CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的分选和提取

目的 分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T细胞并进行纯度和活性检测.方法 用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取大鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞纯度,台盼蓝染色计算细胞存活率.结果 免疫磁珠分选提取的CD4+CD25+调节性T细胞纯度在86% 以上,并且活性良好,活细胞百分率大于97%.结论 通过免疫磁珠分选能够提取高纯度高活性的CD4+CD25+调节性T细胞.     

牙周炎发生时外周血中CD4~+CD25~+T细胞表达的变化研究

目的:探讨CD4+CD25+Treg在牙周炎发生时的免疫调节作用。方法:选择35只成年SPF级Wistar大鼠,丝线结扎加高糖饮食建立大鼠牙周炎发生的动物模型,获得类似牙周炎自然病程的连续组织标本,病理切片确定病损,分别获取第4、8、12、16周的大鼠外周血,术前未结扎组对照。以流式细胞仪检测不同时段外周血中CD4+CD25+Treg的比例变化。结果:建立了Wistar大鼠牙周炎发生的动物模型,病理切片确定了牙周病损的存在。结果显示伴随牙周炎发生的牙槽骨的吸收逐渐增多。流式细胞仪结果显示结扎后第4、8、12、16周外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例为7.70%、9.12%、9.74%、10.31%,与术前比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:外周血中CD4+CD25+Treg自牙周炎发生早期逐渐升高,牙周炎发生发展规律一致,从而证实CD4+CD25+Treg细胞参与介导了牙周炎发生的免疫调控。     

应用自动磁性细胞分选器分选人CD_4~+CD_(25)~+调节T细胞

目的:建立应用自动磁性细胞分选器(autoMACS)分选人CD4+CD2+5免疫调节T细胞(Tregs)的方法。方法:应用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,应用autoMACS分选其中的CD4+CD2+5T细胞,流式细胞技术检测分选细胞的纯度。结果:分别从5.7×107及5.6×107外周血单个核细胞中分选出6.9×105及6.7×105个CD4+CD2+5T细胞,其纯度>98%。结论:应用autoMACS可高效分选出高纯度的CD4+CD25+T细胞,为深入研究其功能打下了基础。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在HBV宫内感染者血液中的表达及意义。方法:流式细胞技术检测157例乙肝大三阳但肝功能正常孕产妇外周血、其分娩新生儿脐血、HBV宫内感染婴幼儿外周血中CD4+CD25+Treg表达水平。结果:HBV宫内感染产妇外周血及新生儿脐血中CD4+CD25+Treg的百分数较未感染组高(P<0.05);HBV持续感染者CD4+CD25+Treg比例较感染转阴组高(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg抑制体内HBV清除,宫内感染与其表达上调有关。     

寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平的表达

目的 研究寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg细胞)水平的表达,探讨CD4+CD25+Treg细胞在寻常型银屑病发病机制中的作用.方法 对寻常型银屑病患者分期并进行Pasi评分,采用流式细胞术检测银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达.结果 银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞占T细胞淋巴细胞的比例表达,寻常型明显低于正常对照组(P<0.05);其中进行期明显低于静止期和正常对照组(P<0.05);CD4+CD25+Treg细胞占T淋巴细胞的比例与Pasi及病程评分无相关关系(P>0.05).结论 寻常型银屑病的发病与外周血CD4+CD25+Treg细胞数目的减少有关,CD4+CD25+Treg细胞占T淋巴细胞的比例与Pasi评分及病程无相关关系.     

CD4~+ D25~+调节性T细胞在晚期食管癌中的表达及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)在食管癌中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术分析60例食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,与20例健康对照组比较。结果:食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数量增加(15.9±4.1)%,表达高于正常人(5.91±3.7)%(P<0.001)。食管癌患者外周血中Treg细胞数量与患者的病理类型无关(P>0.05),但与淋巴结转移和组织学分化程度有关(P<0.01)。结论:Treg细胞在食管癌患者中比率明显升高,是患者免疫功能紊乱的一个证据。     

LAP~+CD4~+T细胞在胃癌外周血中的分布情况及临床意义

目的 检测胃癌患者外周血中LAP+CD4+T 细胞和CD4+CD25+ Treg 细胞的分布比例,初步研究LAP+CD4+ T细胞与病理因素的相关性及在胃癌发生、进展中的作用。方法 收集2018 年1 月～2019 年6 月我院胃肠疝外科收治的50 例胃癌患者术前及术后临床病理资料,收集术前患者的外周血标本,收集同期50 例健康志愿者外周血作为对照组。流式细胞技术检测LAP+CD4+T 细胞和CD4+CD25+ Treg 的分布比例,比较外周血中胃癌患者和健康志愿者LAP+CD4+T 细胞的分布比例差异;Pearson 法分析LAP+CD4+T 细胞与临床病理因素及CD4+CD25+Treg 细胞的相关性。结果 外周血LAP+CD4+T 细胞占CD4+T 细胞的比例,胃癌患者为[7.58（6.23,8.22）%]高于健康志愿者的[1.76（0.79,2.35）%]（P＜0.001）;Pearson 相关性分析结果显示,外周血中LAP+CD4+T 细胞与CD4+CD25+Treg 细胞分布比例呈正相关（r=0.629,P＜0.001）;肿瘤TNM 分期越晚,LAP+CD4+T 细胞占CD4+T 细胞比例越高（P＜0.001）;有远处转移患者LAP+CD4+T 细胞占CD4+T 细胞比例高于无转移者（P＜0.001）。结论LAP+CD4+T 细胞在胃癌患者外周血中比例升高,可能参与了胃癌的发生、进展,起到促进肿瘤生长、转移的作用。     

大鼠CD4+CD25+T细胞MACS双阳性分选方法的建立

目的:探索大鼠CD4 CD25 T调节细胞快速高效分选的方法。方法:采用免疫磁珠两步法分离大鼠淋巴组织和外周血内的CD4 CD25 调节性T细胞,首先采用Anti-ratCD4-APC和Anti-APC MultiSort MicroBeads阳性分选出CD4 细胞,再用Anti-rat CD25-PE和Anti-PE MicroBead阳性分选获得CD4 CD25 T细胞。分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度和细胞活性。结果:双阳性分选后获得的CD4 CD25 T细胞纯度为92.2%±1.1%(87%～95%),细胞存活率93.8%±3.4%(93%～95%)。结论:采用MACS系统双阳性分选可以高效、快速的获得理想纯度的大鼠CD4 CD25 调节性T细胞。     

CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法:采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率差异。结果:慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分别为(5.14±1.03)%、(9.86±1.72)%、(7.93±1.67)%及(7.06±1.61)%,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组(P<0.01)。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。     

人天然CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定

目的：建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩 增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法：免疫磁珠分离(MACS)方法从 人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选 的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应 (mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的 CD4+CD25–T细胞增殖的抑制作用。结果：扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增 至1.02×109±0.20×109),活性>97%。扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征：CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺三阳细 胞约占(94.22±2.12)%,与新鲜分选细胞相似。扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25–T细胞的增殖均有明显的抑 制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P<0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4⁺CD25^–T细胞的抑制率 无明显差异(P>0.05)。结论：创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫 抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。     

慢性粒细胞白血病患者PBMCs中CD4+CD25+细胞体外增殖及对CD4+CD25-细胞增殖的影响

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血单个核细胞(PBMCs)来源的CD4 CD25 细胞体外增殖及对CD4 CD25-细胞增殖的影响.方法 以免疫磁性分离方法(MACS)分选出CML患者外周单个核细胞中的CD4 CD25 及CD4 CD25-细胞后,用流式细胞仪分析细胞的纯度及活力;再以小鼠抗人CD3单抗、小鼠抗人CD28单抗及rh IL-2作为刺激因子,CD4 CD25 细胞与CD4 CD25-细胞共培养,观察CD4 CD25 细胞对CD4 D25-细胞增殖的抑制效应.结果 (1)分选后健康对照组及CML患者PBMC中CD4 CD25 细胞纯度分别为(84.93±2.55)%、(86.32±2.40)%,两者相比,无显著差异(P＞0.05);(2)经MACS分选后正常对照组与CML患者CD4 CD25 细胞活力分别为(98.12±0.68)%、(97.33±0.78)%,两者相比,无显著差异(P＞0.05);(3)无论是健康对照还是CML患者的CD4 CD25 细胞均具有明显抑制效应性细胞如CD4 CD25-细胞的增殖,随着CD4 CD25 细胞数的增加,这种抑制增殖的能力也相应增加,当CD4 CD25 T:CD4 CD25-T为1:1时,抑制率最大.结论 MACS分选法能够分选出高纯度及高活力的CD4 CD25 细胞,分选后CD4 CD25 细胞在体外均能抑制CD4 CD25-细胞增殖,且这种抑制效应呈一定效靶比关系.     

外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞在大鼠肾移植中的动态变化及应用研究

目的监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化,研究其在预测排斥反应和免疫耐受中的价值。方法流式细胞术监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化。结果CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植急性排斥反应过程中明显低于同系对照组,而CsA组CD4+CD25+调节性T细胞明显高于同系对照组。结论 CD4+CD25+调节性T细胞在抑制肾脏移植排斥反应中发挥重要作用,动态监测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的水平可预测和判断急性排斥反应的发生,了解肾脏移植后受体和移植肾之间的免疫反应程度或耐受状态。     

中国猕猴CD4~+ CD25~+调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应

目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记。将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28单克隆抗体刺激,体外培养7d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应。结果:PPD不仅能引起CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2T淋巴细胞也发生扩增。Tregs不仅能抑制CD3/CD28抗体诱导的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原特异性扩增。结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肝移植免疫耐受

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞因其独特的免疫抑制功能而备受关注,在诱导和维持移植免疫耐受方面具有重要的作用。肝脏具有移植免疫特性．但肝移植术后如何避免排斥反应、诱导免疫耐受、提高存活率这一问题仍尚未解决。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肝移植免疫耐受中具有重要的作用。本文即从CD4^＋CD25^＋调节性T细胞入手,对其在肝移植排斥反应与免疫耐受中的作用加以综述。     

脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能特征的比较

目的分离成人外周血、脐血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,并检测其功能,以了解脐血CD4^＋CD25^＋T细胞的特性。方法应用免疫磁珠分选法从健康成人外周血、脐血淋巴细胞中分离纯化CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞。应用流式细胞术检测分离纯度,胎盘蓝染色检测细胞存活率;RT-PCR技术检测CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞中Foxp3的mRNA的表达;体外增殖实验检测其对CD4＋CD25-T细胞的免疫抑制作用。结果 MACS分离的CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4＋CD25-T细胞纯度达（92.7±1.6）%、（90.3±1.2）%,细胞存活率达（95.3±2.1）%;体外经抗CD3、CD28单克隆抗体刺激培养的脐血及成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞同时得到扩增,而且高表达Foxp3;CD4^＋CD25^＋T细胞能有效的抑制效应T细胞的增殖,当效靶比为1︰1时,其抑制效应T细胞的作用最强,成人外周血抑制率为（81.36±1.61）%、脐血抑制率为（90.74±2.43）%。结论脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,与成人外周血相比,培养后的脐血CD4^＋CD25^＋T细胞比成人外周血有更强的免疫抑制功能。