RT-PCR结果显示,经1000μg/mlFHR作用24h后,PCNA、Bcl-2转录水平分别下调为对照组的0.26倍和0.66倍,IGFBP4转录水平上调为对照组的1.13倍。Westernblot结果显示p53蛋白表达显著上调,Bcl-2蛋白表达显著下调。本项研究结果提示FHR可能是通过下调PCNA的转录使细胞的增殖被阻断在G2/M期,并通过p53蛋白上调和Bcl-2蛋白的下调诱导Bcap-37细胞凋亡。     

Growth inhibitory effect of Cucurbitacin E on breast cancer cells

Objective: Due its inhibitory effects on chemical carcinogenesis and inflammation, Cucurbitacins have been proposed as an effective agent for the prevention or treatment of human cancers. In this study, we aimed to explore the effect of Cucurbitacin E (CuE) on human breast cancer cells. Methods: The inhibitory effect of CuE on proliferation of Bcap37 and MDA-MB-231 cells was assessed by MTT assay. The cell cycle distribution and cell apoptosis were determined by flow cytometry (FCM). The expression of pro-caspase 3, cleaved caspase 3, p21, p27 and the phosphorylation of signaling proteins was detected by Western Blotting. Results: CuE inhibited the growth of human breast cancer cells in a dose and time-dependent manner. FCM analysis showed that CuE induced G2/M phase arrest and cell apoptosis. CuE treatment promoted the cleavage of caspase 3 and upregulated p21 and p27. In addition, the phosphorylation of STAT3 but not ERK-1/2 was abrogated upon CuE treatment. Interestingly, losedose CuE significantly enhanced the growth inhibition induced by cisplatin. Conclusions Cucurbitacin E (CuE) could inhibit the growth of human breast cancer cells in vitro. CuE induced both apoptosis and cell cycle arrest probably through the inhibition of STAT3 function. Lose-dose CuE significantly enhanced the growth inhibitory effect of cisplatin on breast cancer cells, further indicating the potential clinical values of CuE for the prevention or treatment of human breast cancer     

下调p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响*

 目的： 应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2（PAK2）的表达,观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法: 构建针对PAK2基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病毒颗粒,感染MCF-7细胞,筛选获得稳定细胞株。Western blotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变;CellTiter 96 AQueous法和软琼脂集落形成实验检测MCF-7细胞体外增殖能力的改变;流式细胞术检测十字孢碱诱导的MCF-7细胞凋亡的变化。结果: MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后,PAK2蛋白表达量明显下降（P<0.01）,与阴性对照组相比,sh-PAK2组细胞生长明显减缓（P<0.01）,克隆形成的数目和大小明显下降（P<0.01）,十字孢碱诱导的细胞凋亡率显著增加（P<0.01）。结论：通过RNA干扰技术下调PAK2的表达,可抑制MCF-7细胞的生长和增殖,并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。     

As2O3诱导喉鳞癌Hep-2细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨三氧化二砷( As2O3)诱导喉鳞癌Hep-2细胞凋亡及其作用机制.方法 体外培养喉鳞癌Hep-2细胞株,MTT法检测不同作用时间及不同浓度的As2O3对Hep-2细胞生长的作用;TUNEL染色、电镜观察Hep-2细胞凋亡的发生和形态学改变;Western印迹检测As2O3诱导Hep-2细胞凋亡时Survivin蛋白的表达改变.结果 As2O3可明显抑制喉鳞癌Hep-2细胞的生长(P＜0.05),并随药物浓度及作用时间的增加而增强.TUNEL、电镜结果显示As2O3作用后,Hep-2细胞发生凋亡.As2O3作用后,Survivin基因的表达降低.结论 As2O3可诱导喉鳞癌Hep-2细胞凋亡,其生长抑制作用呈时间及剂量依赖性;其机制可能是As2O3通过抑制凋亡抑制因子Survivin蛋白的表达,促进细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用.