重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的影响

目的　了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对实验性肝纤维化大鼠肝组织金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP1)基因表达的影响。方法　我们建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型 ,在造模的同时给予不同剂量的hALR。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定TIMP1的基因表达水平。结果　在两种模型中大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平在模型形成过程中逐渐升高 ;低剂量hALR组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平与模型组及阴性对照组差异无显著意义 ;高剂量hALR组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平 (四氯化碳模型第 2、4、6、8周分别为 0 6 3± 0 10、1 18± 0 2 0、1 89± 0 30、2 6 3± 0 33;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 2 33± 0 36、4 0 2± 0 5 3)均明显低于模型组 (四氯化碳模型第 2、4、6、8周分别为 0 99± 0 14、2 0 3± 0 30、2 99± 0 4 3、4 13± 0 4 4 ;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 4 13± 0 6 0、5 99± 0 83)及阴性对照组。结论　大剂量hALR可能有抑制实验性肝纤维化大鼠肝组织TIMP1基因表达的作用     

银杏叶提取物对实验性肝纤维化形成和逆转中TIMP-2表达的影响

目的　研究银杏叶提取物对大鼠肝纤维化形成和逆转的影响及其可能的机制。方法　应用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型 ,同时 /造模完成后给予银杏叶提取物干预肝纤维化的发生和逆转 ,应用H&E、Masson和Gordon Sweet染色观察肝组织病理纤维化分级 ,生化法检测肝功能指标 ,RT PCR法测定肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子 2 (TIMP 2 )表达 ,免疫组化法检测肝组织中αSMA表达。结果　给予银杏叶提取物可以显著降低大鼠肝纤维化程度 (P <0 .0 5 )和促进肝纤维化的逆转 (P <0 .0 5 ) ,改善肝功能 (P <0 .0 5 ) ,降低肝纤维化形成和恢复过程中肝组织TIMP 2的表达 (P <0 .0 5 ) ,使αSMA阳性细胞数减少 (P <0 .0 5 )。结论　银杏叶提取物可有效预防大鼠CCl4肝纤维化的形成并促进肝纤维化的逆转 ,可能与银杏叶提取物抗抑制TIMP 2表达、抑制肝脏星状细胞活化 /促进活化星状细胞凋亡有关。     

荣肝化瘀解毒汤干预大鼠胆汁淤积性肝纤维化的实验研究

目的:研究养肝化瘀利湿法有效干预大鼠胆汁淤积性肝纤维化的作用机制。方法:胆管结扎的方法制备大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,造模一周后随机分为模型组和药物干预组,药物干预经口灌胃分别给予荣肝化瘀解毒汤和小柴胡汤,模型组给予等量生理盐水,用药4周后杀鼠取材,观测内容包括肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,组织病理学、免疫组织化学观测IV型胶原(ColIV)、层粘蛋白(LM)和增殖性细胞核抗原(PCNA)。结果:(1)荣肝化瘀解毒汤显著改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能(P<0·05),降低肝组织Hyp含量(P<0·05);肝组织纤维化程度计分评定结果显示,荣肝化瘀解毒汤组肝组织纤维化程度显著减轻(P<0·05),而小柴胡汤组无显著性变化(P>0·05)。(2)模型组大鼠BECs增殖非常显著,肝实质细胞比例显著减少,其肝组织PCNA阳性BECs数显著增多(P<0·001),荣肝化瘀解毒汤组大鼠肝组织PCNA阳性BECs数显著减少(P<0·05),小柴胡汤组无显著性变化(P>0·05)。(3)模型组大鼠增生胆管周围的LM表达显著增加,肝窦壁ColⅣ表达未见明显变化,但强烈表达于增殖的BECs周围的基底膜上;图象分析显示荣肝化瘀解毒汤显著减少LM和ColIV的阳性表达(P<0·05)。结论:胆管上皮细胞增殖在胆管结扎大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中起重要作用,荣肝化瘀解毒汤抑制胆管上皮细胞增殖,抑制增殖的胆管上皮细胞基底膜上细胞外基质的沉积,是其有效干预胆汁淤积性肝纤维化的重要机制之一。     

小柴胡汤对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达干预研究

目的:研究肝纤维化模型大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化情况,探讨不同剂量小柴胡汤对实验性模型大鼠肝纤维化程度的影响。方法:肉眼观察、常规HE染色法和免疫组化染色法观察小柴胡汤对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响。结果:6、12周肝纤维化模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与正常对照组比较显著增加(P<0.01);12周肝纤维化模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量较6周肝纤维化模型组显著增加(P<0.05)。小柴胡汤治疗组与同期肝纤维化模型组相比,肝纤维化程度显著减轻(P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(P<0.05)。不同剂量小柴胡汤组间Ⅰ、Ⅲ型胶原含量比较无显著性差异(P>0.05)。结论:肝纤维化发生、发展过程中,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量显著增加,小柴胡汤能减轻模型大鼠肝纤维化程度,下调Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。     

老鼠簕对四氯化碳致肝纤维化大鼠Toll样受体4表达的影响

目的研究老鼠簕对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组。除空白对照组外,其余4组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组分别于4周后给予相应的药物,空白对照组和模型对照组给予等容量的生理盐水,每日1次。8周后处死大鼠。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TLR4 mRNA的表达。结果 RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,模型对照组TLR4 mRNA表达增强(P<0.01);老鼠簕乙醇提取物干预组(1.0、2.0 g.kg-1)较模型对照组TLR4 mRNA表达减弱(P<0.05)。结论老鼠簕能够抑制肝纤维化大鼠肝组织TLR4的表达。     

大黄素对肝纤维化大鼠肝脏组织中Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响

目的观察大黄素对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响。方法 50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(n=10)、CCl4组(n=20)和大黄素+CCl4组(n=20),共3组。采用40%CCl4橄榄油混悬液2 ml/kg皮下注射(每周2次,共12周)法制备大鼠肝纤维化模型,同时大黄素灌胃干预,12周后处死大鼠。采用实时定量PCR法检测肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达。结果与空白对照组比较,CCl4组大鼠肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达显著增加;与CCl4组比较,大黄素可显著减少肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达。结论大黄素具有下调纤维化肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达的作用。     

Notch信号通路对大鼠肝纤维化作用及药物干预价值

目的 研究Notch信号转导通路受体Notch-1、配体Jagged-1及下游因子Hes-1的表达及在大鼠肝纤维化发生、发展中的作用,并探讨扶正化瘀方干预的价值。方法 雄性Wistar大鼠58只,随机分为对照组、模型组、药物组3组。以四氯化碳(CCL4)制备大鼠肝纤维化模型,自造模始药物组即以扶正化瘀方溶液灌胃给予早期干预,8周实验结束后将大鼠处死,取部分组织行苏木精-伊红染色评价肝纤维化程度,采用实时荧光定量PCR方法监测Notch信号转导通路的受体Notch-1、配体Jagged-1及下游因子Hes-1的mRNA表达。结果 模型组肝组织表面可见颗粒状结节、汇管区假小叶形成及肝实质结构紊乱。药物组大鼠肝纤维化程度较模型组减轻。3组Jagged-1、Notch-1、Hes-1的mRNA表达比较差异有显著性(F=332.398~872.015,P<0.001);与对照组相比,模型组肝组织各因子mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,药物组大鼠肝组织各因子的表达明显下降(P<0.05)。结论 Notch信号转导通路可能全程参与肝纤维化的发生、发展及转归过程,而扶正化瘀方可通过抑制Notch信号转导通路下调Hes-1基因而抑制肝纤维化进展。     

肝纤维化组织中MMP1、TIMP1的表达及其临床意义

目的 :检测肝纤维化组织中基质金属蛋白酶 1 (MMP1 )、基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 (TIMP1 )的表达 ,为肝纤维化的诊治提供重要的分子生物学指标。 方法 :采用链霉菌抗生物蛋白 -过氧化酶联接法 (S- P法 )检测70例肝纤维化组织中 MMP1 、TIMP1 的表达。结果:(1) TIMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强 ,并且呈正相关关系 (r=0 .92 74 ,P <0 .0 1)。 (2 ) MMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重无明显变化 ,无相关关系(r =0 .2 181,P >0 .0 5 )。 结论:TIMP1 与肝纤维化的发生、发展密切相关 ,随纤维化发生、发展阳性表达增强。从分子水平对肝纤维化、肝硬化病变进行评估 ,为早期诊治肝纤维化和判断预后提供依据。     

参芍软肝汤抗大鼠肝纤维化的作用机制研究

目的 研究参芍软肝汤抗大鼠肝纤维化的作用及其机制.方法 选取Wistar雄性大鼠72只,正常喂养1周后分为对照组(n=12)和造模组(n=60),造模组采用40％四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液腹腔皮下注射构建大鼠肝纤维化模型,造模成功后分为模型组(等量生理盐水灌胃)、阳性对照组(秋水仙碱0.154 mg·kg-1·d-1)、低剂量组(每100 g体质量2 mL,含参芍软肝汤生药0.23 g/mL)、中剂量组(每100 g体质量2 mL,含参芍软肝汤生药0.46 g/mL)及高剂量组(每100 g体质量2 mL,含参芍软肝汤生药0.69 g/mL)各12只,均治疗8周后观察大鼠的肝纤维化相关指标的差异.结果 对照组大鼠全部为0期标准,阳性对照组大鼠的肝组织纤维化程度显著优于模型组(P＜0.05),低剂量组、中剂量组、高剂量组的大鼠肝组织纤维化程度逐渐减轻,高剂量组大鼠肝组织纤维化程度显著轻于模型组和低剂量组(P＜0.05).模型组大鼠的Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ-C型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)检测值均显著高于对照组大鼠(P＜0.05),阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的PC-Ⅲ、LN、Ⅳ-C、HA检测值均显著低于模型组大鼠(P＜0.05).模型组大鼠的血清超氧化物歧化酶(SOD)检测值均显著低于对照组大鼠(P＜0.05),模型组大鼠的血清丙二醛(MDA)水平显著高于对照组大鼠(P＜0.05);阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的血清SOD检测值均显著高于模型组大鼠(P＜0.05),血清MDA水平显著低于模型组大鼠(P＜0.05).结论 参芍软肝汤能有效减轻大鼠肝纤维化程度,其作用机制为降低血清肝纤维化指标的水平,抑制过氧化物产生,减轻自由基对肝细胞的损伤作用.     

大鼠肝纤维化过程星形细胞MMP-2的表达及白细胞介素10的影响

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的意义及外源性白细胞介素 10 (IL 10 )抗肝纤维化作用的机制。　方法　 6 0只SD雄性大鼠随机分为生理盐水对照组 (N组 ) 8只、四氯化碳(CCl4)组 2 8只和IL 10干预组 2 4只 ,建立正常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及IL 10干预模型。造模第 7周和第11周 ,采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉体外灌流消化 ,11%Nycodenz密度梯度离心分离肝星形细胞(HSC)。半定量RT PCR法检测各组HSC的MMP 2mRNA表达水平 ;免疫细胞化学法检测培养 72h时HSC的MMP 2蛋白表达情况。　结果　各组均检出MMP 2的mRNA表达 ;造模第 7周 ,CCl4组与IL 10组的MMP 2mRNA表达均高于N组 (P <0 0 1) ,IL 10组低于CCl4组 (P <0 0 1) ;造模第 11周 ,CCl4组与IL 10组的表达水平较第 7周均有下降 (P <0 0 1) ,IL 10组低于CCl4组 (P <0 0 1)。SP免疫细胞化学法检测各组MMP 2的蛋白表达情况与mRNA一致。　结论　MMP 2在实验性大鼠肝纤维化早期表达升高 ,后期下降是肝纤维化发生发展的重要机制之一 ;外源性IL 10可能通过抑制早期MMP 2的表达发挥抗肝纤维化作用。     

干扰素-α对CCl4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的:观察干扰素-α (interferon α,IFN-α)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制.方法:45只Wistar大鼠随机分为正常组(n=15)、模型组(n=15)、IFN-α治疗组(n=15).正常组大鼠予以橄榄油2 mL/kg腹腔注射,每周注射2次,共8周;模型组及IFN...     

实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2和组织型金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达及姜黄素的作用

目的探讨大鼠肝纤维化过程中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达及姜黄素汤对其的影响。方法复制大鼠四氯化碳（CCl4）肝纤维化模型,分别以高、中、低剂量姜黄素处理,检测血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和四型胶原（IVC）水平,检测肝组织纤维化程度和MMP-2及其抑制因子TIMP-1mRNA表达。结果CCl4成功诱导肝纤维化大鼠模型,姜黄素治疗能够降低血清肝纤维化指标及肝组织纤维化程度,姜黄素可以抑制CCl4诱导的MMP-2和TIMP-1mRNA表达,并能恢复MMP-2／TIMP-1的动态平衡。结论姜黄素可以通过减少MMP-2及其TIMP-1表达抑制肝纤维化。     

干扰素-α对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的：观察干扰素-α（interferonα,IFN-α）对四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制。方法：45只Wistar大鼠随机分为正常组（n=15）、模型组（n=15）、IFN-α治疗组（n=15）。正常组大鼠予以橄榄油2 mL/kg腹腔注射,每周注射2次,共8周;模型组及IFN-α治疗组大鼠予以50%CCl4 2 mL/kg腹腔注射造模,每周注射2次,共8周;IFN-α治疗组于第9周予以IFN-α每日10万U/只,皮下注射,共治疗3周。11周末处死所有大鼠。取肝组织进行炎症活动度半定量评分、纤维化半定量评分,检测羟脯氨酸含量,Ⅰ型和Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）及组织金属蛋白酶抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）mRNA表达量,以及MMP-9和TIMP-1蛋白表达量。结果：与模型组比较,IFN-α治疗组肝组织炎症活动度半定量评分、纤维化半定量评分显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;羟脯氨酸含量及Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1,CTGF,α-SMA,TIMP-1 mRNA表达量及TIMP-1蛋白表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,MMP-9蛋白及mRNA表达量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IFN-α可明显减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化及肝脏炎症反应,其作用机制可能为下调促肝纤维化因子TGF-β1和CTGF的表达,抑制肝星状细胞的活化,减少细胞外基质的合成;抑制肝纤维化降解因子TIMP-1的表达,调节细胞外基质的降解。     

免疫印迹法检测肝纤维化组织基质金属蛋白酶抑制因子-1表达水平

目的 观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子－1（TIMP－1）蛋白表达水平的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型,采用免疫印迹方法（Western blot法）,测定肝纤维化不同阶段TIMP－1的蛋白表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见TIMP－1的蛋白表达。在肝纤维化的发生、发展过程中,TIMP－1蛋白表达逐渐增强,到肝硬化阶段达到高峰。结论 TIMP－1可能是促进和影响肝纤维化、肝硬化形成的重要因素。     

锌指结构9、结缔组织生长因子在大鼠肝星状细胞中的表达

目的:通过研究肝纤维化大鼠原代肝星状细胞锌指结构9(ZF9)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达及其动态变化,初步探讨CTGF、ZF9在肝星状细胞活化中的作用。方法:32只雄性SD大鼠皮下注射40%植物油CCl4,每周2次,并分别于注射1,4,8周后作大鼠肝原位灌注,分离肝星状细胞,Western blot法检测CTGF蛋白,RT-PCR检测ZF9 mRNA水平。结果:正常大鼠肝星状细胞ZF9基因可见弱表达,注射CCl41周后其表达增强,注射CCl44周后转录明显增强,8周时仍高表达。正常大鼠肝星状细胞CTGF蛋白无明显表达,模型组大鼠皮下注射CCl41周后,蛋白出现少量表达,注射CCl44周后,表达进一步增加,第8周CTGF蛋白表达更强。结论:ZF9、CT-GF基因随着肝损伤的加重,在肝星状细胞中的表达逐渐增加,共同促进肝纤维化的发生。     

白细胞介素-10对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1,-2的影响

目的　研究白细胞介素 - 10 (IL- 10 )对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶抑制剂 - 1,- 2 (TIMP- 1,- 2 )的影响。　方法　建立大鼠肝纤维化模型并行 IL- 10干预实验 ,从正常大鼠 (N组 )和 CCl4 诱导肝纤维化大鼠 (C组 )及 IL- 10干预肝纤维化大鼠 (E组 )中取肝脏组织 ,SP免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏组织中 TIMP- 1,- 2的表达。　结果　肝脏组织病理学证实 ,成功构建 CCl4 诱导的实验性大鼠肝纤维化模型 ,随注射 CCl4 次数增加 ,肝纤维化程度逐渐加重。TIMP- 1阳性染色多见于大鼠肝细胞的细胞质 ,汇管区的胆管细胞细胞质有少许阳性表达。C组较 N组 TIMP- 1阳性表达明显增强 ,经 Ridit分析 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;且 TIMP- 1随着纤维化的发展表达逐渐增加 (P<0 .0 5 )。E组阳性表达较 C组降低 (P<0 .0 5 )。TIMP- 2阳性染色多见于大鼠肝细胞的细胞质 ,C组和E组较 N组的 TIMP- 2阳性表达差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,但 C组和 E组差异无显著性 (P>0 .0 5 )。　结论　TIMP- 1随着大鼠肝纤维化进展表达逐渐升高 ,IL- 10通过减少 TIMP- 1的表达 ,有抗纤维化作用     

保肝复功水煎剂对大鼠肝纤维化TGFβ1、TIMP1、MMP1表达的影响

目的:为了探讨保肝复功水煎剂抗肝纤维化的作用机理。方法:通过四氯化碳致小鼠肝损伤模型,利用基因芯片技术研究TGFβ1、MMP1及TIMP1在肝组织中的表达情况。结果:保肝复功水煎剂干预性治疗使实验组大鼠肝组织MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调。结论:保肝复功水煎剂在肝组织中具有明显使MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调的作用,从而促进了胞外基质的降解,抑制发挥肝纤维化的作用。     

SREBP-1c在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义

目的观察高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliver disease,NAFLD)过程中肝组织固醇调节元件结合蛋白-1C(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)的表达,探讨SREBP-1c与NAFLD形成的关系.方法建立大鼠高脂饮食NAFLD模型,用免疫组织化学染色与半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察NAFLD肝组织中SREBP-1c表达变化,并测定受其调控的脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)酶活性变化.结果与正常对照组相比,NAFLD组大鼠血清FFA、TG水平,肝组织SREBP-1c蛋白表达,FAS酶活性在第2周时变化无显著差异(P＞0.05),而从第4周开始显著增加(P<.05),第12周时达高峰(P<.01);而SREBP-1c mRNA于2周时开始增加(P<.05),12周达高峰(P<.01).结论高脂饮食引起SREBP-1c表达增强,最初是一种适应性反应,随着SREBP-1c表达进一步增强,导致脂肪酸代谢失衡,甘油三酯(triglyceride,TG)合成增多,与NAFLD的发生关系密切.