虫草菌丝提取物干预与治疗二甲基亚硝胺诱导大鼠肝硬化的实验研究

目的 明确虫草菌丝提取物（Cordyceps mycelia extract, CME）对二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）诱导大鼠肝硬化的干预与治疗作用。 方法 采用DMN 10 μg/kg 剂量腹腔内注射,每日1次,每周前3日、持续4周的方法制备大鼠肝硬化模型。CME干预实验于造模即日起开始灌胃给药至造模4周末;治疗实验于造模4周、终止造模因素后开始给药至8周末;均以0.74 g/(kg·d)剂量给予CME,每日 1次。分别于造模后3天、2、4、6、8周处死动物取材进行动态效应观察。观测肝组织学、肝组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原(ColⅠ)的免疫组织化学染色、肝羟脯氨酸（Hyp）含量以及肝功能的检测。 结果 与同期模型组比较,CME预防给药后2、4周的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、血清门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性和血清总胆红素（TBIL）含量均显著降低（P<0.05）,血清白蛋白（Alb）含量显著增加（P<0.05）;干预用药4周后的肝Hyp含量显著下降（P<0.05）,胶原纤维增生程度显著减轻（P<0.05）,肝组织内α-SMA、ColⅠ阳性表达显著减少（P<0.05）。与同期模型组比较,治疗给药2周后的血清ALT、AST活性和血清TBIL含量显著降低（P<0.05）,血清Alb含量有所升高(P＞0.05);治疗给药2、4周的肝Hyp含量均显著降低（P<0.05）,胶原纤维增生程度均显著减轻（P<0.05）,肝组织α-SMA表达均显著减少（P<0.05）; 治疗给药4周时肝组织ColⅠ表达显著减少（P<0.05）。 结论 CME既能显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成,也可有效促进已成型的DMN大鼠肝硬化的逆转,具有良好的临床应用前景。     

虫草多糖逆转DMN诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的：研究虫草多糖抗肝纤维化作用的机制。方法： 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、虫草多糖组。采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型。经过虫草多糖治疗4周后,大鼠肝脏用丽春红胶原染色观察大鼠胶原纤维沉积的变化,观察大鼠血清肝功能的变化,盐酸水解法检测肝组织羟脯氨酸含量,Envision 两步法测定肝组织Ⅳ型胶原含量和金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2）含量；酶图法检测肝组织金属蛋白酶2（MMP-2）活性,同时检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的改变。结果：镜下检查可见模型组大鼠肝脏胶原纤维间隔形成；血清肝功能指标异常,MMP-2含量降低；组织Hyp含量,Ⅳ型胶原含量,I型胶原蛋白表达,TIMP-2,MDA含量,均较正常组均显著增加,SOD活性下降,而虫草多糖组的上述指标较模型组均有不同程度的显著下降,使SOD活性升高,MMP-2含量升高。结论：虫草多糖有显著的抗肝纤维化作用,其机制与促进胶原降解和抗脂质过氧化作用有关。     

虫草菌丝逆转二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的 有效组分及其作用机制

目的:研究虫草菌丝治疗二甲基亚硝胺(DMN)模型大鼠肝纤维化的有效组分及其作用机制。方法:大鼠ipDMN 5 mg.kg-1,每周连续3d,共4周。造模结束后,模型大鼠随机分组,治疗组分别以虫草菌丝(CsB)及其组分(C12)以生药800,5 mg.kg-1 ig,每日1次,共2周;正常组及模型组以等量生理盐水ig。分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性,观察肝组织胶原沉积变化,免疫组织化学和蛋白印迹法(Western)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),转化生长因子-β1(TGF-β1)和图像分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)阳性面积百分比,观察肝组织病理及胶原沉积变化。结果:与模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠血清ALT,AST活性显著降低(P<0.05)。与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝组织Hyp含量显著降低(P<0.05)。模型组大鼠肝组织可见炎性细胞浸润,胶原增生明显,大多数形成较厚的完全间隔,假小叶形成。CsB及C12治疗组的坏死出血、炎性细胞浸润、胶原增生、纤维间隔形成有所改善。与6周模型组相比,CsB及C12治疗组的SOD,GSH-Px活性显著升高,MDA含量,GST活性显著降低(P<0.01)。与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝组织α-SMA,TGF-β1及TNF-α的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:CsB及C12能够显著改善肝功能,有显著抗肝纤维化作用。CsB及C12能够显著减轻过氧化损伤,保护肝细胞,减少胶原生成,阻断和逆转二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化。CsB和C12抑制库普弗细胞(KCs)活化和细胞因子TNF-α,TGF-β1的释放,抑制肝星状细胞(HSCs)活化,合成和分泌细胞外基质。     

杠板归抗二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

目的:研究杠板归对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的作用及其机制.方法:80只SD大鼠随机分为正常组、模型组、杠板归高、中、低剂量组和秋水仙碱组共6组.除正常对照组以外,其余各组大鼠均以0.5％ DMN溶液(1.6mL·kg-1)腹腔注射,每周连续3天,每天1次,第1周用2/3剂量,以后用全量.秋水仙碱组剂量为0.1 mg·kg-1,杠板归高、中、低剂量组分别为7.5,5.0,2.5 g·kg-1,各组给药1次/d,连续4周.4周末摘大鼠眼球取血,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C);苏木精-伊红染色(HE染色)观察肝纤维化(HF)的形成;免疫组化检测转化生长因子β1(TGF-β1).结果:与模型组比较,杠板归高、中剂量组大鼠血清HA,LN,PCⅢ,Ⅳ-C水平均显著低于模型组(P ＜0.05或P＜0.01),免疫组织化学显示杠板归高、中剂量组中大鼠肝脏TGF-β1表达明显降低(P ＜0.05或P＜0.01),低剂量无统计学意义(P＞0.05).结论:杠板归对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化具有较好的作用,作用机制可能与杠板归通过保肝、降低TGF-β1表达,从而抑制肝纤维化的启动.     

桃仁提取物合虫草菌丝对肝炎后肝硬化肝窦毛细血管化的逆转作用观察

桃仁提取物合虫草菌丝对肝炎后肝硬化肝窦毛细血管化的逆转作用观察上海市中医药研究院肝病研究中心（上海２０００３２）徐列明，朱剑亮，刘成，刘平，吕刚，薛惠明，胡义杨，洪嘉禾我们在动物实验取得活血化瘀抗肝纤维化可靠结果的基础上（１），进一步用桃仁提取物合人...     

铁甲草醇提取物抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究

目的 观察铁甲草醇提取物抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的作用效果,并探讨其可能的作用机制.方法 将60只SD雄性大鼠,随机分为6组,每组10只,分别为正常组,模型组,铁甲草醇提取物高、中、低剂量组(12.6,4.2,1.4 g/kg)和秋水仙碱组(0.2 mg/kg),采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型,在制备模型的同时,铁甲草高、中、低剂量组和秋水仙碱治疗组均灌胃给药,正常组和模型组均予等量生理盐水灌胃,每天1次,4周后处死大鼠,检测大鼠肝功能、血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PCⅢ)、肝组织羟脯胺酸(Hyp)含量及肝脏病理组织学改变.结果 铁甲草醇提取物各剂量组血清谷丙转氨酶(ALT)水平及铁甲草高剂量组血清谷草转氨酶(AST)水平与模型组比较,具有显著性差异(P<0.05);铁甲草醇提取物各剂量组大鼠肝组织Hyp含量均明显低于模型组,差异具有显著性(P<0.05);铁甲草醇提取物各剂量组大鼠血清HA、LN、PC Ⅲ含量明显低于模型组,具有显著性差异(P<0.05);铁甲草醇提取物各剂量组肝组织纤维化病变明显减轻,与模型组比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 铁甲草醇提取物对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化形成,具有明显的抑制作用,其作用机制可能与保护肝细胞和抑制胶原纤维合成有关.     

黄芪汤对肝硬化大鼠胶原沉积和肝窦毛细血管化标志物表达的影响

目的 研究黄芪汤对肝硬化大鼠胶原沉积和肝窦毛细血管化标志物表达的影响。方法 选取10只雄性Wistar大鼠作为假手术组;选取40只雄性Wistar大鼠行胆管结扎建立肝硬化模型,造模1周后随机分为模型组和黄芪汤低、中、高剂量组。黄芪汤低、中、高剂量组分别给予黄芪汤0.35,0.70,1.40 g/kg灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃4周。实验结束检测各组大鼠血清肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB)],HE染色观察肝组织病理形态,免疫组织化学染色法检测肝组织中I型胶原(Col-I)和血管内皮标志物分化抗原簇31(CD31)表达情况,Real-time PCR法检测肝组织中Col-I、CD31和血管性血友病因子(vWF) mRNA表达情况。结果 与模型组比较,黄芪汤各组大鼠血清ALT、AST、TBil水平均显著降低(P均<0.05),血清ALB水平均显著升高(P均<0.05),且黄芪汤高剂量组各指标改善情况均显著优于黄芪汤低、中剂量组(P均<0.05)。HE染色显示黄芪汤各组大鼠小胆管...     

柔肝抑纤饮抗DMN肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的实验研究

目的:以复方鳖甲软肝片为对照,观察柔肝抑纤饮抗大鼠肝窦毛细血管化的作用并比较两种药物的疗效差别。方法:建立DMN大鼠肝纤维化模型,将动物随机分组:A组(正常组);B组(模型组);C组(柔肝抑纤饮组);D组(复方鳖甲软肝片组)。分别灌服相应药物。检测血清HA、col-Ⅳ,行胶原染色(Masson)染色、免疫组化染色观察并测定肝组织vWF、LN的表达,电镜观察窦周隙超微结构。结果:C组在降低血清HA、col-Ⅳ水平,减少胶原染色百分比含量以及LN、vWF免疫组化阳性面积等方面,作用明显优于D组(P<0.05);电镜观察发现,C组肝窦内皮失窗孔和内皮下连续性基底膜的形成等病变也相对为轻。结论:柔肝抑纤饮能显著改善LN、vWF等反映肝窦毛细血管化的敏感指标,一定程度上逆转DMN大鼠肝窦毛细血管化,整体疗效优于复方鳖甲软肝片。     

铁甲草抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究

目的 观察铁甲草醇提取物抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的作用效果并探讨其作用机制.方法 采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型,用高、中、低剂量(12.6,4.2,1.4 g/kg)的铁甲草醇提液进行干预治疗,并与秋水仙碱进行对照,检测大鼠肝功能、血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PCⅢ)、 肝组织羟脯胺酸(Hyp)含量及肝脏病理组织学改变. 结果 铁甲草高、中、低剂量组血清谷丙转氨酶(ALT)及铁甲草高剂量组血清谷草转氨酶(AST)水平与模型组比较有统计学意义(P <0.05);铁甲草各剂量组大鼠肝组织Hyp含量均明显低于模型组(P <0.05).铁甲草各剂量组大鼠血清HA 、LN、 PCⅢ含量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).铁甲草高、中、低剂量组肝组织纤维化病变明显减轻,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05). 结论 铁甲草对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化形成具有明显的抑制作用,其机制可能与保护肝细胞和抑制胶原纤维合成有关.     

积雪草总苷抗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用

目的 研究积雪草总苷抗实验性大鼠肝纤维化的作用。方法 采用二甲基亚硝氨(dimethylni-trosamine,DMN)腹腔注射6周,制备大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组(正常组、模型组、秋水仙碱组、积雪草总苷大、中、小剂量组)。于造模开始时同时给予积雪草总苷灌胃,实验结束后分别检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)含量,并作肝组织病理学观察。结果 积雪草总苷能改善肝功能,与模型组相比可明显降低血清ALT、AST、HA的含量(P<0．05)。肝组织病理学检查显示具有抗肝纤维化作用。结论 积雪草总苷对DMN诱导的大鼠慢性肝纤维化具有良好的治疗作用。     

茵陈蒿汤干预二甲基亚硝胺大鼠肝硬化效应的方证病理学基础研究

目的基于清热利湿与滋养肝肾不同功效古典方剂的干预效应,探讨二甲基亚硝胺(dimethylni-trosamine,DMN)诱导大鼠肝硬化的方证病理学基础。方法腹腔注射DMN4周制备大鼠肝硬化模型,造模2周末取6只模型大鼠作给药前观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组、茵陈蒿汤(yinchenhao Decoc-tion,YCHD)组及一贯煎(yiguanjian,YGJ)组;各组于继续造模同时给予不同方剂的煎剂经口灌胃2周,正常大鼠与模型对照组给予同量等渗盐水,4周末处死大鼠,获取血清与肝组织样品,观测肝功能、肝组织病理学、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,检测肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性;免疫印迹检测肝组织α-SMA、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、血小板衍生生长因子(platelete-derived growth factor,PDGF)以及肝脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid bindingprotein,L-FABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)表达的变化。结果与模型对照组比较,YCHD组肝功能显著改善;肝组织Hyp含量与α-SMA蛋白表达显著降低(P0.05),显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成,而YGJ无明显作用。肝组织TNF-α与PDGF表达在YCHD组显著减少,而YGJ组TNF-α进一步增加,PDGF无明显变化;YCHD组肝组织MDA含量与GST活性显著降低(P0.01或P0.05),GSH含量、L-FABP及Tf蛋白表达显著增加(P0.05),而YGJ组仅见GSH显著增加(P0.05)。结论茵陈蒿汤显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成;DMN大鼠肝硬化形成期的肝组织炎性病变及其过氧化损伤是茵陈蒿汤清热利湿效应的方证病理学基础。     

The Protective Effect of Gan Shen Fu Fang on Liver Endothelial Cells in Common Bile Duct‑ligated Rats

Objective: To elucidate the protective effect of Gan Shen Fu Fang (GSFF) on liver endothelial cells in common bile duct?ligated (CBDL) rats. Materials and Methods: Cirrhosis was induced by common bile duct ligation. The rats were divided into three groups: sham group, CBDL group, and GSFF group. After 2 weeks of ligation, rats in the GSFF group were administered GSFF. After 4 weeks, the hydroxyproline (Hyp) content of liver tissues was spectrophotometrically determined. The histological changes were evaluated by H and E and Masson staining. Transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM) were used to observe the ultrastructural changes in the liver, especially in the liver sinusoidal endothelial cells (LSECs). Results: Hyp synthesis was significantly inhibited by GSFF, which agreed with the results from H and E and Masson staining for liver fibrosis. The TEM observations of CBDL rats revealed reduced hepatocyte microvilli and deposited fibrous tissue underneath LSECs. SEM confirmed the TEM findings and showed that the fenestrae of LSECs decreased and even disappeared in CBDL rats. The morphological results indicated hepatic sinusoid capillarization. GSFF promoted the restoration of fenestrae and reversed hepatic sinusoid capillarization. Conclusion: GSFF can inhibit Hyp synthesis, restore the fenestrae of LSECs, and reverse hepatic sinusoid capillarization in CBDL rats. These results provide a basis for future detailed investigations of the mechanism of action of GSFF in LSECs.     

莪术醇对肝窦内皮细胞MAPK信号通路作用的实验研究

目的研究莪术醇对肝窦内皮细胞MAPK信号通路的作用,以此来分析莪术醇抗肝纤维化的作用机制。方法用MTT法检测各种药物干预对细胞增殖率的影响,用免疫印迹和RT-PCR检测MAPK信号通路上关键分子pMAPK、ERK和JNK的表达和含量。结果RT-PCR检测发现莪术醇干预组pMAPK、ERK和JNK表达较阳性对照组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05);WB检测发现莪术醇干预组MAPK信号通路磷酸化p38MAPK、ERK和JNK的表达较阳性对照组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论莪术醇抑制MAPK信号通路的活动,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

虫草多糖抗免疫损伤性大鼠肝纤维化的作用及其机理研究

采用牛血清白蛋白免疫损伤大鼠肝纤维化模型,以虫草菌丝和秋水仙碱为对照,通过肝组织病理学与Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原及ＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ１,Ｄｍ阳性细胞免疫组化观察,肝Ｈｙｐ含量与肝胶原酶活性检测,观察虫草多糖抗肝纤维化的作用与机制。结果显示,虫草多糖与虫草菌丝及秋水仙碱均能减轻肝纤维化程度,降低Ｈｙｐ含量,减少胶原及ＴＧＦβ１生成与分泌,降低ＴＧＦβＲ１表达,减少Ｄｍ阳性细胞,其中虫草多糖对Ⅳ型胶原与Ｔ     

丹参提取物对CCl4和DMN诱导的大鼠肝纤维化的影响

分别采用四氯化碳和二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型,以秋水仙碱和丹参作对照,通过肝组织病理学及Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化观察,肝组织羟脯氨酸、丙二醛及血清肝功能部分指标检测,探讨丹提取物和治疗肝纤维化的效果及部分作用机理。     

大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

目的观察大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝星状细胞间质胶原酶(MMP-1)基因表达及分泌到培养基中的明胶酶A(MMP-2)活性的影响.方法分离培养大鼠肝星状细胞(HSC),制备大黄(庶虫)虫丸大鼠药物血清,温育HSC.逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法观察MMP-1的表达.酶谱法检测MMP-2的活性.结果大黄(庶虫)虫丸药物血清可明显促进HSC对MMP-1的基因表达,同时可明显增加HSC合成的MMP-2的含量和活性(P＜0.05).结论大黄(庶虫)虫丸的抗肝纤维化作用与其促进HSC的MMP-1基因表达,增加MMP-2的含量和活性有关.     

异丙基肾上腺素心力衰竭大鼠模型心肌MMP-2，9的改变

目的建立异丙基肾上腺素（ISO）诱导SD大鼠充血性心力衰竭（CHF）模型,观察心肌MMP-2,9的变化。方法大鼠皮下注射异丙基肾上腺素2次（170mg／kg）,6周以左室射血分数≤45％确定造模成功,18周使用左心导管进行血流动力学检查,取心肌采用RT—PCR,real-time PCR及明胶酶谱法检测MMP-2,9的表达,并观察病理形态学特征。结果与正常对照组相比,ISO组大鼠左心室重量指数明显增加（P〈0．01）。ISO组大鼠左室／体重比率和心肌MMP-2,9的浓度都明显升高（P〈0．01）。结论应用大削量ISO诱导大鼠充血性心力衰竭模型,该作用可能与心肌MMP-2．9激活有关。     

冬虫夏草对肝纤维化小鼠白细胞介素4与γ-干扰素表达的影响

目的探讨冬虫夏草抗肝纤维化作用与其调节辅助性 T 淋巴细胞免疫功能的关系。方法 CCl_4皮下注射复制 BALB/c 小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以虫草煎剂,直至造模结束。HE 染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定血清肝功能变化与肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,Western 印迹法检测肝脏白细胞介素4(IL-4)与γ-干扰素(IFN-γ)蛋白表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,血清 ALT 水平上升而白蛋白含量下降,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏 Hyp 含量、IL-4与 IFN-γ蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组小鼠血清 ALT 水平下降、白蛋白含量上升,肝脏炎症与胶原沉积减轻,IL-4与 IFN-γ蛋白表达量明显降低。结论肝纤维化 BALB/c 小鼠的肝脏 IL-4与 IFN-γ均明显上升,虫草制剂有良好的抗肝损伤与肝纤维化作用,其作用机制与下调异常增高 Th 免疫应答有关。