胆固醇酯转运蛋白的研究方法与临床意义

胆固醇酯转运蛋白(CETP)是一种重要的脂质转运蛋白，在胆固醇逆向转运中起关键作用，与动脉粥捍硬化的发生和发展密切相关。本文简要介绍了CETP的生物化学特征、CETP活性与质量及基因多态性的研究方法以及CETP研究的临床意义。     

胆固醇酯转运蛋白的研究方法与临床意义

胆固醇酯转运蛋白 (CETP)是一种重要的脂质转运蛋白 ,在胆固醇逆向转运中起关键作用 ,与动脉粥样硬化的发生和发展密切相关。本文简要介绍了CETP的生物化学特征、CETP活性与质量及基因多态性的研究方法以及CETP研究的临床意义。     

不同程度冠脉病变男性患者胆固醇酯转运蛋白水平及其临床意义

目的探讨不同程度冠脉病变男性患者胆固醇酯转运蛋白(CETP)水平及临床意义。方法用ELISA法测定42例男性冠心病(CHD)患者及49例健康男性对照血清CETP浓度。根据冠状动脉造影结果将CHD组分为单支病变组、双支病变组及多支病变组;局限病变组及弥漫病变组;轻度狭窄组及重度狭窄组。结果CHD组CETP水平(1.37±1.07mg/L)明显高于健康对照组(0.99±0.53mg/L)(P<0.05);多支病变组(1.87±1.38mg/L)明显高于双支病变组(1.06±0.62mg/L)及单支病变组(0.93±0.49mg/L)(P<0.05);弥漫病变组(1.56±1.18mg/L)明显高于局限病变组(0.85±0.44mg/L)(P<0.05);重度狭窄组(1.67±1.22mg/L)较轻度狭窄组(0.85±0.36mg/L)明显升高(P<0.01)。结论CETP水平与冠脉病变的严重程度呈一定相关性,提示检测血清CETP水平可能有助于判断冠脉病变程度。     

血浆胆固醇酯转运蛋白研究进展

人血浆胆固醇酯转运蛋白（CETP）为476个或氨酸构成的疏水糖蛋白，人CETP基困长25kb，含16个外显子，15个内含子，位于染色体16q12－21。CETP的主要功能是促进血浆脂蛋白之间中性脂质胆固醇酯（CE）及甘油三酯（TG）的转运及交换。CETP分子C-端具有CE及TG结合位点，其促进CE及TG的转运机制可能为载体介导机制。CETP活性不仅受脂蛋白中脂质浓度和栽脂蛋白浓度的影响，还受很多其它因素的影响。单克隆抗体及转基因小鼠的应用使CETP在脂蛋白代谢中的作用得到了更深入的认识。胆固醇、他和脂酸可诱导CETP基因表达。迄今已在日本人及欧洲白种人中发现了几种CETP基因变异。     

人工合成高密度脂蛋白样颗粒测定血清胆固醇酯转运蛋白活性

目的建立血清胆固醇酯转运蛋白活性测定方法。方法用１４Ｃ标记的胆固醇酯合成高密度脂蛋白（ＨＤＬ）样颗粒作为胆固醇酯的供体，以低密度脂蛋白为受体测定血清中胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）活性，并对４０例健康人、４５例冠心病（ＣＨＤ）、２６例脑卒中患者血清ＣＥＴＰ活性进行分析。结果　该方法线性范围为０～３０％；高（２６％）、低（６．８％）活性批内变异系数（ＣＶ）分别为６．０％、７．５％，批间ＣＶ分别为１１．５％和１２．３％；４５例ＣＨＤ患者血清ＣＥＴＰ活性（ｘ±ｓ）为１７．６％±５．４％，２６例脑卒中患者为１５．２％±３．８％，均明显高于健康对照（１２．７％±３．９％）（Ｐ＜０．０１）。结论该法简便快速、精密度较高，为临床及科研工作中测定ＣＥＴＰ活性提供了一种有效的方法。     

胆固醇酯转运蛋白及其基因多态性研究进展

胆固醇酯转运蛋白（CETP）介导血浆脂蛋白之间脂质的交换和转运,血浆中中性脂质胆固醇酯（CE）和TG的转运,特别是促进高密度脂蛋白（HDL）的CE向其他包含载脂蛋白B（ApoB）的脂蛋白（极低密度脂蛋白（VLDL）、中密度脂蛋白和低密度脂蛋白（LDL））转运来调节血浆HDL,CETP还参与调节血浆HDL-C的体积和含量,被认为是胆固醇逆向转运（RCT）的关键蛋白.与糖尿病所致的脂代谢紊乱有着密切的关系.本将对CETP结构和功能、代谢的调节因素及其最新研究进展进行综述如下.     

抗葡激酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗葡激酶单克隆抗体用于重组葡激酶生物活性的免疫检测。方法 用重组葡激酶免疫BAIB/c小鼠，将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经酶联免疫吸附试验筛选获得3株分泌抗葡激酶单克隆抗体细胞株。结果 经检测上述单克隆抗体与葡激酶有很强的亲和性，与宿主菌蛋白和人血清无交叉反应。结论 上述方法检测葡激酶生物活性具有亲和性、特异性高及快速、复合的特点，可用作动物和人类临床试验中检测葡激酶生物活性的一种手段。     

新生儿血清胆固醇酯转运蛋白浓度及其与LDL组成的关系

目的分析新生儿血清胆固醇酯转运蛋白(CETP)浓度与LDL组成的关系,以及对血脂、脂蛋白水平的影响。方法采用ELISA法测定40例脐带血CETP浓度,并与80例健康成人比较;用序列超速离心法分离LDL后再用常规方法分析其中TG、CE含量。结果新生儿CETP呈偏态分布、中位数0.20 mg/L,范围(0.11~0.49)mg/L,均值(0.25±0.11)mg/L,明显低于成人(2.19±2.04)mg/L(P<0.0001);男女间无显著差异[(0.26±0.10)mg/L vs(0.22±0.16)mg/L,P>0.05]。新生儿血脂、脂蛋白浓度均低于成人,LDL-CE/LDL-TG比值也明显低于成人(1.5 vs 4.7)。结论新生儿血清CETP浓度仅是成人的九分之一,低CETP水平可能是新生儿LDL-CE/LDL-TG比值低的主要原因。     

氧化高密度脂蛋白和氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的制备

目的 制备抗氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)和氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)单克隆抗体(McAb).方法 以Ox-HDL和Ox-LDL为抗原,免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌抗相关抗原的McAb.用protein A柱亲和层析法纯化腹水中McAb,用Dot-ELISA和ELISA等鉴定其生物学活性.结果 获得3株不同结合特性的抗Ox-HDL和Ox-LDL的单克隆杂交瘤细胞(IC4Gl2,6H9A4A11和8C1A6),2株为IgG1亚型,1株为lgG2b亚型;腹水效价大干10',Dot-ELISA和ELISA检测证实1C4G12为具有对Ox-HDL和Ox-LDL交叉反应性的McAb,其与Ox-HDL单抗6H9A4A11可构成双抗体夹心体系测定0x-HDL水平,而与Ox-LDL单抗8C1A6构成的体系可测定Ox-LDL水平.结论 本实验通过构建3株不同特性的交叉反应性McAb,可用于测定Ox-HDL和Ox-LDL免疫方法 的建立.     

绝经后妇女雌激素缺乏与胆固醇酯转运蛋白水平改变的关系

目的　探讨雌激素是否影响血清胆固醇酯转运蛋白 (CETP)水平的调节。方法　采用放射免疫分析法测定了 196例包括绝经前 (5 2例 ,年龄 18～ 40y)、绝经后妇女 (87例 ,年龄 61～ 81y)及围绝经期妇女 (5 7例 ,年龄 41～ 60 y)的血清雌二醇(E2 )、促卵泡生成激素 (FSH) ;自制CETP单抗建立的ELISA法测定CETP水平 ,同时测定血脂类指标。结果　绝经后妇女CETP水平明显低于绝经前和围绝经期妇女 (P <0 0 0 0 1) ,E2 水平较绝经前和围绝经期妇女显著下降 (P <0 0 0 0 1) ,而FSH水平显著升高 (P <0 0 0 0 1) ,各组血脂水平亦有显著性差异。CETP与E2 呈正相关 (r =0 .2 4,P <0 0 0 1) ,与FSH呈负相关(r =- 0 .2 7,P <0 0 0 1) ,与年龄呈负相关 (r=- 0 .3 1,P <0 0 0 0 1)。结论　雌激素水平的下降可影响绝经后妇女血清CETP水平     

心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体制备及酶免疫法的建立

目的 研制人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)单克隆抗体，建立双单克隆抗体两点一步夹心酶免疫法(简称“双抗夹心ELISA”)。方法 用亲和层析法直接从人心肌组织中提纯cTnⅠ，经免疫、融合、筛选、克隆等杂交瘤技术，制备出3株特异性抗cTnⅠ单克隆抗体，选用其中互补的2株2F11和9F5，分别制成生物素化抗体和酶标抗体，建立双抗夹心ELISA检测法。结果 用双抗夹心ELISA和美国PBM公司Life sign TroponinⅠ检测试剂对40名健康献血员和34例急性心肌梗塞患者血中cTnⅠ水平进行检测，本法最低检测限为0．8μg／L，两者符合率分别为97．5％和93．9％，符合临床诊断要求。结论 双抗夹心ELISA特异性强，灵敏度、准确度和精密度较高，具有应用及推广价值。     

Reference values for serum levels of cholesteryl ester transfer protein and its distribution characteristics in healthy Chinese children and newborns

Objective

To investigate the distribution characteristics of serum CETP levels in childhood.

Design and methods

CETP was measured in 912 healthy children and 40 cord blood with an ELISA.

Results

CETP was skewed in children with a median of 2.48 (2.5-97.5 percentiles: 0.56-6.96) mg/L. CETP in cords was much lower than in children, and was lower in younger children (< 1 year) than in elder children.

Conclusions

CETP is lowest at birth and sharply rises to maximum levels in infancy.     

血清粗纤维调节素ELISA的建立及初步应用

以提纯的人胎盘粗纤维调节素 (Un)及兔抗人Un IgG ,建立血清Un的竞争抑制ELISA标准曲线 ,并检测了 6 0名正常人和 12 4例肝病患者。结果采用棋盘试验确定包被Un及其抗体的浓度 ,表明该法灵敏度为 5 μg/L ,回收率为 96 6 %～10 8 3% ,批内 CV为 7 5 % ,批间CV 为 7 9%。 6 0名正常成人血清Un含量为 71 14± 2 9 6 0 μg/L ,参考值范围为 11～ 130μg/L,慢性肝病患者Un含量显著高于正常人。提示此法稳定、可靠、特异 ,基本符合临床使用要求 ,可用于慢性肝病的诊断。     

间接ELISA检测抗中性粒细胞胞浆总抗体及其临床意义

目的　建立检测抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA)的间接酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,观察韦格纳氏 /多血管炎、系统性红斑狼疮 (SLE)、肾炎和溃疡性结肠炎患者中ACNA的存在状况。方法　用建立的ELISA法检测 10 0例韦格纳氏 /多血管炎、SLE、肾炎或溃疡性结肠炎患者血清中的ANCA ,同时以特异性MPO ANCA及PR3 ANCA为对照。结果　阳性参考血清批内变异系数 (CV)和批间CV分别为 0 .0 6 1%和 0 .10 2 %。用抗原吸收后吸光度 (A)降低明显。总ANCA在韦格纳氏 /多血管炎患者中的阳性率为 4 3.8% ,高于SLE、肾炎和溃疡性结肠炎患者 (分别为 15 .2 %、2 3.1%和 2 5 % ) ,而 5 2份正常人血清均为阴性。用特异性MPO ANCA及PR3 ANCA与ELISA检测总ANCA结果比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　ANCA可作为韦格纳氏 /多血管炎的血清学标志 ,ELISA检测总ANCA可克服间接免疫荧光法的不足 ,灵敏度高 ,适于大样本的ANCA检测。     

抗载脂蛋白（a）单克隆抗体的制备及其应用

为建立特异有效的脂蛋白（ａ）检测方法，应用杂交瘤技术，制备出４株抗载脂蛋白（ａ）单克隆抗体，分别命名为Ｍ＿１、Ｍ＿２、Ｍ＿３、Ｍ＿４。各株单克隆抗体与纤溶酶原和载脂蛋白Ｂ等无交叉反应。单抗相加试验及竞争抑制试验结果表明：Ｍ＿１、Ｍ＿４识别同一抗原位点，Ｍ＿２、Ｍ＿３识别另一位点。选用Ｍ＿１、Ｍ＿２、Ｍ＿４３株单克隆抗体建立了测定血清脂蛋白（ａ）浓度的双抗体夹心酶联免疫测定法。样品稀释后测定范围为０．０５～１．６０ｍｇ／Ｌ，批内平均变异系数（ＣＶ）４．２％，批间平均ＣＶ８．７％。测定了１０３２例中老年临床血清标本，脂蛋白（ａ）浓度为１７９，１±１７９．３ｍｇ／Ｌ（ｘ±ｓ）。与多克隆抗体的酶联免疫测定法同时测定了３８份临床标本，结果相似。此法可满足临床脂蛋白（３）浓度检测的需要。     

双抗体夹心ELISA法检测嗜酸性粒细胞阳离子蛋白

目的 制备嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)双抗体夹心ELISA法检测试剂盒.方法 葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗ECP单克隆抗体,过碘酸钠法进行抗ECP多克隆抗体HRP标记,制备ELISA试剂盒,进行条件优化和实验效能评价,检测过敏性皮肤病患者ECP水平.结果...     

胆固醇酯转运蛋白基因D442G与阿尔茨海默病和血脂间的关系

目的探讨胆固醇酯转运蛋白基因D442G多态性与阿尔茨海默病(AD)易感性与血清脂蛋白水平间的关系。方法用限制性片段长度多态性检测125例AD和115例对照D442G和载脂蛋白E(ApoE)的基因多态性,并测定血清脂蛋白水平。结果对照组D442G的DG基因型频率(9%)高于AD组(2%);ApoE分层后,上述关系仅存在于ApoEε4携带者;DG基因型的高密度脂蛋白(HDL)水平[(1.95±0.71mmol/L)]高于DD基因型[(1.71±0.45mmol/L)],而AD组总胆固醇[(4.86±0.96)mmol/L]和低密度脂蛋白水平[(2.26±0.71)mmol/L]低于对照组[(5.30±1.16)mmol/L、(2.93±0.97)mmol/L]。结论 D442G基因多态性通过调节HDL水平影响AD易感性。