菟丝子对人精子顶体和超微结构氧化损伤的干预作用

目的:观察菟丝子对活性氧所致人精子顶体和超微结构过氧化损伤的干预作用,探讨菟丝子治疗男性不育弱精子症的作用机制。方法:采用Percoll梯度离心法选择具有正常生理功能的精子作为正常精子模型,应用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生活性氧(ROS),在有氧环境下,ROS、不同含量的菟丝子与精子共同孵育后,计算精子顶体完整率,透射电镜观察精子顶体和超微结构,并与已知的抗氧化剂V itC对照。结果:终含量0.125g/mL和0.5g/mL的菟丝子对精子顶体和超微结构的保护作用与维生素C(终含量0.25mg/mL)无明显差别(均P>0.001),终含量0.25g/mL的菟丝子的作用明显优于维生素C(P<0.001)。结论:适宜含量的菟丝子对ROS造成的精子膜、顶体结构和精子线粒体功能损伤具有明显的干预作用。     

菟丝子水提物对人精子顶体和超微结构的保护作用

目的:观察菟丝子水提物对活性氧(ROS)所致人精子顶体和超微结构的氧化损伤的保护作用,探讨菟丝子治疗男性不育弱精子症的作用机制。方法:采用Percoll梯度离心法优选具有正常生理功能的精子作为正常精子模型,将精子悬液分为正常组,模型组,阳性药对照组(维生素C组)和菟丝子小、中、大剂量组。应用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生活性氧,在有氧环境下,ROS、不同含量(0.125,0.25,0.5 g.mL^-1)的菟丝子水提物与精子悬液共同孵育后,计算精子顶体完整率,透射电镜观察精子顶体和超微结构,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果:终含量0.125,0.5 g.mL^-1的菟丝子水提物对精子顶体和超微结构的保护作用与维生素C(0.25 mg.mL^-1)无明显差别(P均>0.05),0.25 g.mL^-1的菟丝子水提物的作用明显优于维生素C(P<0.001)。结论:适宜含量的菟丝子水提物对ROS造成的精子膜、顶体结构和精子线粒体功能损伤具有明显的保护作用。     

巴戟天水提取物对人精子顶体氧化损伤的保护作用

目的：观察巴戟天水提取物对人精子顶体结构和功能氧化损伤的保护作用,探讨巴戟天治疗男性不育症的作用机制。方法：采用Percoll梯度离心法选择具有正常生理功能的精子作为精子模型,应用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶（HX-XO）体系产生活性氧（ROS）,在有氧环境下,ROS、不同剂量的巴戟天水提取物与精子悬液共同孵育后,检测精子顶体完整率,透射电镜观察精子顶体和超微结构,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果：在ROS作用下,精子的顶体受损,顶体完整率明显下降,与正常者相比差异极显著（P〈0.001）,巴戟天水提取物小、中、大剂量组在相同条件下均可明显减轻ROS对精子顶体所造成的氧化损伤程度,与VitC相比较,0.25和0.5g/mL巴戟天水提取物的作用更明显（P〈0.05,P〈0.01）。结论：适宜剂量的巴戟天水提取物对ROS所致人精子过氧化损伤具有明显干预作用,对精子顶体结构和功能具有保护作用。     

菟丝子水提物对人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用

 目的观察菟丝子水提物对活性氧(ROS)所致人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用及其对精子膜功能的保护作用。探讨菟丝子治疗男性不育弱精子症的作用机制。方法采用Percoll梯度离心法优选具有正常生理功能的精子作为正常精子模型,将精子悬液分为正常组、模型组、阳性药对照组(维生素C组)和菟丝子水提物小、中、大剂量组,应用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生ROS,在有氧环境下,不同剂量(每1 mL含0.125,0.25和0.5 g生药)的菟丝子水提物与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化损伤程度,通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果菟丝子水提物小、中、大剂量组(每1 mL含0.125,0.25和0.5 g生药)在相同的条件下均可提高精子悬液超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量,对ROS所致精子膜的损伤均具有不同程度的干预作用,对精子膜功能具有一定的保护作用。其中每1 mL含0.125,0.5 g生药的菟丝子水提物组与维生素C组(0.25 g·L^-1)无明显差别(均P>0.05),0.25 g生药的菟丝子水提物组明显优于维生素C组(P<0.001)。结论适量的菟丝子水提物能显著提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,通过其抗氧化作用干预ROS对精子膜的脂质过氧化反应,对精子膜结构和功能具有明显的保护作用,这可能是菟丝子治疗男性不育弱精子症的作用机制之一。     

高糖培养ECV304内ROS含量变化及丹瓜方影响的研究

目的：探讨高糖培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）内ROS含量的变化及丹瓜方的影响。方法以标准的M199培养基（A组,含糖5．55mmol／L）、高糖培养基（B组,含糖16．67mmol／L）、不同浓度的丹瓜方培养基（在B组基础上：C组含1／150丹瓜方,D组含1／300,E组含1／600）、及1／300丹瓜方培养基（F组,在A组含1／300丹瓜方）,培养ECV30472小时,以流式细胞仪（flow eytometry,FCM）测定培养细胞内活性氧簇（ROS）含量。结果B组细胞内ROS含量较A组升高（319．87vs41．78）具有显著统计学意义（P〈0．001）,D组及E组细胞内ROS含量均较B组降低（197．13or189．70vs319．87）,统计学意义也显著（P〈0．001）;F组细胞内ROS含量较A组降低（36．26vs41．78）,但尚未达到统计学意义。C组细胞内ROS较B升得更高（581．82vs319．87）,统计学意义显著（P〈0．001）。结论：血管内皮细胞经高糖培养可显著升高其胞内ROS含量;适当浓度丹瓜方对高糖培养血管内皮细胞内ROS含量具有显著降低作用。     

肾康注射液对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害的研究

目的：探讨肾康注射液（SKI）对马兜铃酸（AA）导致肾小管上皮细胞损伤的影响。方法：以90％DMEM培养液加10％胎牛血清培养人肾小管上皮细胞系（HK-2）,加入不同浓度的SKI（终浓度分别为4、6、8mg／mL）和AA（终浓度为10、20、40μg／mL）培养48h。采用MTT法观察HK-2细胞活性;根据MTT法检测细胞活性的结果,选择SKI最佳干预浓度8mg／mL和AA致细胞明显凋亡浓度20μg／mL,将实验分为3组,①对照组：培养液不加马兜铃酸;②AA干预组：在培养液中加入AA（终浓度为20μg／mL）;（3）SKI治疗组：在培养液中加入AA（终浓度为20μg／mL）和SKI（终浓度为8ing／mL）。用透射电镜观察3组细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;分别采用实时定量荧光PCR及Western—blot技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA及蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,AA干预组细胞结构发生改变,治疗组大部分细胞结构基本正常,部分细胞结构改变明显。AA浓度超过10μg／mL时,HK-2细胞的活性显著抑制。分别以不同浓度4,6,8mg／mL的SKI和AA（20μg／mL）处理HK-2细胞后,则细胞活性明显增加,而且随着SKI浓度的增加其作用愈趋明显（P〈0．05）。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加（P〈0．05）,SKI治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3mRNA及蛋白的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3mRNA及蛋白的表达较AA组降低。结论：肾康注射液通过降低凋亡蛋白Caspase-3mRNA及蛋白的表达抑制HK-2细胞的凋亡,明显提高HK-2细胞抵抗AA致细胞损伤的能力,起到保护HK-2细胞的作用。该途径可能为肾康注射液抑制HK-2细胞凋亡的机制之一。     

五子衍宗丸含药血清对活性氧致大鼠精子鞭毛超微结构损伤的保护作用

目的：观察五子衍宗丸含药血清对活性氧致大鼠精子鞭毛超微结构损伤的保护作用。方法：采用次黄嘌呤（0.6mM）-黄嘌呤氧化酶（0.05U/mL）活性氧发生体系,收集大鼠附睾精子,体外与活性氧及五子衍宗丸含药血清（低、中、高剂量）共孵育15min和60min,采用环境扫描电镜观察精子鞭毛超微结构的变化。结果：与活性氧组共孵育60min后,部分精子鞭毛质膜连续性中断,部分膜脱落,鞭毛暴露。各浓度五子衍宗丸含药血清（低、中、高剂量组）组精子鞭毛质膜完整。结论：五子衍宗丸含药血清体外对活性氧造成的精子鞭毛质膜损伤具有一定的保护作用。     

巴戟天水提物对人精子膜功能氧化损伤的保护作用

目的：观察巴戟天水提物对人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用,探讨巴戟天治疗弱精子症男性不育的作用机制。方法：采用Percoll梯度离心法优选具有正常功能的精子悬液分为正常组,模型组,阳性药对照组（维生素C组）和巴戟天水提物小、中、大剂量组,应用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶（HX-XO）体系产生活性氧（ROS）,在有氧环境下,ROS、不同剂量（0.125,0.25,0.5 g·mL^-1）的巴戟天水提物与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化损伤程度,通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果：巴戟天水提物小、中、大剂量组（0.125,0.25,0.5 g·mL^-1）在相同的条件下均可提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,对ROS所致精子膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用,对精子膜功能具有一定的保护作用。其中0.125 g·mL^-1的巴戟天水提物组与维生素C组（0.25 mg·mL^-1）无明显差别,0.25,0.5 g·mL^-1的巴戟天水提物组明显优于维生素C组（P＜0.01,P＜0.001）。且巴戟天水提物的作用呈剂量依赖性,大剂量（0.5 g·mL^-1）时对精子膜功能的保护作用最显著。结论：巴戟天水提物对人精子膜的脂质过氧化损伤具有明显的干预作用,对精子膜结构和功能具有明显的保护作用。     

当归注射液对血管紧张素Ⅱ致乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的：通过建立心肌细胞肥大模型，观察当归注射液对心肌细胞肥大的影响。方法：分离培养乳鼠心肌细胞，用血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ）诱导心肌细胞肥大，测定心肌细胞直径、蛋白含量，评价当归注射液对心肌细胞肥大的影响。结果：AngⅡ能够显著增加心肌细胞的直径和蛋白含量（P〈0．01），当归注射液对这一效应有逆转作用（P〈0．05）。结论：血管紧张素（终浓度为10^-4mmol／L）有明显促心肌肥大的作用，当归注射液（终浓度为10^-3g／mL）对血管紧张素诱导的心肌细胞肥大有一定的抑制作用。     

当归注射液对血管紧张素Ⅱ致乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的：通过建立心肌细胞肥大模型，观察当归注射液对心肌细胞肥大的影响。方法：分离培养乳鼠心肌细胞，用血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ）诱导心肌细胞肥大，测定心肌细胞直径、蛋白含量，评价当归注射液对心肌细胞肥大的影响。结果：AnglI能够显著增加心肌细胞的直径和蛋白含量（P〈0．01），当归注射液对这一效应有逆转作用（P〈0．05）。结论：血管紧张（终浓度为10^-7mmol／L）有明显促心肌肥大的作用，当归注射液（终浓唐为10^-3g/mL）时血管贤张素诱导的心肌细胞肥大有一定的抑制作用。     

肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究

目的 观察肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子膜结构和氧化损伤的干预作用,探讨肉苁蓉苯乙醇苷治疗弱精子症男性不育的作用机制.方法 取大鼠精子制备精子悬液,并分为正常组,药物空白组,模型组,阳性药对照组(维生素C组)和肉苁蓉苯乙醇苷提物小、中、大剂量组,应用FeSO4/H2O2 体系产生活性氧(ROS) ,在有氧环境下, 不同剂量(0.025, 0.25, 0.5 g/ml生药量)的肉苁蓉苯乙醇苷与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化损伤程度,通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能,并与已知的抗氧化剂维生素C对照.结果 肉苁蓉苯乙醇苷小、中、大剂量组(0.025, 0.25, 0.5 g·ml- 1)在相同的条件下均可提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,对精子膜功能具有一定的保护作用.其中0.25, 0.5 g·ml- 1的肉苁蓉苯乙醇苷组明显优于维生素C组(P＜ 0.01或P＜ 0.001) .结论 肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子膜的脂质过氧化损伤具有明显的干预作用,对精子膜结构和功能具有明显的保护作用.     

甲基莲心碱对LPC诱导内皮细胞损伤的保护作用及与ADMA的关系

目的：观察甲基莲心碱对溶血性磷脂酰胆碱（1ysophosphatidylcholine，LPC）诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其与非对称性二甲基精氨酸（asymmetricdimethylarginine，ADMA）的关系。方法：10mg&#183;L^-1的LPC孵育人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12）24h或0．1，1．0，10．0μmol&#183;L^-1甲基莲心碱预处理HUVEC-12细胞1h，再予LPC孵育细胞24h，收集细胞上清液测定-氧化氮（NO）、丙二醛（MDA），ADMA含量和收集细胞测定细胞内活性氧（ROS）水平。结果：LPC孵育HUVEC-12细胞24h后细胞上清液中MDA，ADMA含量及细胞内ROS水平显著性增加（P〈0．05），细胞上清液中N0含量显著性降低（P〈0．05）；0．1，1．0，10．0μmol&#183;L^-1的甲基莲心碱预处理组ROS水平，MDA，ADMA含量显著降低，NO含量显著性升高（P〈0．05）。结论：甲基莲心碱对LPC诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用，该作用可能与其降低ADMA水平有关。     

口服热休克蛋白60对动脉粥样硬化大鼠血清基质金属蛋白酶-9的影响

目的研究口服热休克蛋白60（HSP60）对动脉粥样硬化（AS）大鼠血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）含量的影响。方法40只4周龄健康雄性SD大鼠,体重100g±10g。随机分为4组：健康对照组（C组）,动脉粥样硬化未干预组（AS组）,造AS模型前口服HSP60组（H1组）,造模后口服HSP60组（H2纽）,每组10只。采用高脂饲料造AS模型,于大鼠180日龄时采血后处死,ELISA法检测各组血清中MMP-9含量。结果C组、AS组、H1组、H2组大鼠MMP-9含量分别为：0．46μg／mL±0．19μg／mL,3·90μg／mL±O．75μg／mL,0．93μg／mL±0．23μg／mL,1．94μg／mL±0．73μg／mL。结论动脉粥样硬化大鼠血清MMP-9含量较正常对照组增强,口服HSP60能降低血清MMP-9含量,对维持纤维斑块稳定性有一定作用,且越早口服HSP60效果越好。     

活性氧参与益母草水苏碱抗AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

目的利用新生大鼠心肌细胞,观察益母草水苏碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大和活性氧（ROS）含量的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞,利用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响（细胞数目、蛋白以及DNA含量）,同时用H2DCFDA荧光探针标记、流式细胞仪检测ROS含量。结果①AngⅡ（10^-6mol／L）使心肌细胞蛋白含量明显增高（P〈0．05）,对细胞数目和DNA含量无影响（P〉0．05）;②10^-7mol／L～10^-4mol／L浓度的益母草水苏碱呈剂量依赖性关系对抗AngⅡ导致的蛋白含量的增高（P〈0．05）;③AngⅡ可诱导心肌细胞内ROS含量增加,加入益母草水苏碱抑制了AngⅡ的这一作用。结论益母草水苏碱可抑制AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大,抑制ROS含量增加可能是其作用机制之一。     

基于氧化及Caspase-3凋亡探讨益肾种子方防治大鼠睾丸损伤机制研究

目的 探讨益肾种子方通过抗氧化及其诱导的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3凋亡途径防治奥硝唑所致的大鼠睾丸损伤的作用机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为5组，空白组、模型组、益肾种子方低、中、高剂量组，每组6只。除空白组外，均采用奥硝唑800 mg/（kg·d）灌胃制造睾丸损伤模型。中药组在造模的同时，分别予益肾种子方低、中、高剂量灌胃[3.37、6.93、13.86 g/（kg·d），每天1次]，连续灌胃28天。干预后取材HE染色观察睾丸及附睾结构变化、测量睾丸组织中活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）含量；免疫组织化学染色分析睾丸组织Caspase-3表达。结果 与空白组比较，模型组睾丸组织生精细胞不同程度损伤、减少，附睾组织有不同程度破坏和精子的减少，睾丸组织中ROS、MDA含量升高，SOD、CAT含量降低（P<0.01），免疫组化显示Caspase-3表达增多。与模型组比较，益肾种子方干预后睾丸生精细胞完整性有所恢复，Caspase-3明显减少；益肾种子方中剂量组ROS、MDA含量降低（P<0.0...     

桂枝汤主要成分对PGE2刺激的胚胎大鼠下丘脑神经cAMP-PKA的影响

目的：cAMP-PKA（环磷酸腺苷-蛋白激酶A）是细胞内非常重要的信号转导途径。本实验研究了桂枝汤四个主要组成成分。桂皮酸、桂皮醛、芍药苷及甘草次酸，不同组合对PGE2（前列腺素E2）刺激的胚胎大鼠下丘脑神经细胞内cAMP-PKA水平的影响。方法：用放免法测定不同组合成分作用的细胞cAMP含量和PKA活性。结果：各成分作用时，桂皮酸（0．625μg／mL）、桂皮醛（10、0．625μg／mL）、芍药苷（0．625μg／mL）和甘草次酸（10μg／mL）对细胞cAMP含量或PKA活性有显著的降低作用；在27组不同成分的组合中，有19组对细胞cAMP含量、16组对细胞PKA活性有显著的降低作用。结论：桂皮酸、桂皮醛、芍药苷和甘草次酸的不同浓度组合可能与桂枝汤体温双向调节作用的物质基础有关，其作用可能与调节cAMP-PKA通路有一定的关系。     

疱疹酊中儿茶素的含量测定

目的测定疱疹酊中儿茶素含量。方法采用高效液相色谱法,色谱条件：Zorbax SB—C18（4．6×250mm 50μm）柱;流动相：甲醇-1％冰醋酸（15：85）,流速：0．9mL／min,波长：278nm。结果儿茶素含量线性范围0．064μg-0．640μg（r=0．9998）,平均回收率和RSD分别为99．71％和1．13％,3批制剂中儿茶素含量为50．21μg／mL．48．5μg／mL．49．3μg／mL．结论本测定方法简便、准确．可用于疱疹酊剂中儿茶素含量测定．     

姜氏抗癌散Ⅲ号对裸鼠原位人胃癌MKN45模型抗癌作用的实验研究

目的：研究姜氏抗癌散Ⅲ号的扶正祛邪，清热解毒，攻下祛症，活血化瘀，通络祛积法，抑制肿瘤作用和其对血液系统和脾、对鼠体的影响。方法：将40只裸鼠原位移植人胃癌MKN45瘤株（中国科学院上海动物实验提供的裸鼠分成4组）。第1组：对照组10只；第2组：5-Fu阳性对照组；第3组：姜氏抗癌散Ⅲ号（KWⅢ号）20mL／Kg；第4组：姜氏抗癌散Ⅲ号（KWⅢ／号）25mL／Kg。观察抑制肿瘤作用体重变化。结果：人胃癌MKN45：①KWⅢ号20mL/kg组、KWⅢ号25mL/kg组、5-Fu抑瘤率分别为36．8％、64．8％、61．6％；②31天以后3组平均始终体重分别为（16．5g／23．71g）、（16．8g／23．81g）、（16．6g／20．72g）和对照组（16．8／24．10）。结论：继续30天服用KWⅢ25mL／kg中药组对裸鼠原位人胃癌MKN45组有非常明显的抑制率。而且中药组在增加体重上没有化疗组样明显下降，但化疗组比别的组体重下降15％以上，其说明5-Fu化疗对鼠体的不良影响明显。     

五子衍宗丸对糖尿病性白内障模型小鼠氧化损伤影响的研究

目的：研究中药复方“五子衍宗丸”对糖尿病性白内障小鼠氧化损伤的影响。方法：小鼠60只随机分为5组。空白组（A组），模型组（B组），维生素C治疗组（C组），中药预防组（D组），中药治疗组（E组）。B、C、D、E4组按20mL／kg腹腔注射10％D-半乳糖溶液20d造模，空白组注射相应剂量的生理盐水，D组以1．875g／kg五子衍宗丸水溶剂灌胃，1次／d。造模结束后，C组以维生素C水溶液灌胃治疗，E组用五子衍宗丸水溶剂灌胃治疗，测定晶状体和血清中MDA含量，SOD和GSH-Px的活性。结果：五子衍宗丸可提高红细胞超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性（P〈0．05或P〈0．01），降低丙二醛（MDA）的含量（P〈0．01），能保持小鼠透明晶状体的百分率达40％。结论：五子衍宗丸是通过对抗D-半乳糖所致的氧化损伤，延缓糖尿病性白内障病变发展的进程。     

人参皂苷Rb1对体外条件下小鼠骨髓间充质干细胞和粒-巨噬系祖细胞增殖的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1在体外培养条件下对小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）生长的影响。方法：设不同终浓度人参皂苷Rb1的细胞培养体系与对照，检测MSC集落生成率，M竹比色法测定MSC集落培养体系细胞的活力。结果：在培养体系中人参皂苷Rb1浓度为10μg／mL时，MSC集落产率和MTT吸光值与对照组无明显差异（P〉0．05）；25～100p．g／mL的范围内，MSC集落培养体系细胞集落产率和MTT吸光值显著高于对照组（P〈0．05），其中浓度为50μ/mL时效应最明显（P〈0．01）；在200μg/mL时，相应检测指标减低，但并未显示抑制作用（P〉0．05）。结论：人参皂苷Rb1在一定浓度范围内对体外培养条件下的小鼠骨髓MSC具有生长促进作用，但在高浓度时，其促进作用反而减弱。