骨肉瘤中Survivin蛋白表达及其与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达的相关性

目的探讨Survivin蛋白在骨肉瘤中的表达及其与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达的相关性。方法采用免疫组化S—P法检测凋亡抑制基因Survivin在骨肉瘤、骨软骨瘤和正常骨组织中的表达及P-糖蛋白、bcl-2蛋白在骨肉瘤中的表达。结果Survivin蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率为63．15％,在骨软骨瘤和正常骨组织中未见表达;Survivin阳性表达与患者的年龄、性别及肿瘤部位无关,与Enneking分期及WHO组织学分型有相关性;P-糖蛋白和bcl-2蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率分别为47．36％和55．26％。在骨肉瘤中．Survivin的表达与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达密切相关。结论①Survivin在骨肉瘤中呈高表达,与临床耐药密切相关．有望成为骨肉瘤靶向治疗的一个新靶点。②Survivin与bcl-2蛋白表达密切相关．二者协同发挥抗凋亡效应。     

骨肉瘤中Survivin与Caspase-3的表达及其相关性研究

[目的]探讨Survivin、Caspase-3在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。[方法]采用免疫组化法检测骨肉瘤及正常骨组织中Survivin和Caspase-3的表达，运用TUNEL方法检测细胞的凋亡。[结果]在77％的骨肉瘤组织中Survivin阳性表达，显著高于正常组织；Caspase-3蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为65％和89％，差异有显著性；在骨肉瘤中，Survivin和Caspase-3的表达呈负相关；Survivin呈阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显低于Survivin呈阴性组（P〈0．01）；Caspase-3呈阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase-3呈阴性组（P〈0．01）。[结论]Survivin、Caspase-3参与了骨肉瘤的发展，Survivin可能通过抑制Caspase-3的活性从而发挥其抑制骨肉瘤细胞凋亡作用。     

Survivin基因干扰RNA对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

[目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建Survivin shRNA表达载体pSilence2．1-neo-Survivin，转染骨肉瘤细胞系MG-63，筛选稳定表达的克隆，倒置显微镜观察各组细胞形态学变化，RT-PCR、Weston-blot方法检测转染后Survivin mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。[结果]转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降，其抑制率分别为85．08％和81．14％；细胞增殖受到显著抑制，培养48h后与空白组比较，抑制率达63．4l％；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变，转染组凋亡率为24．54％。[结论]靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

凋亡抑制蛋白Survivin在骨肉瘤中的表达及其与PTEN、cyclinD1蛋白表达的关系

[目的]探讨Survivin基因的表达在骨肉瘤发生、发展中的作用及其与PTEN、cyclinD1蛋白表达的相互关系。[方法]应用免疫组化（SP）法检测40例骨肉瘤组织、20例骨软骨瘤组织中Survivin、PTEN、cyclinD1蛋白的表达情况以及Survivin与PTEN、cyclinD1蛋白两者之间的相关性。[结果]Survivin在骨肉瘤中的阳性率为62．5％（25／40），明显高于对照组骨软骨瘤10．0％（2／20）的阳性率（P〈0．01）。PTEN蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率为52．5％（21／40），而在骨软骨瘤中为95．0％（19／20），两者相比有显著差异（P〈0．01）。cyclinD1蛋白在骨肉瘤中的阳性率为80．0％（32／40），高于在骨软骨瘤中的45．0％（9／20），有统计学意义（P〈0．05）。Survivin和PTEN两者表达强度之间呈显著负相关（P〈0．01），而Survivin与cyclinD1表达呈正相关（P〈0．01）。[结论]Survivin在骨肉瘤组织中过表达与骨肉瘤的发生有关；PTEN在骨肉瘤组织中失表达，它可能下调Survivin表达，对骨肉瘤起抑制作用：Survivin和cyclinD1在骨肉瘤的发生发展中可能起协同作用。     

血清指标对骨肉瘤化疗预后判别价值

[目的]分析血清碱性磷酸酶(ALP)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)对骨肉瘤化疗后预后的预测价值。[方法] 2013年1月～2015年1月,110例骨肉瘤患者,均经新辅助化疗及手术治疗。其中100例患者5年以上随访资料完整,按临床结果将患者分为预后良好组和预后不良组。比较两组血清ALP、TSGF水平及其他资料。采用逻辑回归分析法分析骨肉瘤化疗后预后影响因素。绘制受试者工作曲线(ROC),分析血清ALP、TSGF对骨肉瘤化疗后预后的预测价值。[结果]与良好组比较,不良组Enneking分期高比率大,远处转移比率高,血清ALP、TSGF水平均升高(P0.05)。逻辑回归分析显示,Enneking分期高(OR=1.931,P=0.002)、有远处转移(OR=1.998,P=0.004)、血清ALP升高(OR=5.485,P0.001)、血清TSGF升高(OR=4.289,P0.001)是骨肉瘤化疗后预后不良的危险因素。ROC分析显示,血清ALP、TSGF预测骨肉瘤化疗后预后不良的最佳截断点分别为325.87 U/L、75.64 U/ml。血清ALP、TSGF单独及联合预测骨肉瘤化疗后预后不良的AUC分别为0.725、0.716、0.798。[结论]血清ALP、TSGF联合检测对骨肉瘤化疗后预后预测价值较高,可为临床该病治疗提供参考。     

黄芪对肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响

目的:评估黄芪对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响,探讨黄芪对血红素加氧酶调节作用的可能机制.方法:黄芪注射液作用于Bel/Fu肝癌化疗耐药细胞株,分别应用MTT、免疫细胞化学、流式细胞术、RT-PCR检测细胞株对化疗药物敏感性、P-糖蛋白表达量、P-糖蛋白功能、血红素加氧酶(HO-1)核酸水平表达量.结果:黄芪注射液作用于Bel/Fu细胞诱导24 h后,化疗药物半数抑制浓度显著降低;P-糖蛋白阳性表达明显减少,黄芪组罗丹明荧光曲线明显右移,细胞化疗药物外排功能降低;HO-1 mRNA表达显著减少.结论:黄芪注射液可增强肝癌耐药细胞株Bel/Fu的化疗敏感性,下调P-糖蛋白表达,降低P-糖蛋白药物外排功能,实现这种作用的同时伴随有HO-1 mRNA表达的减少.     

Survivin和caspase-3在骨肉瘤中的表达及意义

目的探讨骨肉瘤中Survivin和caspase-3的表达及其意义。方法应用免疫组化EnVision二步法检测95例骨肉瘤及45例良性骨肿瘤中Survivin及caspase-3的表达。结果 Survivin在骨肉瘤中表达的阳性率明显高于良性骨肿瘤,Survivin表达的阳性骨肉瘤患者在caspase-3的表达明显低于Survivin表达阴性骨肉瘤患者,在不同软组织浸润及不同Ennecking分期的比较中,两种蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论骨肉瘤中Survivin及caspase-3高表达,两者在骨肉瘤发展及判断预后中有重要价值。     

反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究

[目的]研究人骨肉瘤细胞MG63中反义RNA对Survivin表达的抑制作用。[方法]培养骨肉瘤细胞MG63，采用RT—PCR的方法克隆人Survivin基因编码区cDNA。构建Survivin的反义诱导表达载体。转染MG63细胞，G418筛选稳定转染的细胞系。稳定转染的细胞系，以ZnSO4 120μmol／L诱导，HE染色、Survivin免疫细胞化学染色透射电镜等形态学观察。绘制生长曲线。RT—PCR检测各组细胞Survivin的表达。Annexin V法检测细胞凋亡。[结果]RT—PCR从MG63细胞mRNA扩增了Survivin编码区cDNA，约420bp。构建了pMDNA3-anti—Survivin重组质粒。转染MG63细胞，G4181000μg/ml筛选4周后，建成稳定转染细胞系。通过ZnSO4 120μmol／L诱导，电子显微镜观察可见MG63／pMDNA3-anti—Survivin细胞出现凋亡。免疫细胞化学染色可见诱导后的MG63／pMDNA3-anti—Survivin Survivin蛋白表达明显降低。AnnexinV染色后发现pMDNA3-anti—Survivin细胞，在ZnSO4诱导48h后凋亡率达到11％，较对照组高出3倍。[结论]Survivin的反义RNA能够有效的抑制Survivin的表达，从而抑制肿瘤生长，并促进肿瘤细胞凋亡．     

应用蛋白质组学方法筛选人骨肉瘤多药耐药蛋白

多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的一个重要原因[1].大量研究表明[2,3],骨肉瘤多药耐药与P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)等异常表达有关,我们应用蛋白质组学方法筛选耐药细胞与亲本细胞中差异表达的蛋白.     

MTA1在化疗后骨肉瘤中的表达及其与预后的关系

[目的]研究化疗后骨肉瘤组织中残存肿瘤细胞中肿瘤转移相关基因1(metastasis associated 1,MTA1)的表达在骨肉瘤发生、发展中的作用及其生物学意义,探讨化疗后骨肉瘤中MTA1的表达与骨肉瘤患者预后之间的关系.[方法]采用免疫组织化学SP法,检测31例化疗后骨肉瘤组织中MTA1的表达.并应用统计学方法分析其与预后的关系.[结果]统计学分析显示化疗后MTA1的阳性表达率为54.84%,其表达与患者的性别、年龄、发病部位、发病-就诊时间及肿瘤的体积无相关性.通过对所有病人随访结果的对比分析,发现MTA1阳性表达的预后良好率为35.29%(6/17),明显低于阴性表达组(78.57%,11/17,P=0.016).[结论]MTA1表达阳性的患者预后差,它反映了化疗后残存骨肉瘤细胞侵袭、转移的生物学活性;检测MTA1的表达可作为判断骨肉瘤患者预后的参考指标.