肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7志贺毒素研究进展

肠出血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7于1975年被首次分离，为革兰氏阴性杆菌，对酸耐受性强，在pH3～5条件下，可长期生存，能产生致死性志贺毒素（Shiga toxin，Stx），1982年被确认为严重致病菌。其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点，已经成为全球性的公共卫生问题，对人们的健康构成了巨大威胁。据报道，美国每年感染STEC约有10万例．其中O157：H7感染约有7．3万例。近年来，美国、日本、加拿大、英国等发达国家EHEC O157：H7发病呈上升趋势，许多国家已把它列为法定报告传染病。我国江苏、安徽省曾于1999年暴发流行大肠杆菌O157感染性腹泻，患者超过2万例，死亡177例，流行时间7个月。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7脂多糖抗原的制备及鉴定

目的提取纯化肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7脂多糖（LPS）抗原并对其鉴定,以探讨其应用于检测抗O157抗体的价值。方法应用热酚水法提取EHECO157：H7S型933株LPS抗原,并经超速离心纯化。提取物以蒽酮硫酸法、紫外光谱吸收法、考马斯亮蓝染色法及鲎试剂分别测定多糖、核酸、蛋白含量和尝试剂凝集活性。LPS抗原致敏醛化鸡血球,IHA法检测EHEC157：H7及其它肠道病原菌的抗血清。对凝集阳性的抗血清,经菌体抗原吸收、O157LPS抑制及去脂质多糖抗原抑制试验,确定抗血清与LPS的反应位置。结果纯化后的O157LPS抗原告多精,具鲎试剂凝集活性,未检出核酸,蛋白含量＜0．5％。O157LPSIHA检测O157多克隆和单克隆抗体均呈高效价凝集阳性反应,而大部分其它肠道病原菌抗血清均呈阴性反应,交叉反应仅见于沙门氏菌O30、EIECO144：K？及ESIECⅣ抗血清。EHEC157和沙门氏菌O30抗血清与O157LPS反应位置为多糖部分,而EIECO144：K？及ESIECⅣ抗血清的反应位置为脂质A部分。结论热酚水法提取的EHECO157LPS抗原纯度高、特异性强,可望应用于抗O157抗体的检测。O157LPS抗原的去脂质可进一步提高反应的特异性。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7疫苗研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli．EHEC）是出血性肠炎的主要病原体．其主要血清型是O157：H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157：H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），还可在5％～10％的病例中引发溶血性尿毒综合征（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡。     

濮阳市人畜禽粪便、食品中O157：H7监测报告

EHEC为人畜共患病，自1982年在美国首次报道了肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7大肠杆菌引起的出血性肠炎以来，目前世界上许多发达国家和一部分发展中国家都发生了O157：H7大肠杆菌感染的爆发流行，已成为世界性的公共卫生问题。我国已经从牛、羊、猪、鸡的粪便标本、苍蝇以及牛肉、鸡肉、鱼、腌菜等食品中分离到O157：H7大肠     

O157:H7大肠杆菌感染的动物模型研究近况

O157：H7大肠杆菌是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的一个主要菌型。其被确认为一种新型肠道致病菌。是近年来食品卫生及肠道感染领域最重要的研究进展之一。感染该菌可使人患腹泻、出血性结肠炎(HC),也可引发溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)等严重并发症。O157：H7被发现以来的20余年,该菌引发的食物中毒在世界各地包括我国都有不同规模的暴发流行。如2000年5月份,江苏省丰县由O157：H7引起的Hc占腹泻病患者0．98％。6月份铜山县由O157：H7引起的HC患者占腹泻病患者5．89％。该菌长期驻留于牛、羊、猪、鸡等家     

肠出血性大肠杆菌O157 EspA的研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157：H7曾多次在世界各地，特别是发达国家引起广泛的暴发流行。感染主要导致腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），并经常伴发溶血性尿毒综合征（Hemolytic ruemic syndrome，HUS）、血栓形成的血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）并发症，严重威胁着人类的生命健康。人类感染此菌的途径主要是食用或接触污染的牛肉、蔬菜、水果及水源等。目前，对O157：H7感染尚缺乏有效的防治方法，只能给予对症治疗和适当的抗菌治疗，但研究证明抗菌药物可促使O157：H7大肠杆菌释放Vero毒素，从而使患者并发溶血性尿毒综合征（HUS）的危险性增加。     

大肠埃希菌O157：H7

1982年，在Michigan和Oregon因进食污染的汉堡包发生的47名血性腹泻患者粪便中第一次分离出E．coliO157:H7，回顾性研究发现它与1975年一名自限性的急性血性腹泻患者粪便培养的大肠埃希菌为一类，并且1973～1982年间发生的3千多份出血性肠炎E．coli培养中均见O157：H7血清型[1]．它可产生一种与志贺氏毒素（Shigatokin，ST）极相似的毒素，故称之为类志贺氏毒素。又因它对培养的Vero细胞具毒性作用，故又称之为"Vero毒素"。该菌因引起出血性腹泻而得名肠出血性大肠埃希氏苗（enterohemorrhagicE．coli，EHEC）。近年来，更多的研究…     

抗大肠杆菌O157：H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究

目的 制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体（Yolk Immunoglobulin,IgY)，研究其对肠出血性大肠杆菌（EHEL）O157：H7的被动保护作用。方法 采用EHEC O157：7933菌株制备抗原，免疫SPF莱杭鸡，用脱脂和盐析的方法，从其所产鸡蛋中提取IgY抗体，用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果 用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测提取IgY抗体滴度达到1：200000以上，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现IgY抗体对动物的毒性作用，被动保护实验结果表明，IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。结论 （1）通过常规免疫技术，可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。（2）脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。（3）建立了EHEC O157：H7的乳鼠肠道感染模型。（4）IgY抗体是治疗肠道感染的一种有潜力的口服药物。     

天津地区环境样品中首次检出大肠杆菌O157:H7

肠出血性大肠杆菌是近年来新发现的可对人体健康产生严重危害的肠道致病菌，引起人腹泻、出血性肠炎、血栓性血小板减少性紫癜和溶血性尿毒综合征，在国外导致多起暴发流行，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题。EHEC O157：H7是一种以食物传播为主要传播途径的人兽共患疾病的病原菌，国内许多地方均已分离到，1999年江     

5株产硫化氢大肠杆菌O157的分离鉴定

肠出血性大肠杆菌O157：H7是引起人类出血性肠炎的主要菌型，自1982年在美国首次被分离并确认为食物中毒新型致病菌以来，在世界范围内发生过多次暴发，并造成严重危害。尤其是1996年5～8月日本发生了由E．coli O157：H7引起的人类历史上大规模的暴发流行，引起世界普遍关注。我们自1999年开始开展了大肠杆菌O157：H7的监测，     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的制备及鉴定

目的提取纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7脂多糖(LPS)抗原并对其鉴定,以探讨其应用于检测抗O157抗体的价值.方法应用热酚水法提取EHEC O157∶H7 S型933株LPS抗原,并经超速离心纯化.提取物以蒽酮硫酸法、紫外光谱吸收法、考马斯亮蓝染色法及鲎试剂分别测定多糖、核酸、蛋白含量和鲎试剂凝集活性.LPS抗原致敏醛化鸡血球,IHA法检测EHEC O157∶H7及其它肠道病原菌的抗血清.对凝集阳性的抗血清,经菌体抗原吸收、O157 LPS抑制及去脂质多糖抗原抑制试验,确定抗血清与LPS的反应位置.结果纯化后的O157 LPS抗原含多糖,具鲎试剂凝集活性,未检出核酸,蛋白含量＜0.5%.O157 LPS IHA检测O157多克隆和单克隆抗体均呈高效价凝集阳性反应,而大部分其它肠道病原菌抗血清均呈阴性反应,交叉反应仅见于沙门氏菌O30、EIEC O144∶K?及ESIECⅣ抗血清.EHEC O157和沙门氏菌O30抗血清与O157 LPS反应位置为多糖部分,而EIEC O144∶K?及ESIECⅣ抗血清的反应位置为脂质A部分.结论热酚水法提取的EHEC O157 LPS抗原纯度高、特异性强,可望应用于抗O157抗体的检测.O157 LPS抗原的去脂质可进一步提高反应的特异性.     

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

目的肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是一种重要的人畜共患病致病菌,主要通过被污染的食物传播,引起出血性结肠炎,建立其快速检测方法具有重要意义。方法基于EHEC O157∶H7保守的rfbE基因序列,设计4条引物,利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP),成功建立了EHEC O157∶H7LAMP快速检测方法 ,60min内即可完成致病菌检测。结果利用该LAMP方法对30种共38株细菌进行检测,所试EHEC O157∶H7均为阳性结果 ,说明该方法具有高度特异性。本方法对纯培养的EHEC O157∶H7检测限为12CFU/mL,污染食品中EHEC O157∶H7的检测限为18CFU/g。实践应用表明,对1121份进出口肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出57份LAMP阳性,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。结论该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7Tir细胞骨架偶联蛋白（TeeP）基因，并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC0157：H7Sakai菌株基因组扩增TeeP基因，构建TeeP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后，免疫新西兰白兔，制备兔抗TeeP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Westernblotting法进行测定和分析。结果从EHECO157：H7Sakai菌株中克隆出了1014bp的TeeP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达；以TeeP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体，Westernblotting分析此抗体能与TeeP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TeeP基因，所获TeeP具有良好的抗原性，为进一步研究TeeP在EHECO157：H7致病机制中的作用奠定基础。     

O157：H7原噬菌体消除菌株的鉴定与分析

目的O157：H7是一种重要的新发传染病病原，它主要引起出血性或非出血性腹泻，出血性结肠炎(HC)或溶血性尿路综合征(HUS)等。研究表明引起HC和HUS的主要毒力因子是由整合到O157基因组中的原噬菌体编码的志贺毒素(Stx)，包括Stx1和Stx2，它们分别由原噬菌体933v和933w所编码。由于原噬菌体本身具有潜在的不稳定性，本研究以O157：H7 86—24为始发菌株，将其进行传代培养，筛选原噬菌体消除菌株，对原噬菌体在O157基因组中的整合位点进行分析，并用Vero细胞对原噬菌体消除菌株的细胞毒性进行鉴定。结果筛选到了原噬菌体消除后的O157菌株，该菌株丧失了对Vero细胞的毒性作用。序列比较分析表明原噬菌体933v的整合位点位于O157：H7 EDL933基因组中第2966137位的相对位置，在整合位点两侧有一个20bp的直接重复序列，原噬菌体933w的整合位点位于基因组中第1330826位的相对位置，在整合位点两侧有一个7bp的直接重复序列。该研究证实了编码Stx的原噬菌体具有不稳定性，原噬菌体对O157的致病性具有重要作用，也提示原噬菌体在致病菌的进化过程中也具有重要作用。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7L型及其意义的研究

目的诱导肠出血性大肠杆菌O157：H7（以下简称O157：H7）L型观察其特性及意义。方法羧苄青霉素和氨苄青霉素纸片法诱导。比技L型,与原菌生化特性、药物敏感性,L型小鼠灌胃,取肝、结肠、直肠组织分离培养,以观察体内L型存留情况。结果经L型鉴定,如电镜超薄切片等证实细胞壁缺损。L型生化反应比原菌大为减弱、O157凝集为阴性,对抗生素敏感性除卡那霉素（P＜0．01）外,其余同原菌无显著性差别（P＞0．05）。小鼠体内肠道可存留L型,其可回复为细菌型。结论两种抗生素均可诱导O157：H7形成L型。给实验室诊断带来极大困难。提示L型有可能造成该菌感染传播及暴发流行的危险。     

肠出血性大肠埃希菌(O157:H7)的基因同源性的分析

目的 对江苏省徐州地区O157：H7的病原学进行分析。方法 采用聚合酶链反应对O157：H7菌株毒力基因谱进行检测，同时用脉冲凝胶电泳(PFGE)和随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对O157：H7菌株的同源性分析比较。结果 流行地区分离的O157：H7菌株，100％携带Hly、eaeA基因，95．35％携带SLT2基因，11．63％携带SLT1基因。脉冲凝胶电泳图谱表明流行地区分离的O157：H7菌株与日本分离的O157：H7菌株有明显差异，为不相关菌株；与国内标准菌株882364为近似型(相似，但不相同)。流行地区患者分离菌株与外环境家畜家禽粪便及昆虫肠道分离菌株的脉冲凝胶电泳图谱完全相同。结论 携带O157：H7菌株的家畜家禽可能是导致疫情发生的传染源。脉冲凝胶电泳方法用于O157：H7病原学分析，对流行病学研究有重要意义。随机扩增多态性DNA方法用于O157：H7病原学分析，技术简便、省时。     

PCR方法在出血性大肠杆菌O157:H7诊断中的应用

自1982年首次在美国引起出血性肠炎爆发以来,肠出血性大肠杆菌O157:H7(entero-hemorrhagic E.coli O157:H7,EHECO157:H7)已经成为世界性的重要的公共卫生和食品安全问题,曾在日本、美国、加拿大等国造成了暴发流行和大规模食物中毒事件.估计目前在美国每年可造成大约70000人感染.     

霍乱弧菌和大肠杆菌O157:H7检测芯片的制备

目的设计和制备快速检测霍乱弧菌和大肠杆菌O157：H7基因芯片。方法选择霍乱弧菌特异的编码外膜蛋白的ompW基因和毒素ctxA基因以及大肠杆菌O157：H7特异的编码菌体抗原rfbE、鞭毛抗原fliC和毒素SLT1、SLT2基因。设计引物和探针，并制备检测芯片，通过两次PCR扩增，制备荧光标记的靶序列，并与芯片进行杂交，检测霍乱弧菌和大肠杆菌O157：H7。结果所有霍乱弧菌和大肠杆菌O157：H7菌株在采用单一和多重PCR两种方法制备的荧光标记靶序列与芯片杂交，均在芯片相应探针处出现阳性信号。非霍乱弧菌和非O157：H7菌株杂交结果均为阴性。结论基因芯片可以快速检测霍乱弧菌的O157：H7。     

应用多重PCR方法检测大肠埃希菌O157：H8的初步研究

目的 研究一种快速、特异的检测大肠埃希菌（以下称大肠杆菌）O157：H7的复合PCR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157：H7志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ（SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ）和溶血素（Hly)基因的三对引物,在同一扩增体系中进行PCR,检测12株不同来源的O157：H7大肠杆菌及其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌15株。结果 除质粒缺失株（933）外,其余11株O157：H7大肠杆菌均在361bp处有溶血素基因产物出现;而12株O157：H8大肠杆菌扩增后的两条志贺样毒素基因产物存在差异,其中6株在210bp、484bp处出现两条相应产物,3株仅有210bp一条SLT－Ⅰ基因产物,另3株仅有484bp的SLT－Ⅱ基因产物。其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌的扩增结果均为阴性。结论 本复合PCR方法具有较高的特异性,可迅速、有效地将O157：H7大肠杆菌与其它常见致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌相鉴别,通过进一步研究有望应用于临床大肠杆菌O157：H7感染的辅助诊断。     

冷冻原肠中肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究

目的 为了研究进出境冷冻原肠携带肠出血性大肠杆菌O157：H7的情况。方法 本研究对2010-2011年进境或国产的35份冷冻原肠样品进行了检测,其中包括19份冷冻羊原肠和16份冷冻猪原肠。根据细菌的培养特性、生化鉴定和血清学鉴定,同时设立标准菌株作为对照。结果 结果表明2份原肠样品检出肠出血性大肠杆菌O157：H7,检出率为5.71%。结论 进境和国产原肠均有可能携带肠出血性大肠杆菌O157：H7,应该进一步加强监测和研究。