血清药理学方法研究广西藤茶提取物对乙肝病毒的作用

目的研究广西藤茶提取物APS在体外对乙肝病毒（HBV）的作用。方法采用血清药理学方法，将APS含药血清作用于2,2．15细胞，收集细胞上清液，用MTT法测定细胞上清液中HBsAg、HBeAg的含量。结果APS含药血清对2．2．15细胞分泌的HBsAg、HBeAg有显着抑制作用。结论APS对2．2．15细胞分泌乙型肝炎病毒抗原有抑制作用。     

复方六月雪对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的：观察复方六月雪（CLYX）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测CLYX对HepG2．2．15细胞的半数毒性浓度（TC50）和最大无毒浓度（TG0）；在TG0基础上观察不同浓度药物作用于HepG2．2．15N胞，分别在第72h和144h收集细胞培养上清液，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果：TG50为3．070g·L^-1，TG，为0．945g·L^-1，复方六月雪对HepG2．2．15N胞毒性较低。无毒浓度的复方六月雪在HepG2．2．15N胞培养中可有效地抑制细胞HBsAg（乙型肝炎表面抗原）和HBeAg（乙型肝炎E抗原）的分泌；且治疗指数（TI）均大于2，为高效低毒的抗HBV药物。结论：CLYX在体外有显著的抗HBV的作用，且毒性较低。     

转阴灵抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的通过体外实验,探讨转阴灵抗乙肝病毒(HBV)的作用。方法将转阴灵作用于体外培养的2.2.15细胞,以MTT比色法观察转阴灵的细胞毒性,以ELISA法检测细胞培养液中HBsAg和HBeAg的变化,观察药物对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响。结果转阴灵作用于2.2.15细胞8d后,对细胞的半数毒性质量浓度(TC50)为4.5g·L-1,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效质量浓度IC50分别为0.42和0.15g·L-1,转阴灵对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为10.71和30.00。结论转阴灵在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,有显著的抗HBV作用。     

拉米夫定和干扰素α2b体外细胞毒性与抗乙型肝炎病毒作用比较

目的 体外比较拉米夫定和α-干扰素的细胞毒性和抗乙型肝炎病毒作用. 方法体外培养L-02和 HepG2.2.15细胞,给予不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b,作用72 h后,噻唑蓝(MTT) 法检测L-02和 HepG2.2.15细胞的生存率;收集不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b处理的HepG2.2.15细胞上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HBsAg、HBeAg的分泌.结果拉米夫定对L-02和 HepG2.2.15有一定的毒性作用,而干扰素α2b对细胞无毒性作用,甚至能促进正常细胞的增殖;拉米夫定对HBsAg和HBeAg的抑制作用大于干扰素α2b,拉米夫定对HBsAg的抑制率较高,而干扰素α2b对HBeAg的抑制率较高.结论拉米夫定和α干扰素联合使用可提高抗HBV的作用和质量.     

亚硒酸钠对乙型肝炎病毒的体外抑制作用

目的探讨亚硒酸钠在体外对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白合成、DNA复制的影响及机制。方法将不同浓度的亚硒酸钠作用于HepG2.2.15细胞系,通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和HBV DNA水平来评价HBV复制情况;免疫组织化学检测HepG2.2.15细胞p53蛋白的表达情况。结果亚硒酸钠对HBV复制具有抑制作用,随着亚硒酸钠浓度的升高,对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,但对HBsAg的抑制作用要小于HBeAg。细胞内HBV DNA复制水平也逐渐下降(P<0.01)。p53蛋白的分布也发生了改变。结论亚硒酸钠对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg和HBcAg表达、HBV DNA复制均有抑制作用,作用机制与其干扰p53蛋白的表达有关。     

苦参碱的体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:观察苦参碱的体外抗HBV作用,初步探讨其作用机理。方法:4×10~4个/mL有HBV基因组的HepG2 2.2.15细胞接种于24孔板,37℃5%CO_2培养24h收取上清液后,更换培养基并加入0.025-0.5mg·mL~(-1)的苦参碱。每3d收取上清,换原浓度药液继续培养,共9天。用酶联免疫法测定上清中HBsAg和HBeAg,酚氯仿抽提被裂解细胞中的HBV DNA,用荧光定量PCR法测定细胞内及细胞外HBV DNA的拷贝数。结果:0.025-0.5mlg·mL~(-1)的苦参碱给药9d,对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg的半数抑制浓度(IC_(50))为0~(-1)14 mg·mL~(-1),选择指数(SI)为5.66;对HBeAg的IC_(50)和S1分别为0.29mg·mL~(-1)和2.69;对细胞内HBV DNA的IC_(50)和SI分别为0.109mg·mL~(-1)和7.0;对细胞外HBV DNA的IC_(50)和SI则分别为0.120mg·mL~(-1)和6.39。结论:体外实验表明:在0.25-0.5mg·mL~(-1)的剂量范围内,苦参碱对2.2.15细胞中人乙型肝炎病毒的复制有不同程度的抑制作用。     

硫酸化魔芋葡甘低聚糖的抗乙肝病毒作用

目的体外观察硫酸化魔芋葡甘低聚糖(HOGS)抗乙肝病毒(HBV)的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和ELISA法,研究HOGS对HepG2-2.2.15细胞细胞毒性作用及其分泌HBsAg、HBeAg的影响。采用荧光探针定量PCR检测HOGS对HepG2-2.2.15细胞HBV-DNA复制的影响。结果HOGS在0.125~1mg/mL浓度范围对HepG2-2.2.15细胞没有明显的细胞毒性作用,细胞的半数中毒浓度(TC50)为1.4753mg/mL;并且可明显抑制HepG2-2.2.15细胞HBsAg的分泌,其半数有效浓度(IC50)为0.0268mg/mL,治疗指数达5.52;对HBV-DNA也有一定的抑制作用。结论HOGS具有一定的体外抗HBV作用。     

藤茶双氢杨梅树皮素对2215细胞分泌HBsAg及HBeAg的抑制作用

目的研究藤茶双氢杨梅树皮素（DHM）在2215细胞培养中对乙型肝炎病毒分泌HBsAg及HBeAg的抑制作用。方法接种2215细胞24h后．加入DHM培养8d，观察DHM对细胞的毒性．在无毒质量浓度下，将药物加入2215细胞培养8d，测定培养液中HBsAg和HBeAg水平。结果DHM半数细胞毒质量浓度（TC50）为272．5ug／mL，最大无毒质量浓度（TCu）为62．5ug／mL；在最大无毒质量浓度下，DHM对2215细胞分泌HBsAg及HBeAg具有明显的抑制作用？对于HBsAg，DHM半数有效量（IC50）为17．7ug／mL，治疗指数（TI）为15．4；对于HBeAg，IC50为21．8ug／mL，TI为12．5。结论DHM对2215细胞分泌HBsAg及HBeAg有明显的抑制作用。     

甘草甜素联合单磷酸阿糖腺苷对HepG 2.2.15细胞及其HBsAg表达的影响

目的探讨甘草甜素联合单磷酸阿糖腺苷对HepG2.2.15细胞株存活率及其HB-sAg表达的影响,评价甘草甜素(GL)与单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)合用体外抗HBV效果。方法利用乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞检测细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg),作为这两种药物联合在体外抗HBV效果的观察指标(以抑制率来表示)。用MTT法检测HepG2.2.15细胞的存活率。结果(1)各药对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率呈药物浓度和时间依赖性;联合组与两个单药组分别比较,抑制HBsAg差异有显著意义(P<0.05或P<0.01)。(2)随着浓度的增加,各药对细胞的存活率均显示抑制作用,尤其联合组高于其它两个单药组。结论GL联合Ara-AMP在体外HepG2.2.15细胞中具有协同抗HBV的作用。     

核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的评价核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用。方法以HepG2．2．15细胞作为细胞模型,拉米夫定作为阳性对照药物。HepG2．2．15细胞于药物处理14d后,收集上清液及细胞。采用ELISA检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,HBV荧光定量检测上清液和细胞内HBV DNA水平,CCK-8试剂盒检测药物对细胞的毒性作用。结果核酸类似物PNA与拉米夫定在浓度1．6-1000μmol·L^-1内对HepG2．2．15细胞的毒性均较小。与药物未处理组比较,PNA和拉米夫定均可有效抑制细胞上清HBV DNA,半数抑制浓度（IC50）分别为0．05-0．10μmol·L^-1和0．09-0．18μmol·L^-1,两者之间差异无统计学意义。结论在体外细胞实验中,PNA对细胞的毒性小,与拉米夫定的安全指数相当;PNA对乙型肝炎病毒复制有较强的抑制作用,且具有一定时效量效关系,与拉米夫定的抑制强度相当。     

甲基斑蝥胺抗乙型肝炎病毒体外实验研究

用２．２．１５细胞株体外抗ＨＢＶ药物模型，对研制的甲基斑蝥胺药物体外抗ＨＢＶ流行性进行评价。应用固相放射免疫测定法检测药物对２．２．１５细胞所分泌的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ的抑制效果，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交法分析药物对ＨＢＶ－ＤＮＡ的区带影响，同时以ＭＴＴ法检测药物细胞毒性。药物对病毒复制指标ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ的５０％抑制浓度（ＩＤ５０）分别为２．８３ｇ／Ｌ、４．６０ｇ／Ｌ，该药对ＨＢＶ－ＤＮＡ区带无明显影响，药物对细胞的５０％毒性浓度（ＣＤ５０）１０．６０ｇ／Ｌ。药物对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ的治疗指数（ＴＩ）＝ＣＤ５０／ＩＤ５０分别为３．７５、２．３０。说明甲基斑蝥胺药物在体外具有一定抗ＨＢＶ活性。     

Effect of Oenanthe javanica flavone on human and duck hepatitis B virus infection

AIM: To study the antiviral effect of Oenanthe javanica flavones (OjF) on human hepatoma HepG2.2.15 culture system and duck hepatitis B virus (DHBV) infection. METHODS: (1) After incubation for 24 h, the 2.2.15 cells were treated with different concentrations of OjF for 12 d. The cell alteration was observed by microscope. The presence of HBsAg and HBeAg were measured using the enzyme immunoassay kit after 2.2.15 cells were treated with OjF for 9 d. (2) Ducklings infected with DHBV intravenously were divided into 5 groups and treated with OjF, acyclovir (ACV), and normal saline respectively for 10 d. All the ducklings were bled before, during, and after treatments at different times, and serum levels of DHBV-DNA were detected by a dot-blot hybridization assay. RESULTS: (1) The 50% toxic concentration (TC50) of OjF was 2.28 g/L. The maximum nontoxic concentration (TC0) was 1.00 g/L. In nontoxic concentrations, OjF significantly inhibited HBsAg and HBeAg in 2.2.15 cells after 9 d of treatment (P<0.05, P<0.01). (2) The DHBV-DNA levels decreased significantly after the treatment with 0.50 and 1.00 g/kg of OjF (P<0.01). The inhibition of the peak of viremia was maximum at a dose of 1.00 g/kg and reached 54.3% on d 5 and 64.5% on d 10, respectively. CONCLUSION: The results demonstrate that OjF is a strong inhibitor of HBsAg and HBeAg secretion in 2.2.15 cells and DHBV-DNA levels in the HBV-infected duck model.     

氧化苦参碱和拉米夫定体外抗乙肝病毒的比较

目的比较氧化苦参碱(OM)和拉米夫定体外抗乙肝病毒的效果。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法考察OM和拉米夫定对HepG2.2.15生长的抑制作用,ELISA法检测对HepG2.2.15分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用。结果 OM和拉米夫定对HepG2.2.15的半数中毒剂量分别为1 489.1和15.5μg/L。对HBsAg和HBeAg的表达均有剂量和时间依赖的抑制作用。结论 OM治疗乙肝病毒的安全性高于拉米夫定。     

人血清白蛋白融合干扰素α2b体外抑制乙肝病毒的实验研究

目的:研究长效干扰素人血清白蛋白融合干扰素(HSA-IFNα2b)对HepG2.2.15细胞增殖、凋亡及其HBsAg与HBeAg表达的影响,探讨其体外抑制乙肝病毒的机制。方法:采用SRB法分析HSA-IFNα2b作用HepG2.2.15细胞3,6 d后对其增殖的影响,酶联免疫分析不同剂量HSA-IFNα2b作用不同时间后HepG2.2.15细胞HBsAg与HBeAg的表达水平,Hochest33342、PI双染法观察细胞的凋亡和死亡,Western Blot印迹检测Bcl-2、Bax的表达。结果:HepG2.2.15细胞的增殖在加HSA-IFNα2b作用3,6 d后都有所抑制,细胞培养上清中HBsAg表达明显下降,并与浓度相关,HSA-IFNα2b浓度为10 000 U.mL-1时,培养6 d后HBsAg的抑制率达87%以上。Hochest33342、PI双染结果显示当HSA-IFNα2b浓度在1 250U.mL-1时可见少量的凋亡细胞,凋亡细胞数随着药物浓度的增大而增多,并有少量死亡细胞出现。Western Blot印迹检测随药物浓度的增加Bcl-2的表达降低而Bax的表达增加。结论:HSA-IFNα2b体外可明显抑制HepG2.2.15细胞的增殖及HB-sAg的表达,并可引起HepG2.2.15细胞的凋亡和死亡。     

空心莲子草总皂苷对HepG2.2.15细胞系HBsAg和HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响

目的：研究空心莲子草总皂苷对乙肝病毒的抑制作用。方法：应用光密度测定法和细胞培养技术,研究空心莲子草总皂苷对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响。结果：96孔板试验：实验第3、6日,空心莲子草总皂苷对HBsAg和HBeAg表达均有明显的抑制作用（与对照组比较P<0.01）;同时采用定量PCR方法检测,空心莲子草总皂苷（200 mg·L-1）可使培养基中HBV-DNA转阴。结论：空心莲子草总皂苷有较强的体外抗乙肝病毒作用。     

HepG2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定抗乙型肝炎病毒复制作用的比较

目的：对HepG2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定的抗乙型肝炎病毒（HBV）作用进行比较。方法：构建HBV siRNA的表达载体并转染入HepG2.2.15细胞。分别于48、72、96h收获细胞,与拉米夫定治疗组比较抗HBV作用。用ELISA方法检测HBsAg浓度;HBV DNA水平用实时定量PCR测定;用逆转录PCR检测HBV mRNA水平。结果：拉米夫定能明显降低HBV DNA水平,对HBsAg和mRNA抑制率较低;siRNA能全面降低HBsAg、HBV DNA和mRNA水平（P〈0.05）。结论：HepG2.2.15细胞中,siRNA与拉米夫定的抗病毒作用完全不同,siRNA抗HBV作用明显优于拉米夫定。     

以HepG2.2.15细胞为对象的RNAi实验研究

目的观察针对乙型肝炎病毒(HBV)X区设计的siRNA表达载体pGenesil-HBVX对HepG2.2.15细胞相应蛋白表达的影响。方法筛选出最佳转染效率的剂量配比,将阳离子脂质体METAFECTENE与pGen-esil-HBVX的复合物转染HepG2.2.15细胞,于转染后24、48、72h采用时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)。结果具有最佳转染效率而且不显著影响细胞活性的剂量配比为8μl∶2.5μg。pGenesil-HBVX转染HepG2.2.15细胞后24h,细胞上清液中HBsAg、HBeAg含量尚无显著变化(P>0.05);48h后HBsAg、HBeAg表达均有明显下降(P<0.01),并且持续至72h。结论pGenesil-HBVX可以在获得一定转染效率的基础上有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV的表达。     

针对HBVX基因的反义核酸抑制HBV表达的体外研究

目的筛选反义脱氧寡核苷酸 (ASON)抗乙型肝炎病毒 (HBV)的有效靶向位点。方法设计合成针对HBVX翻译起始位点的ASON即序列Ⅰ ,并设非互补序列作对照即序列Ⅱ ,以人肝癌细胞系 (2 .2 .15 )为细胞模型 ,应用ELISA动态观察不同浓度 (1、5、10 μmol/L)ASON一次性用药对HBV基因表达的抑制作用 ,用MTT比色法观察ASON对细胞代谢的影响 ,以苔盼蓝染色计数观察ASON对细胞活性的影响。结果ASON可有效地抑制HBV基因的表达 ,在 1、5、10 μmol/L浓度时对HBsAg的抑制率分别为 6 3%、45 %和 5 7% ,对HBeAg的抑制率分别为 38%、41%和 5 6 % ;而对照序列Ⅱ对HBsAg和HBeAg的抑制率均低于 12 %。MTT法表明ASON对 2 .2 .15细胞代谢无影响(P >0 .0 5 ) ,苔盼蓝染色计数表明ASON对 2 .2 .15细胞活性无影响 (P >0 .0 5 )。结论HBVX翻译起始区是ASON抗HBV复制表达的有效靶向位点