TRβ1、β-catenin及Cyclin A2在甲状腺乳头状癌的表达及临床意义

目的 探讨甲状腺激素受体β1（thyroid hormone receptor β1,TRβ1）、β-链蛋白（β-catenin）及细胞周期蛋白A2（Cyclin A2）在甲状腺乳头状癌（thyroid papillary carcinoma,TPC）组织中的表达及意义。方法 应用免疫组化（SP）法分别检测30例正常甲状腺组织、30例结节性甲状腺肿伴乳头状增生（nodular goiter with papillary hyperplasia,NGWPH）及116例TPC组织中TRβ1、β-catenin及Cyclin A2的表达,同时检测肿瘤淋巴管密度（lymphtic vessel density,LVD）,分析它们与临床病理指标的关系。结果 与正常甲状腺组织和NGWPH组织比较,TPC组织中TRβ1的表达阳性率降低,β-catenin在细胞膜表达显著减弱,而胞质表达明显增强,Cyclin A2的表达阳性率升高,差异有统计学意义（P<0.01）。相关性分析结果显示,TRβ1与β-catenin和Cyclin A2的表达呈负相关（r=-0.656和-0.525,均P<0.01）,β-catenin和Cyclin A2呈正相关（r=0.384,P<0.01）;淋巴结转移组的LVD显著高于无淋巴结转移组（P<0.05）;TRβ1低表达、β-catenin胞质异常表达及Cyclin A2过表达与TPC包膜外侵、LVD及淋巴结转移有关（P<0.05）,而与患者年龄、性别、组织类型、肿瘤直径、是否为多病灶无相关性（P>0.05）。结论 TRβ1通过使β-catenin在细胞内大量蓄积,继而诱导下游靶基因Cyclin A2表达途径参与TPC的发生和进展。     

过表达CD82对植入期小鼠子宫内膜整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin表达的影响

目的 探讨CD82对着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞内整合素αV、β3、E-cadherin以及β-catenin蛋白表达的影响. 方法 将构建的CD82腺病毒转染原代培养的小鼠子宫内膜上皮细胞.检测妊娠小鼠子宫内膜上皮细胞转染CD82腺病毒后,细胞内整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin的表达变化情况.结果 提取的上皮细胞纯度为（93.2±0.6）%.构建的CD82腺病毒转染效率达到（92.0±4.5）%,转染原代培养的小鼠子宫内膜上皮细胞24 h后,RT-PCR检测发现CD82基因表达明显升高.转染48 h后,Western blot检测CD82蛋白水平明显升高.免疫细胞化学检测妊娠第4天的小鼠子宫内膜上皮细胞转染CD82腺病毒后,整合素αV、β3以及β-catenin的表达较未转染组均有明显上升（P<0.05）,但E-cadherin的表达量无明显变化（P>0.05）.结论 胚胎植入前,CD82可能影响小鼠子宫内膜上皮细胞内整合素αV、β3和β-catenin的蛋白表达.     

Ⅰ型胶原蛋白和TGF-β1在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的 研究Ⅰ型胶原蛋白和TGF-β1在食管鳞癌中的表达及意义。方法 选取2013年1月～2014年12月在笔者医院接受治疗的食管鳞癌患者82例作为研究对象,将其切除的食管鳞癌组织制成标本作为观察组进行研究,另随机选取20例患者取其癌组织旁正常的食管黏膜组织作为对照组,检测两组中Ⅰ型胶原蛋白和TGF-β1的表达情况。并采用单因素分析这两种指标表达的相关性。结果 在癌组织中,Ⅰ型胶原蛋白、TGF-β1均存在异常高表达,差异有统计学意义（P<0.05）;实施单因素分析,发现Ⅰ型胶原蛋白、TGF-β1的高表达与是否存在淋巴结的转移以及pTNM分期有明显的关系,且发现二者的表达存在明显的正相关性（r=0.744,P=0.000）。结论 在食管鳞癌患者癌组织中,Ⅰ型胶原蛋白以及TGF-β1存在明显的高表达,且这两种指标的表达与肿瘤的浸润深度、pTNM分期以及淋巴结是否转移存在明显的相关性,可见其在食管鳞癌的发生以及发展过程中起到较为重要的作用。     

腹泻型肠易激综合征患者肠黏膜PRDX1、FXR的表达及其相关性分析

目的 探讨腹泻型肠易激综合征（IBS-D）患者肠黏膜PRDX1、FXR的表达及其相关性。方法 选取2016年5月—2018年9月在海口市中医医院就诊的81例IBS-D患者为观察组,根据肠易激综合征病情严重程度量表（IBS-SSS）积分将观察组分为3个亚组,19例轻度组（75～175分）,45例中度组（>175～300分）,17例重度组（>300分）。另选取与观察组年龄相匹配的同期该院健康体检者90例为对照组。采用HE染色观察肠黏膜组织结构形态及炎症反应,采用免疫组织化学染色法检查观察组、对照组肠黏膜PRDX1、FXR的表达,采用Spearman分析观察组肠黏膜PRDX1、FXR与IBS-SSS积分的相关性。结果 观察组肠黏膜PRDX1阳性表达率比对照组高（P <0.05）,FXR阳性表达率比对照组低（P <0.05）。重度组肠黏膜PRDX1阳性表达率高于轻度组和中度组（P <0.05）,轻度组FXR阳性表达率高于中度组和重度组（P <0.05）,中度组FXR阳性表达率高于重度组（P <0.05）。轻度组、中度组、重度组IBS-SSS积分依次升高（P <0.05）。Spearman结果显示,观察组肠黏膜PRDX1阳性表达率与IBS-SSS积分呈正相关（r_s =0.516,P =0.000）,FXR阳性表达率与IBS-SSS积分呈负相关（r_s =-0.575,P =0.000）。结论 IBS患者肠黏膜PRDX1阳性表达率较高,FXR阳性表达率较低,且与IBS-SSS积分存在相关性,可能成为IBS-D新的生物标志物及治疗靶点。     

RegIV与PI3K/Akt通路相关蛋白在胃腺癌中的表达及意义

目的 探讨再生基因蛋白Ⅳ （regenerating gene type Ⅳ, Reg Ⅳ）在胃腺癌发生发展中的可能价值及意义。 方法 采用S-P免疫组织化学技术测定63例胃腺癌及相应的癌旁正常组织中Reg Ⅳ及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、Akt蛋白的表达;分析胃癌患者不同临床病理特征下Reg Ⅳ、PI3K、Akt蛋白的表达差异,并分析胃癌组织Reg Ⅳ蛋白与PI3K、Akt蛋白表达的相关性。 结果 63例胃腺癌组织中Reg Ⅳ、PI3K、Akt蛋白的阳性表达率为50.7% （32/63）、68.3% （43/63）、60.3% （38/63）,均高于癌旁正常组织19.0% （12/63）、20.6% （13/63）、9.5% （6/63）,差异有统计学意义（P<0.05）。不同肿瘤分化程度间Reg Ⅳ蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）;不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移与否、临床分期间PI3K蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）;淋巴结转移与否胃癌组织Akt蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）。胃腺癌组织中Reg Ⅳ蛋白与PI3K、Akt表达正相关（r_s=0.284、0.305,P<0.05）,PI3K蛋白与Akt蛋白表达正相关（r_s=0.423,P<0.05）。 结论 Reg Ⅳ高表达与胃腺癌发展相关,PI3K/Akt信号通路的激活可能参与其中。     

食管鳞癌中MEKK3和NF-κB的表达及其临床意义

目的研究有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3（MEKK3）、核转录因子（NF-κB）蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法收集76例食管鳞癌患者的癌组织及相应的35例癌旁异型增生组织和20例正常食管黏膜组织,应用免疫组化EnVision法检测MEKK3、NF-κB蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中MEKK3蛋白阳性表达率高于癌旁异型增生组织和正常食管黏膜组织（均P＜0.05）;NF-κB蛋白表达阳性率在正常食管黏膜组、癌旁异型增生组、食管鳞癌组中依次升高;MEKK3、NF-κB蛋白表达与临床分期、浸润深度及淋巴结转移均相关（均P＜0.05）,而与患者年龄、性别及组织学分级均无关（均P＞0.05）;MEKK3与NF-κB蛋白的阳性表达呈正相关（r=0.308,P＜0.05）。结论 MEKK3、NF-κB蛋白异常表达与食管鳞癌的发生、浸润转移及预后相关,且两者呈正相关。联合检测MEKK3和NF-κB蛋白表达可作为食管鳞癌的诊断、预后评估的参考依据。     

骨桥蛋白和核转录因子在慢性环孢素A肾毒性中的作用

目的 探讨炎性介质骨桥蛋白（OPN）的表达和核转录因子在慢性环孢素A（CsA）肾毒性中的作用。方法 雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低盐 （0.05% 钠盐）饲料下分为两组,正常对照组给予皮下注射橄榄油（1 mL·kg^-1·d^-1）;毒性组给予皮下注射CsA （15 mg·kg^-1·d^-1） 4周。通过观察炎性细胞浸润（ED-1） 和肾小管间质纤维化,比较两组大鼠的肾小管间质损伤程度;采用RNA印迹、免疫组织化学染色方法检测OPN在mRNA和蛋白水平的表达;用凝胶电泳迁移率实验 （EMSA）分析法和免疫印迹法测定核转录因子（NF-κB 和 AP-1）的结合活性和IκB蛋白的表达。结果 毒性组大鼠表现为肾小管间质带状纤维化[（38.9±3.3）%/5 mm²vs（0±0）%/5 mm²,P<0.01]和大量ED-1阳性细胞浸润[（89±9）vs（7±2）,P<0.01]。与对照组相比,毒性组大鼠 OPN mRNA和蛋白的表达增加[（729±37）%vs（103±4）%,P<0.01],分布于肾小管上皮细胞,其主要位于肾小管间质损伤部位;毒性组核转录因子NF-κB [（218±19）%vs（116±15）%,P<0.01]和AP-1 [（735±225）%vs（101±4）%,P<0.01]结合活性增加,而IκB蛋白的表达减少[（9±7）%vs（105±7）%,P<0.01]。直线相关分析示OPN mRNA的表达与肾小管间质纤维化程度（r=0.959,P<0.001）和核转录因子的结合活性呈正相相关（NF-κB： r=0.773,P<0.01;AP-1： r=0.619,P=0.01）。结论 炎性介质OPN和核转录因子参与了慢性CsA肾毒性肾小管间质的损伤。     

基质金属蛋白酶9及其组织型抑制因子1在高血压大鼠血液及组织中的变化

目的 探讨肾血管性高血压大鼠（RHR） 血清、脑及血管组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9） 和组织型基质金属蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）的表达以及血压与两者的关系。方法 雄性SD大鼠80只随机分成RHR组（40只） 和假手术组（40只）。RHR组采用双肾-双夹法制作高血压大鼠模型,鼠尾测压仪测定血压。根据Longa 5评分法和病理学结果确定脑卒中;Western blot和免疫组化测定脑组织和血管中MMP-9和TIMP-1的表达,双抗体夹心ELISA 检测血清MMP-9和TIMP-1水平。结果 与假手术组比较,RHR组大鼠术后2、4、6、8、10、12 周血压均明显升高[（157±9.0）比（128±7.0）,（176±10.0）比（122±6.0）,（194±8.0）比（117±6.5）,（202±12.0）比（124±8.0）,（218±15.0）比（126.±8.5）,（224±20.0）比（129.±9.0） mmHg,均P < 0.05];术后12周,RHR大鼠血清MMP-9高于假手术组[（783.4±109.79）比（573.4±109.59）ng/mL,P < 0.05];而RHR大鼠血清TIMP-1低于假手术组[（313.02±83.9）比（976.19±191.1） pg/mL,P < 0.05]。同时,RHR大鼠脑组织和血管MMP-9的表达均明显高于假手术组 （均P < 0.05）,而TIMP-1的表达则均明显低于假手术组（均P < 0.05）。Pearson相关分析显示收缩压与血清、脑及血管组织中的MMP-9水平均呈正相关（r=0.557,r=0.774和r=0.661,均P < 0.05）,而与TIMP-1水平均呈负相关（r=-0.481,r=-0.535和r=-0.685,均P < 0.01）。结论 肾血管性高血压大鼠血清、脑和血管组织中MMP-9表达升高,而TIMP-1表达降低。两者在血液和组织中的变化趋势保持一致,血压的升高与血液和组织中MMP-9的升高和TIMP-1的降低相关。     

不同临床病理特征的食管鳞癌组织中上皮间质转化相关蛋白的表达

目的 探讨不同临床病理特征的食管鳞癌组织中上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况.方法 100例食管鳞癌患者,根据肿瘤芽数不同分为低肿瘤芽组(芽数<5个,n=40)及高肿瘤芽组(芽数≥5个,n=60),比较两组肿瘤组织中EMT相关蛋白上皮间质转化因子(Twist)、上皮性钙黏附因子(E-cadherin)以及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,以及在不同临床病理特征中各相关蛋白的表达情况.结果 高肿瘤芽组Twist阳性表达率高于低肿瘤芽组,而E-cadherin及β-catenin阳性表达率低于低肿瘤芽组(均P<0.05).相较于无淋巴结转移者,有淋巴结转移者癌组织的Twist及β-catenin阳性表达率高,E-cadherin阳性表达率低(均P<0.05);随着疾病进展,Twist的阳性表达率降低(P<0.05);随着分化程度升高,E-cadherin的阳性表达率降低,β-catenin的阳性表达率升高(均P<0.05);随着肿瘤浸润深度增加,Twist、E-cadherin及β-catenin阳性表达率均升高(P<0.05).结论 Twist、E-cadherin以及β-catenin表达与食管鳞癌肿瘤芽形成、淋巴结转移以及浸润深度具有一定联系.     

p63与表皮生长因子受体突变肺鳞癌患者生存的关系

目的 检测表皮生长因子受体（EGFR）在肺鳞癌患者中的突变率,并分析p63与EGFR突变肺鳞癌患者生存的关系。方法 收集2010年2月至2013年3月在我院初治的肺鳞癌患者的组织样本,用直接测序法检测EGFR突变情况,免疫组织化学法检测p63的表达。随访患者,记录患者的总生存时间（OS）,评价EGFR突变和p63表达对患者生存的影响。结果 所有病理组织确诊为肺鳞癌的262例患者中,16例（6.1%）有EGFR突变 ,其中外显子19位点缺失7例,外显子21 L858R点突变9例,未见外显子18和20突变。与传统意义上的肺鳞癌患者相比,EGFR突变的肺鳞癌患者女性和非吸烟者所占比例较高。p63部分阳性的EGFR突变患者（n=4）的OS为11.28（95%CI：9.33～15.23）个月,p63阳性的EGFR突变患者（n=11）的OS 为5.93（95%CI：1.75～8.39）个月,两者差异有统计学意义（P=0.039）。结论 肺鳞癌患者EGFR突变率为6.1%,均为外显子19和21敏感突变。p63部分阳性的EGFR突变患者比p63阳性EGFR突变患者生存期更长。     

宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109 Wnt/β-catenin信号转导通路的影响

目的 研究香加皮中提取的宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用及其对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。方法 RT-PCR技术检测不同质量浓度宝藿苷-I作用48 h后,细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin m RNA表达的变化,采用流式细胞术分析Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达。结果 宝藿苷-I（25、50 μg/mL）作用48 h后,Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降（P＜0.01）,12.5 μg/mL处理组细胞的β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达水平与对照组相比无显著差异。结论 宝藿苷-I可能通过下调β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达,影响Wnt/β-catenin信号转导通路,发挥抑制Eca-109细胞增殖作用。     

RNAi沉默polβ基因部分逆转食管鳞癌细胞顺铂耐药性

目的 通过RNA干扰（RNAi）技术沉默DNA聚合酶polβ的表达,观察其对食管癌细胞顺铂（cDDP）耐药性的影响。方法 构建靶向polβ基因的siRNA重组慢病毒pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1、pRNAT-U6.2/Lenti-polβ2及阴性对照载体pRNAT-U6.2/Lenti-polβC,将其感染人食管鳞癌顺铂耐药细胞系EC9706/cDDP,通过RT-PCR、蛋白质印迹分析和免疫荧光实验观察细胞polβ的表达情况,采用MTT法观察不同浓度顺铂对细胞生长的抑制作用并计算50%细胞生长抑制所需的药物浓度（IC₅₀）和耐药指数（RI）。结果 靶向polβ的siRNA重组慢病毒pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1和pRNAT-U6.2/Lenti-polβ2感染EC9706/cDDP后均可下调polβ的mRNA和蛋白表达水平,其中前者效果更为显著。顺铂以剂量依赖方式抑制EC9706/cDDP细胞增殖,感染pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1、pRNAT-U6.2/Lenti-polβC的EC9706/cDDP细胞及未感染EC9706/cDDP细胞对顺铂的IC₅₀分别为55.71、62.41、63.11 μg/mL,耐药指数分别为13.9、15.5、15.7,其中前者与后二者相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 polβ的表达与食管鳞癌细胞系EC9706/cDDP顺铂耐药性有关,沉默其表达可部分逆转EC9706/cDDP细胞对顺铂的耐药性。     

Bmi-1和hTERT在食管鳞状细胞癌中的表达及相关性分析

目的探讨原癌基因Bmi-1和人端粒酶逆转录酶（hTERT）在食管鳞癌组织中的表达及两者的相关性。方法免疫组化SP法检测食管鳞癌手术标本57例和其中作为对照的40例远离癌组织5～8 cm的正常食管黏膜组织中Bmi-1和hTERT的表达。结果食管鳞癌组织中Bmi-1阳性表达率（66.7%）明显高于食管正常黏膜组织（25.0%,P〈0.01）;hTERT阳性表达率73.6%,明显高于正常食管黏膜膜组织的20.0%（P〈0.01）。Bmi-1的表达与患者病理分级、临床分期和淋巴结转移有关（P均〈0.05）,而与患者性别、年龄无关（P均〉0.05）;hTERT阳性表达与患者的病理分级、临床分期、淋巴转移、性别、年龄等均无关（P均〉0.05）;Pearson相关性分析显示Bmi-1与hTERT在食管鳞癌中的表达呈正相关（P〈0.05）。结论Bmi-1与肿瘤的发生、发展、浸润、转移有相关性,hTERT在肿瘤的发生中起重要作用。联合监测Bmi-1、hTERT可能有助于食管癌的早期诊断,以及准确预测患者的预后。     

E—cadherin、N—cadherin和β-catenin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理学意义

目的 探讨上皮型钙粘素（E—cadherin）、神经型钙粘素（N—cadherin）和β-连环蛋白（β-catenin）在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组织化学PV法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中E—cadherin、N—cadherin的蛋白表达。结果①正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中E—cadherin的阳性表达率依次降低,分别为95．2％、71．0％、40．3％;N—cadherin的阳性表达率依次升高,分别为29．0％、61．3％、75．8％,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）;随着正常食管黏膜组织向癌组织的转化,β—catenin的膜表达阳性率依次降低,而胞质表达阳性率则依次增高,在低分化癌组织中甚至出现了核表达;E—cadherin的阴性表达率、N—cadherin阳性表达率及β—catenin的胞质阳性表达率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。②E—cadherin和N—cadherin、β—catenin在食管鳞癌组织中的表达均呈负相关（Y1=-0．534,Y2=-0．453,P〈0．05）,而N—cadherin和β—catenin在食管鳞癌组织中的表达则呈正相关（y=0．328,P〈0．05）。结论食管鳞癌组织中E—cadherin的低表达、N—cad—herin的高表达及β—catenin的胞质高表达与食管鳞癌的浸润、转移有密切的关系。     

乙酰化酶抑制剂Garcinol对雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用与机制

目的 研究乙酰化酶抑制剂Garcinol对雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化及凋亡抑制的影响及机制。 方法 应用CCK-8法检测Garcinol 对17β-雌二醇（17β-E₂）促MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;细胞免疫荧光检测NF-κB/p65核转运情况;RT-PCR检测cyclin D1、Bcl-2、Bcl-x_L mRNA水平;蛋白质印迹分析检测乙酰化（ac）-H3、ac-H4、NF-κB/ac-p65、cyclin D1、Bcl-2、Bcl-x_L 蛋白的表达水平。 结果 Garcinol能抑制17β-E₂促细胞增殖作用,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,细胞凋亡率增加（P<0.01）;17β-E₂促进MCF-7细胞ac-H3、ac-H4、NF-κB/ac-p65表达水平（P<0.01,P<0.05,P<0.01）,Garcinol能抑制17β-E₂对ac-H3、NF-κB/ac-p65的表达促进作用（P<0.01）,对ac-H4影响无统计学意义;17β-E₂促进NF-κB/p65核转运相应受到Garcinol抑制（P<0.01）;17β-E₂促进cyclin D1、Bcl-2、Bcl-x_L的 mRNA转录和蛋白表达水平的作用受到Garcinol抑制（P<0.05）。 结论 17β-E₂促MCF-7细胞增殖和凋亡抑制作用与组蛋白和非组蛋白NF-κB/p65乙酰化水平增高有关,乙酰化酶抑制剂Garcinol 通过降低乙酰化水平对雌激素促乳腺癌细胞增殖具有明显抑制作用,降低NF-κB通路的ac-p65蛋白水平,从而下调cyclin D1、Bcl-2、Bcl-x_L可能是其重要机制。     

丹蛭降糖胶囊调控β-catenin蛋白在高磷诱导的糖尿病大鼠下肢血管内皮细胞钙化中的作用

[目的] 探讨丹蛭降糖胶囊调控β-链蛋白（β-catenin蛋白）在高磷诱导的糖尿病大鼠下肢血管内皮细胞钙化中的作用。[方法] 分离糖尿病大鼠和健康大鼠下肢股动脉内皮细胞进行体外培养,分为空白组、高磷组、丹蛭组、氯化锂（LiCL）组;调整稳转内皮细胞（EC细胞）状态,除空白组外,其余各组加入高磷培养基（含有10 mmol/L β-甘油磷酸盐、50 mg/mL维生素C和1×10^-7 mol/L胰岛素）诱导细胞钙化,同时丹蛭组和LiCL组给予10%含药血清（丹蛭降糖胶囊）干预,48 h后LiCL组给予20 mmol/L LiCl继续干预48 h。采用DNA断裂的原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、β-catenin、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、骨形态发生蛋白2（BMP2）、卷曲同源物1（FZD1）mRNA表达水平;激光共聚焦显微镜观察细胞β-catenin蛋白定位。[结果] 与空白组比较,高磷组细胞凋亡数、钙离子含量、α-SMA、β-catenin、ALP、OPN、BMP2及FZD1表达量增多,细胞增殖数量减少（P＜0.01）;激光共聚焦显微镜观察结果表明β-catenin多表达于细胞核内。与高磷组比较,丹蛭组细胞凋亡数、钙离子含量、α-SMA、β-catenin、ALP、OPN、BMP2及FZD1表达量减少,细胞增殖数量增多（P＜0.01）,激光共聚焦显微镜下观察显示细胞核内β-catenin表达量减少。与丹蛭组比较,LiCL组细胞凋亡数、钙离子含量、α-SMA、β-catenin、ALP、OPN、BMP2及FZD1表达增加,细胞增殖数量减少（P＜0.01）,激光共聚焦显微镜下观察显示细胞核内β-catenin表达量增加。[结论] 丹蛭降糖胶囊可以减轻糖尿病大鼠下肢内皮细胞钙化,机制是通过下调β-catenin在细胞核内的表达,减少β-catenin蛋白合成,抑制下游细胞表型基因的转录,达到防治内皮细胞血管钙化的目的。     

低聚半乳糖对应激大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的 研究肠道补充低聚半乳糖（galacto-oligosaccharides,GOS）对冷束缚应激（cold restrain stress, CRS）大鼠肠黏膜紧密连接和屏障功能的影响。 方法 40只Wistar大鼠随机分成正常对照组、GOS组、CRS组和CRS+GOS组,每组10只,正常对照组仅给予基础饮食,GOS组每天给予GOS（4 g/kg）喂养,共10 d;CRS组大鼠于普通喂养第10天,被束缚固定后置于4℃冰箱3 h,制备CRS模型;CRS+GOS组在每天给予GOS（4 g/kg）喂养的第10天制备CRS模型。建模成功后,各组大鼠经心脏采血,检测血浆二胺氧化酶（diamine oxidas,DAO）浓度;处死大鼠,取回肠组织行病理检查及电镜检查,再采用免疫组化法检测细胞紧密连接蛋白occludin的表达,并以实时定量PCR法检测其在mRNA水平的表达。 结果 与正常对照组相比,CRS组及CRS+GOS组大鼠血浆DAO浓度均明显增高（P<0.01）;CRS组血浆DAO浓度又明显高于CRS+GOS组（P<0.01）;CRS组及CRS+GOS组大鼠肠黏膜occludin在蛋白和mRNA水平的表达均较正常对照组显著降低（P<0.01）;CRS组上述指标又明显低于CRS+GOS组（P<0.01）,正常对照组与GOS组间上述指标的差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 添加GOS喂养可以降低大鼠血浆DAO浓度,增加回肠occludin 在mRNA和蛋白水平的表达,提示GOS可能具有改善紧密连接和维护肠屏障功能的作用。     

miRNA-140在早期骨关节炎软骨细胞中的表达规律及功能

目的 观察早期骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨细胞中miRNA-140的表达规律以及转染ds-miRNA-140对软骨细胞功能的影响。 方法 建立兔OA模型,获得正常软骨细胞（A组）和4周（B组）、8周（C组）OA软骨细胞,应用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测各组miRNA-140相对表达量以及Ⅱ型胶原蛋白（Col2a1）和金属蛋白酶13（MMP-13）的表达情况。各组软骨细胞转染ds-miRNA-140后,观察细胞Col2a1、MMP-13的表达情况。 结果 B组、C组软骨细胞miRNA-140的表达和A组相比分别下降到63%和57%（P<0.01）,而B组和C组软骨细胞miRNA-140的表达差异无统计学意义（P>0.05）;B、C两组细胞Col2a1 mRNA的表达和A组相比分别减少了52%和63%（P<0.01）,B、C两组软骨细胞MMP-13 mRNA的表达和A组相比分别升高了3.01倍和4.15倍（P<0.01）。转染ds-miRNA-140后,B、C两组细胞Col2a1 mRNA的表达分别增加了60%和127%（P<0.01）,B、C两组MMP-13 mRNA的表达在转染后是转染前的54.53%和42.61%（P<0.01）。Col2a1和MMP-13蛋白表达水平变化趋势与mRNA一致。 结论 OA早期关节软骨miRNA-140的表达显著减少;转染ds-miRNA-140可增加软骨细胞Col2a1表达,同时降低MMP-13的表达。     

β-catenin与cyclinD1在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的：通过观察宫颈鳞癌组织中β-连环蛋白（β-catenin）与细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表达,探讨它们在宫颈癌发生、发展过程中的作用。方法：应用免疫组织化学法观察宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、正常宫颈组织中β-catenin与cyclinD1的表达特点,结合临床病理资料进行统计学分析。结果：（1）β-catenin在正常宫颈组织（n=8）、宫颈上皮内瘤样病变（n=20）及宫颈鳞癌（n=42）中的异常表达率分别是0%、35.0%及64.3%,三组间比较差异有统计学意义（P < 0.05）;β-catenin在宫颈鳞癌不同组织分级中异位阳性表达分别为：Ⅰ级25.0%;Ⅱ级63.6%;Ⅲ级91.7%（P < 0.01）。在宫颈鳞癌淋巴结阳性组,β-catenin异位阳性表达率高于淋巴结阴性组（P >0.05）（2）cyclin D1在三组中的阳性表达率则分别是0%、30.0%和61.9%,三组间比较差异有统计学意义（P < 0.05）;cyclinD1的过度表达也与宫颈癌组织分级相关,Ⅰ级:37.5% ;Ⅱ级:54.6 %;Ⅲ:91.7%,三组间相比差异有统计学意义（P < 0.05）,CyclinD1在宫颈鳞癌淋巴结阳性组与阴性组的阳性表达率分别为70.0%和59.4%,差异无统计学意义（P > 0.05）。（3）β-catenin异常表达与cyclinD1的阳性表达呈正相关（r=7.885）。结论：（1）宫颈癌中存在β-catenin和cyclinD1的异常表达,随着正常宫颈组织→CIN→宫颈鳞癌的进展,β-catenin及CyclinD1的异常表达呈递增趋势且两者存在明显的相关性。提示Wnt/β-catenin信号通路在宫颈鳞癌的发生发展中可能起重要的作用。（2）β-catenin异位表达及CyclinD1阳性表达均与宫颈鳞癌分化相关,但均与淋巴结是否转移无关