中药复方对ED大鼠海绵体Cx43的影响

目的基于"肝藏"理论,从阴茎海绵体平滑肌缝隙链接蛋白Cx43角度研究疏肝养血法对肝郁血虚ED大鼠的干预作用。方法选取经交配后证实有正常勃起功能的雄性SD大鼠30只,随机分为空白组、模型组、疏肝养血组,每组10只,采用尾部放血和悬吊激惹方法配合低铁饮食制备肝郁血虚勃起功能障碍模型,给以四物汤与逍遥散合方煎剂灌胃14天,末次灌胃24小时后处死大鼠,取阴茎海绵体组织,HE染色观察阴茎海绵体组织病理学变化,免疫组化SP法检测阴茎海绵体Cx43表达。结果与空白组相比,模型组阴茎海绵体组织病理学改变不明显,阴茎海绵体平滑肌中Cx43表达明显降低(P0.05);与模型组相比,疏肝养血组阴茎海绵体平滑肌中Cx43表达显著提高(P0.05)。结论改善阴茎海绵体平滑肌中Cx43表达可能是基于"肝藏"理论,疏肝养血法治疗ED的物质基础及作用机制之一。     

几种常见的细胞因子对Cx43的作用

缝隙连接是介导相邻细胞间离子和小分子信号物质直接交换的跨膜通道,连接蛋白43（connexin43,Cx43）是比较常见的缝隙连接蛋白,在很多细胞中都有表达。很多细胞因子能影响Cx43的表达及其缝隙连接功能。本文综述了Cx43的结构和功能及几种常见的细胞因子与Cx43表达之间的关系。     

过表达及定点突变缝隙连接蛋白Cx43小鼠黑色素瘤细胞模型的构建

目的 构建小鼠黑色素瘤细胞（B16）过表达野生型及点突变型缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）细胞模型,为以缝隙连接（Gap Junction,GJ）为靶点的中药复方、中药单药及药物单体的研究提供可靠阳性对照和阴性对照。方法 构建野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒,用定点突变技术获得Cx43G21R和Cx43G138R突变体,对上述3种质粒进行双酶切和测序鉴定,并分别包装病毒感染B16细胞,使B16细胞过表达野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R。Western blot检测Cx43蛋白表达水平变化,荧光示踪法观察缝隙连接通讯（Gap Junction Intercellular Communication,GJIC）功能变化。结果 ①酶切及测序证明,成功构建pLVCx43-mCherry、pLVCx43-mCherryG21R、pLVCx43- mCherryG138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒。②成功感染B16细胞并筛选稳定过表达Cx43、Cx43G21R、Cx43G138R细胞株,Western blot检测显示上述细胞株Cx43蛋白表达均高于对照组。③过表达野生型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组增强;过表达突变型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组减弱。结论 过表达野生型Cx43可增强B16细胞GJIC功能,过表达突变型Cx43可抑制B16细胞GJIC功能。     

糖尿病性勃起功能障碍与阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的相关研究进展

糖尿病性勃起功能障碍（Diabetic Erectile Dysfunction,DMED）与阴茎海绵体平滑肌细胞（Corporal Cavernous Smooth Muscle Cells,CCSMC）表型转化关系密切。CCSMC表型转化是一种CCSMC由“收缩型”向“合成型”或“增殖型”转化的趋势。阴茎的勃起是神经-内分泌调节下的海绵体血流动力学变化过程,其中CCSMC的舒张在此过程中起着关键作用。CCSMC表型转化的标志性蛋白包括收缩型和合成型,前者包括α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth Muscle Actin,α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（Smooth Muscle Myosin Heavy Chain,SMMHC）等;后者包括骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）、波形蛋白等蛋白。若收缩型蛋白表达下调或合成型蛋白表达上调,则提示CCSMC发生表型转化,反之称为逆表型转化。研究表明,DMED大鼠CCSMC中α-SMA等收缩型标志物表达下降,而OPN等合成型（增殖型）标志物上升,显示DMED可以促使CCSMC发生表型转化。DMED的发病机制包括血管病变、神经病变、阴...     

Cx43在VSMC增殖和迁移过程中的作用

VSMC异常增殖和迁移是许多心血管疾病的共同病理过程。GJ是介导相邻细胞间离子和小分子信号物质直接交换的跨膜通道,VSMC中主要表达的Cxs为Cx43。本文综述了Cx43结构和功能及其与VSMC增殖和迁移之间的关系。     

香砂六君子汤对脾气虚证大鼠胃Cajal间质细胞、缝隙连接损伤的修复作用研究

目的探讨脾气虚证（Pi qi deficiency syndrome,PQDS）大鼠胃Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal,ICC）、缝隙连接（gap junction,GJ）损伤和香砂六君子汤的修复作用。方法选择30只健康Wistar大鼠,采用苦寒泻下法建立脾气虚证模型。造模成功后分为脾气虚组（模型组）和香砂六君子汤治疗组（治疗组）,每组各15只。另选择15只健康Wistar大鼠作为健康组。治疗组灌胃香砂六君子汤（2 mL/100 g）,14天;健康组和模型组按照治疗组方法予等量生理盐水灌胃14天。分别于造模前、干预前及干预后取各组胃肌层组织,采用透射电镜观察ICC和GJ的超微结构改变;免疫组织化学法检测连接蛋白43（Cx43）的数量和分布。结果透射电镜显示：与健康组比较,模型组大鼠ICC和GJ明显损伤;经治疗组干预后ICC和GJ有明显修复趋势。与本组造模前比较,模型组干预前后胃肌层Cx43 IOD值均降低（P〈0.05）。与本组干预前比较,治疗组干预后Cx43 IOD值升高（P〈0.05）。与健康组比较,模型组干预前后胃肌层Cx43 IOD值均降低（P〈0.05）。与模型组比较,治疗组干预后Cx43 IOD值升高（P〈0.05）。结论脾气虚证大鼠胃肌层中ICC和GJ超微结构破坏,香砂六君子汤可修复脾气虚证状态下ICC和Cx43的损伤。     

舒胃汤对FD肝郁脾虚证模型大鼠胃肠平滑肌Beclin-1、mTOR、Cx43蛋白与mRNA表达的影响

目的通过研究舒胃汤(柴胡、香附、白术,等)对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚证模型大鼠胃窦和幽门区平滑肌中自噬调控基因Beclin-1、雷帕霉素靶蛋白mTOR、连接蛋白Cx43蛋白与mRNA表达的影响,从自噬与细胞间缝隙连接通道探讨舒胃汤对功能性消化不良的治疗作用及机制。方法取60只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,莫沙必利组(1.37 mg/kg),舒胃汤低、中、高剂量组(7.67、15.34、30.68 g/kg)。除空白组外,各组大鼠按复合病因造模法造模21 d复制FD肝郁脾虚证大鼠模型。于造模结束后第1天开始给药,空白组与模型组大鼠给予等量蒸馏水,其余各组大鼠按剂量要求灌胃给药,每天1次,连续给药14 d。末次给药2 h后,颈静脉放血处死大鼠,摘取各组大鼠胃窦与幽门组织,Western blot法检测Beclin-1、mTOR、Cx43蛋白表达,RT-qPCR法检测Beclin-1、mTOR、Cx43 mRNA表达。结果 Western blot结果显示,舒胃汤低、中、高剂量组Beclin-1表达明显降低(P0.01),舒胃汤高剂量组Cx43表达明显升高(P0.05);RT-qPCR结果显示,舒胃汤中、高剂量组Beclin-1表达明显降低(P0.01),mTOR表达明显升高(P0.01),舒胃汤低、中、高剂量组Cx43表达明显升高(P0.01)。结论舒胃汤可通过上调FD模型大鼠胃肠平滑肌细胞mTOR mRNA、Cx43蛋白及mRNA表达,下调Beclin-1蛋白及mRNA表达,抑制细胞自噬及增强细胞间缝隙连接治疗功能性消化不良。     

糖尿病性勃起功能障碍与细胞凋亡的研究进展

糖尿病性勃起功能障碍（Diabetes Mellitus-induced Erectile Dysfunction,DMED）是指继发于糖尿病的男性勃起功能障碍。此病表现为阴茎持续不能达到和维持足够勃起硬度以获得满意的性生活。作为糖尿病常见的微血管并发症之一,其发病原因复杂,发病机制尚不明确。通常认为,此病由多种相互关联的机制引起,包括内皮细胞紊乱、氧化应激、自主神经病变等。近年研究发现,糖尿病患者长期高血糖会导致与勃起功能关系密切的神经、血管内皮、海绵体平滑肌、睾丸等组织细胞凋亡,进而引发勃起功能障碍。文章以细胞凋亡为切入点,结合细胞凋亡途径相关通路,综述近年来细胞凋亡在DMED中的研究进展,旨在为临床防治DMED提供新思路。     

人参总皂苷增强小鼠黑色素瘤B16细胞缝隙连接功能的实验研究

目的探讨人参总皂苷(total ginsenosides,TGs)对小鼠黑色素瘤B16细胞缝隙连接(Gap junction,GJ)功能的影响及其作用机制。方法 MTT法测TGs对B16细胞生长的影响,荧光显微镜结合荧光示踪法分析GJ功能变化,以各试验组受体细胞均数与对照组的比值作为评价GJ功能的指标,流式细胞仪检测对照组和实验组的绿色荧光供体细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)变化分析GJ功能改变,Western blot分析连接蛋白(Connexin,Cx)表达。结果 1~8μmol·L-1TGs处理B16细胞48 h对其生长状态无明显影响;用1,2,4,8μmol·L-1TGs处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,TGs能明显提高B16细胞荧光染料Calcein传递,对照组和实验组G4/G3比值分别是0.06±0.01,0.09±0.02,0.10±0.01,0.12±0.03和0.13±0.02,各实验组G4/G3值明显高于对照组(P0.01);Western blot分析结果显示,用1,2,4,8μmol·L-1TGs处理B16细胞48h对其连接蛋白Cx32表达有明显的增强作用,但对Cx43和Cx26表达无影响。结论体外较低浓度TGs能够有效促进B16细胞GJ功能,并具有一定的剂量-效应关系。1~8μmol·L-1TGs虽能显著促进B16细胞Cx32蛋白的表达,但在本试验浓度范围内并无明显的量效关系,且对Cx43和Cx26表达无明显影响。     

勃起功能障碍与血管内皮因子的相关性研究进展

阴茎的正常勃起需要血管、神经、激素、心理等因素以及阴茎海绵体的协调完成,其中任何因素的异常均可能导致勃起功能障碍（Erectile dysfunction,ED）的发生,因此ED可因血管性、神经性、内分泌性、药物性、心理性因素及海绵体结构异常等多种因素引起,其中多种代谢性疾病（如肥胖、糖尿病、高血压、高尿酸血以及血脂异常等）合并出现的代谢综合征、嗜烟酒等不良生活方式、缺乏运动对ED的发生有着重要的影响,同时也与血管功能损害及心血管疾病的发生有直接关系.     

黄连解毒汤有效部位对脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及Cx43表达的影响

目的 观察黄连解毒汤水提物及其有效部位（总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜）对局灶性脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响。方法 线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型,雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、黄连解毒汤水提物组（800 mg/kg）、总生物碱组（44 mg/kg）、总黄酮组（50 mg/kg）、总环烯醚萜组（80 mg/kg）,连续ig给药7 d,每天给药1次。HE染色观察脑组织病理学改变;胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色观察星形胶质细胞活化;GFAP/Cx43免疫荧光双标染色检测Cx43表达;实时RT-PCR检测Cx43基因表达。结果 模型组大鼠缺血半暗带区神经元数目减少,GFAP、Cx43基因及蛋白表达上调（P<0.01）。黄连解毒汤水提物及其3个有效部位（总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜）均可增加脑缺血大鼠缺血半暗带区神经元数目（P<0.05、0.01）;降低缺血半暗带区GFAP及Cx43基因、蛋白表达（P<0.05、0.01）。结论 黄连解毒汤水提物及其有效部位（总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜）通过抑制星形胶质细胞过度活化,干预Cx43表达,保护缺血半暗带区神经细胞。     

针刺治疗Cx43基因敲除鼠胶原性关节炎的免疫学研究

目的：探讨针刺治疗Cx43基因敲除鼠胶原性关节炎（Ⅱcollagen-induced arthritis,CIA）的疗效及免疫学机制。方法：以Cx43基因敲除杂合型（Cx43^＋/-）和野生型（Cx43^＋/＋）小鼠为研究对象,用牛Ⅱ型胶原诱导成CIA模型。在初次免疫后第4周开始针刺治疗,连续3周。观察关节炎分数,流式细胞术检测脾淋巴细胞中Th细胞亚群含量。结果：Cx43^＋/-小鼠CIA发病率及关节炎分数明显低于Cx43^＋/＋小鼠;针刺抑制Cx43^＋/＋CIA小鼠Th1细胞分泌,降低Th1/Th2比值,对Th2细胞的分泌无明显影响;而针刺对Cx43^＋/-CIA小鼠Th细胞亚群含量无明显影响。结论：针刺对Cx43^＋/＋CIA小鼠疗效明显优于Cx43^＋/- CIA小鼠,提示针刺疗效与Cx43基因相关,其疗效可能是通过调节Th1/Th2使之接近动态平衡而起作用的,针刺疗效与这种调节作用成正相关。     

补阳还五汤通过调节血管平滑肌细胞Cx43作用于动脉粥样硬化的研究

目的:研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞(HUVSMC)增殖的作用及其机制。方法:以14.9g/kg补阳还五汤剂量连续灌胃SD大鼠1周,提取补阳还五汤含药血清,并与胎牛血清(FBS)按一定比例,配置成20%(20%补阳)、10%(10%补阳+10%FBS)、5%(5%补阳+15%FBS)补阳还五汤含药血清组组。血管平滑肌细胞长满培养瓶或培养板后,用同型半胱氨酸分组造模,将细胞随机分为10组:空白组、模型组、乙酰半胱氨酸(NAC)组、20%、10%、5%补阳还五汤含药血清组、NF-kB阻断剂PDTC组、MAPK阻断剂SB20组、ERK阻断剂PD98组、PKC阻断剂Stau组。蛋白质印迹法(Western blot)测定血管平滑肌细胞Cx43蛋白的表达量;RT-PCR技术检测各组血管平滑肌细胞Cx43 mRNA水平;建立血管内皮-平滑肌细胞共培养体系,Western blot分别检测内皮细胞和平滑肌细胞内Cx43的表达;电镜检测血管内皮-平滑肌细胞共培养体系细胞缝隙连接的变化。结果:Western blot实验中,平滑肌细胞与共培养体系中的内皮细胞、平滑肌细胞的Cx43蛋白表达水平,模型组与空白组比较,模型组中Cx43蛋白表达量均显著升高;乙酰半胱氨酸组,20%、10%、5%补阳还五汤含药血清组与模型组比较,Cx43蛋白表达显著下调。RT-PCR实验中,模型组与空白组比较,模型组中Cx43mRNA表达量显著升高;乙酰半胱氨酸组、20%、10%、5%补阳还五汤含药血清组与模型组比较,Cx43mRNA表达量显著降低。电镜检测细胞缝隙连接实验中:模型组与空白组比较,内皮-平滑肌细胞之间形成的缝隙连接遭到破坏,而20%补阳还五汤含药血清组却能形成与正常组相似的连接。结论:补阳还五汤可能通过下调Cx43蛋白以及其mRNA的表达,改善细胞之间的缝隙连接,减少血管平滑肌细胞增殖而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞 表型转化及其勃起功能的影响

目的 探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化及其勃起功能的影响。方法 将60只勃起功能正常的雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西地拉非组(5 mg·kg^-1)及地龙蛋白低、中、高剂量组(45、90、180 mg·kg^-1),每组10只。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg·kg^-1)结合高脂饲料喂养建立糖尿病大鼠模型;8周后,颈部注射阿朴吗啡(APO,100μg·kg^-1),制备DMED大鼠模型。造模成功后,按剂量灌胃给药,每日1次,连续4周。测定各组大鼠造模前、造模第3天、给药4周后的血糖水平及体质量。采用多导生理记录仪测定大鼠阴茎海绵体内压(ICP)、颈动脉内压(MAP),计算ICP/MAP比值;免疫组织化学法检测阴茎海绵体中收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)和合成型标志物Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、骨桥蛋白(OPN)表达情况;RT-PCR法检测阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC、C...     

益气活血药对心肌梗死大鼠心脏结构和Cx43表达的影响

目的 探讨益气活血药对心肌梗死（myocardial infarction,MI）大鼠心脏结构及心肌电偶联的关键结构缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响.方法 结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立MI模型,将30只MI大鼠随机分为模型组、益气活血组（参芍片0.25 g/kg联合复方丹参片0.75 g/kg）和倍他乐克组（12 mg/kg）,每组10只,于造模成功后24 h开始灌胃,1次/日,连续4周.另设假手术组10只,给予等量去离子水灌胃.4周后取材进行苏木素-伊红染色观察心肌组织病理,图像分析测量左室内径和心肌梗死百分比,免疫组织化学法检测心肌Cx43的表达.结果 与假手术组比较,术后4周模型组大鼠左室内径明显增大,心肌Cx43表达的平均光密度值（average optical density,AOD）、阳性表达面积（Area）和积分光密度（integral optical density,IOD）明显降低（P〈0.01）.与模型组比较,益气活血组和倍他乐克组的左室内径和心肌梗死百分比均明显减少（P〈0.05或P〈0.01）,在心肌Cx43的表达上,仅益气活血组心肌Cx43表达的AOD和IOD明显增加（P〈0.05或P〈0.01）.结论 益气活血治疗能减少MI大鼠左室内径和心肌梗死百分比,增加心肌Cx43表达强度和部分好转Cx43弥散表达状态,对MI后缺血心肌有保护作用,可能是稳定MI后心肌细胞间电偶联的机制之一.     

益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞actin、Cx43表达及GJIC功能的影响

目的观察益气活血中药复方对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒性心肌炎心肌细胞间缝隙连接结构及通讯功能的影响。方法以免疫组化法检测正常组、病毒组、益气活血中药复方组心肌细胞肌动蛋白(actin)及连接蛋白(connexin43,Cx43)表达;,并以激光扫描共聚焦显微镜法检测各组心肌细胞荧光漂白恢复率。结果益气活血中药复方能上调CVB3病毒性心肌炎心肌细胞actin及Cx43表达,能显著改善细胞间缝隙连接通讯(GJIC)功能。结论益气活血中药复方具有对抗CVB3致心肌细胞骨架蛋白损伤,修复CVB3病毒性心肌炎心肌细胞间缝隙连接通道结构,改善CVB3攻击后心肌细胞GJIC功能的作用。     

针刺对免疫抑制的Cx43基因敲除小鼠免疫功能的影响

目的:观察针刺对免疫抑制的Cx43基因敲除小鼠(Cx43+/-鼠)免疫功能的影响,探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)与针刺信号传递机制之间的可能关系。方法:8~9周龄雄性Cx43+/-小鼠及野生型小鼠(Cx43+/+鼠)各18只,分别随机分为正常组、模型组和针刺组,每组6只。小鼠腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg)制造免疫抑制模型。针刺双侧"足三里"穴及"关元"穴,每5 min行针1次,每次30 s,留针15 min,连续治疗7 d。计算各组小鼠的脾脏指数及胸腺指数和外周血白细胞数,并采用流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞亚群的百分数。结果:Cx43+/+鼠及Cx43+/-鼠的模型组与各自的正常对照组相比,其脾脏指数、胸腺指数、白细胞数及CD3+%、CD4+%均明显降低(P<0.05,0.01),提示两种动物模型组免疫功能显著低下。在Cx43+/+小鼠上,针刺组的脾脏指数、胸腺指数、白细胞数、CD3+%、CD4+%、CD8+%与模型组比较均明显升高(P<0.05,0.01),与正常组比较差异无显著性意义(P>0.05),提示针刺可增强免疫功能;而对于Cx43+/-小鼠,针刺组脾脏指数、胸腺指数、白细胞数、CD3+%、CD4+%、CD8+%与模型组相比较差异无显著性意义(P>0.05),说明基因Cx43敲除后针刺的效应消失。结论:Cx43基因的敲除抑制了针刺改善免疫力效应的产生,提示以Cx43为主要组成的细胞间缝隙连接(GJ)可能在针刺调整机体免疫功能的信号传递通路上起着重要的作用,GJ可能与针刺改善免疫力效应的产生有着密切的关系。     

牛蒡子苷元对人肝癌细胞HepG2缝隙连接蛋白表达的影响

目的：观察牛蒡子苷元在体外对人肝癌细胞HepG2缝隙连接蛋白（Cx）表达的影响。方法：采用Western blot 技术检测牛蒡子苷元对人肝癌细胞HepG2缝隙连接蛋白（Cx26/32/43）的表达。结果：Western blot 检测,用国产多克隆Cx一抗和进口单克隆Cx一抗的实验均显示：牛蒡子苷元等能明显提高人肝癌细胞HepG2Cx32的表达,且有时间、浓度依赖性,氧化剂H2O2能抑制牛蒡子苷元此作用;但牛蒡子苷元对HepG2的Cx43表达影响24h不明显,48h能明显提高Cx43表达。结论：牛蒡子苷元能提高人肝癌细胞Cx表达,增强细胞间缝隙连接功能。     

六味地黄丸含药血清对自杀基因治疗黑色素瘤增效作用的缝隙连接机制初探

目的 探讨六味地黄丸含药血清对HSV-tk/GCV自杀基因系统杀伤小鼠黑色素细胞瘤B16细胞增效作用的缝隙连接机制。方法 制备六味地黄丸含药血清（分别为2.5%、5.0%、10.0%六味血清）及10.0%对照血清。 采用RT-PCR法检测六味地黄丸含药血清对B16细胞株的缝隙链接蛋白（Cx）26和Cx43 mRNA的影响,Western blot法和间接免疫荧光法检测其对B16细胞Cx26和Cx43蛋白表达的影响;RT-PCR检测Cx26－309、Cx26－337、Cx26－367、Cx26－2098 SiRNA对Cx26的干扰效率,选用干扰效率最高的Cx26－2098 SiRNA干扰Cx26基因后观察六味地黄丸联合HSV-tk/GCV的旁观者效应;MTT法检测细胞间缝隙连接通讯功能（gap junctional intercellular communication, GJIC）抑制剂甘草次酸（GA）对六味地黄丸联合tk/GCV系统对B16细胞杀伤作用的影响,实验设为对照血清组,2.5%、5.0%、10.0%六味血清组（简称低、中、高剂量组）及对照血清联合GCV组,低、中、高剂量联合GCV组,低、中、高剂量联合GCV加GA组。GCV终浓度为20 mol/L,GA终浓度为50 mol/L。结果 六味地黄丸含药血清能提高B16细胞中Cx43 mRNA及蛋白的表达,且具有量效依赖关系;对Cx26 mRNA与蛋白的表达具有双向调节作用,低剂量时具有抑制作用而高剂量是能上调其表达;SiRNA干扰Cx26基因表达后,六味地黄丸联合自杀基因治疗的旁观者效应与没有干扰前比较无明显的变化;低、中、高剂量联合GCV组在GA阻断前细胞抑制率（48.75%、59.39%、69.28%）与阻断后细胞抑制率（29.14%、38.71%、58.13%）比较,显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 六味地黄丸含药血清对HSV-tk/GCV自杀基因系统杀伤恶性黑色素瘤B16细胞的增效作用与缝隙连接机制有关,可能是通过提高Cx26和Cx43等缝隙连接蛋白表达而达到协同增效作用。     

温胆汤含药血清对星形胶质细胞Cx43和GJ的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对星形胶质细胞缝隙连接(GJ)和连结蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组。氯氮平组ig氯氮平20 mg/kg,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg组分别ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,正常组用等量生理盐水ig,1次/d,8天后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌备用。将星形胶质细胞分为6组:对照组(普通培养基培养)、正常鼠血清组、氯氮平20mg/kg血清组、温胆汤40g/kg血清组、温胆汤30g/kg血清组、温胆汤20g/kg血清组,按照相应的分组更换含药血清进行培养24h、36h、48h后,采用划痕染料标记示踪技术(SLDT)在荧光显微镜下,通过荧光黄扩散距离测定星形胶质细胞间GJ水平;Western blotting法检测星形胶质细胞中Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结果:温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组作用于星形胶质细胞24h、36h、48h后,能使荧光扩散面积及强度不同程度的显著增加;并显著提高Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结论:温胆汤能够上调星形胶质细胞Cx43磷酸化和非磷酸化的表达,增强GJ水平,从而改善细胞间隙连接通讯(GJIC)功能。