氯化镉所致DNA损伤及锌的拮抗效应的研究

目的通过体外实验,了解氯化镉(CdCl2)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的直接DNA损伤作用及锌的拮抗作用,初步探讨镉的遗传毒性机制及预防措施。方法采用甲基四唑法(MTT法)了解CdCl2对于V79细胞的毒性,通过碱性单细胞凝胶电泳常用的几个评价指标,研究CdCl2体外对于V79细胞DNA的断裂损伤,并采用生理浓度ZnCl2(10μmol/L)加以拮抗。结果MTT试验中,CdCl2对于V79细胞的毒性随染毒剂量增加而增高,呈线性关系,线性方程为:y=-0.009 4x 94.472;在碱性单细胞凝胶电泳中,CdCl2单独染毒,随着染毒剂量增加,DNA损伤加重,而锌具有明显的拮抗作用。结论本实验条件下,CdCl2能造成V79细胞DNA损伤,生理浓度的锌可以拮抗镉的DNA损伤效应。     

氯化镉遗传毒性及氯化锌拮抗作用的机制研究

目的观察镉、锌体外染毒对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）胞内镉离子含量及自由基含量的影响,初步探讨镉遗传毒性的机制。方法采用等离子体光谱仪及激光共聚焦显微镜法研究不同浓度氯化镉（CdCh,终浓度分别为1,2,4,8μmol／L及1,5,10μmol／L）单独或与生理浓度氯化锌（ZnCl2,10μmol／L）同时染毒对细胞内Cd^2＋、Zn^2＋含量及过氧化氢（H2O2）含量的影响。结果随着CdCl2染毒浓度的增加,细胞内Cd^2＋及H2O2含量均增加,且均呈现出浓度一效应关系。同时给予ZnCl2可使细胞内Cd^2＋及H2O2含量降低,与对应的镉单独染毒组相比,差异有显著性（P〈O．05）。结论在本实验条件下,CdCl2可通过镉直接毒性作用及通过自由基的间接毒性作用而发挥其毒性效应,锌可以从这两方面的机制拮抗镉的毒作用。     

镉和氯化汞致体细胞hprt基因位点突变的作用和突变频率的研究

目的 了解镉和汞对细胞hprt基因位点的影响，探讨化学诱变物致机体损伤早期检测的敏感指标。方法 采用多核细胞法研究化学诱变物氯化汞和镉对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果 氯化汞可诱发大鼠血淋巴细胞hprt基因位点突变，突变频率随着染毒浓度的增加而升高，突变频率Y↑^（10^-3)与氯化汞浓度C（mg/kg)之间拟合成Y↑^=0.0423C 1.0463的直线回归方程，不同浓度金属镉也能致hprt基因突变，镉浓度与突变频率之间有剂量反应关系。结论 氯化汞和镉对血淋巴细胞hprt基因位点及突变频率有影响，hprt基因突变频率可作为接触环境致突变物人群检测的敏感指标。     

氯化镉的体外毒性及锌的拮抗作用

目的观察镉与锌体外对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)增殖的影响,初步探讨镉毒性机制。方法采用MTT法及3H-TdR掺入法,研究不同浓度氯化镉(CdCl2)单独或与生理浓度氯化锌(ZnCl2,10 μmol/L)同时染毒对V79细胞增殖的影响,并采用等离子体光谱仪测定细胞内Cd2 、Zn2 含量。结果 CdCl2对于V79细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性.采用MTT法和3H-TdR掺入法所得CdCl2染毒24 h后50%抑制浓度(IC50)分别为13.73 μmol/L和13.60 μmol/L.随着CdCl2染毒浓度的增加,细胞内Cd2 含量也增加.而同时给予锌则对镉的增殖抑制效应在一定程度上具有明显的拮抗作用,锌可使细胞内Cd2 含量降低。结论在本实验条件下,CdCl2对V79细胞增殖具有抑制作用,锌对镉的毒性有拮抗作用。     

氯化镉对DNA修复的影响及机制的体外研究

目的通过体外实验，了解氯化镉（CACl2）对过氧化氢（H2O2）引起的V79细胞DNA损伤后修复过程的影响及其相关机制。方法采用MTT法了解CdCl2对于V79细胞的毒性；以单细胞凝胶电泳实验分析软件中的几个评价指标，同时观察无细胞毒性浓度的CdCl2对H2O2所引起的V79细胞DNA损伤后修复所产生的影响；以生理浓度的氯化锌（ZnCl2）作为拮抗剂，与CdCl2同时作用后，观察对DNA修复影响的变化。结果MTT实验中，CdCl2对V79细胞的毒性随染毒浓度增加而增强，呈线性关系；在碱性单细胞凝胶电泳实验中，无细胞毒性浓度的CdCl2未明显增强H2O2V79细胞DNA的损伤，却明显地抑制了由H2O2所致的V79细胞DNA损伤后的修复过程，并以0．1μmol／LCdCl2浓度最为明显；生理浓度的锌可有效拮抗CdCl2的DNA修复抑制作用。结论在本实验条件下，无细胞毒性浓度的CdCl2对H2O2的DNA损伤效应无协同作用，却明显抑制DNA损伤后的修复过程；锌在一定程度上可以拮抗CdCl2的DNA修复抑制效应。     

氯化镉和氯化锌对V79细胞凋亡的影响

目的通过体外实验，以两种简便方法了解氯化镉（CdCl2）、氯化锌（ZnCl2）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）细胞凋亡的影响。方法采用MTT法了解CdCl2对于V79细胞的毒性；在此基础上采用碱性单细胞凝胶电泳法和激光共聚焦技术结合AO／EB双染法。研究不同剂量CdCl2对V79细胞凋亡的影响，并采用生理浓度的ZnCl2与CdCl2同时作用后观察细胞凋亡情况。结果MTT实验中．CdCl2对于V79细胞的毒性随染毒剂量增加而增强。呈线性关系；碱性单细胞凝胶电泳法和AO／EB双染法得到相似的结果，即1～32μmol／LCdCl2可以引起V79细胞凋亡。凋亡率、凋亡指数分别为3．0％～49．6％及3．5％～53．8％，且随剂量增加而增大。呈剂量一效应关系；凋亡率、凋亡指数与CdCl2染毒浓度间可拟合成直线方程：y=0．9315x-0．4152。10μmol／LZnCl2可以拮抗CdCl2所致的凋亡效应。结论在本实验条件下。采用单细胞凝胶电泳和激光共聚焦技术均可以灵敏、快捷地检测CdCl2对于V79细胞的凋亡作用和锌对镉所致细胞凋亡的拮抗效应。     

氯化汞诱发人离体血细胞hprt基因位点突 变频率的研究

为了解化学诱变物对血细胞hprt基因位点的影响。采用多核细胞法（CB法）研究了不同浓度氯化汞对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果表明：50μg/ml以下的氯化汞可诱发人淋巴细胞hprt基因位点突变,且突变频率随着体外染毒浓度的增加而升高,突变频率Y(10∧－3）与氯化汞的浓度C之间可以拟合成Y＝0．9948＋0．0106C的直线回归议程。hprt基因突变频率可作为检测生产性毒物或环境毒物接触人群的敏感指标。     

石英对大鼠肺上皮细胞和成纤维细胞的增殖抑制及致hprt基因突变的研究

目的探讨石英对大鼠肺泡II型上皮细胞和成纤维细胞的增殖抑制及致hprt基因突变的差异。方法采用(MTT噻唑蓝)比色法检测大鼠肺成纤维细胞和肺泡II型上皮细胞的增殖抑制毒性。以含6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的培养基筛选突变细胞克隆,检测hprt基因突变频率。结果在相同的染毒条件下,肺泡II型上皮细胞对石英刺激比成纤维细胞更易受损伤,上皮细胞半数增殖抑制浓度(IC50)约为140μg/cm2,成纤维细胞的IC50约为282μg/cm2。在致hprt基因突变方面,石英粉尘对两种细胞都有致突变作用。在同样剂量染毒条件下,肺泡Ⅱ型上皮细胞的hprt突变频率为84.2×10-6～156.6×10-6,较成纤维细胞(67.6×10-6～114.3×10-6)更容易发生hprt基因突变,差异有显著性(P<0.05)。结论石英对大鼠肺成纤维细胞和肺泡II型上皮细胞的细胞毒性及对hprt基因致突变作用强度存在明显差异。肺泡II型上皮细胞对石英刺激的反应敏感性高于成纤维细胞。     

1-溴丙烷致中国仓鼠肺细胞hprt基因位点突变作用研究

目的 探讨1-溴丙烷(1-BP)对中国仓鼠肺细胞(V79)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hprt)基因位点的致突变作用.方法 将V79分为大鼠肝微粒体混合功能氧化酶(S9)代谢活化系和非S9代谢活化系,每系各设3.375、6.750、13.500 g/L3个不同质量浓度的1-BP实验组;另设1.000 g/L甲磺酸乙酯阳性对照组(非S9代谢活化系)、0.001g/L甲基硝基亚硝基胍阳性对照组(S9代谢活化系)和溶剂对照组,溶剂对照组加等体积的无血清培养基.染毒时间为6h.应用细胞克隆检测法检测V79 hprt基因位点的突变率.结果 非S9代谢活化系,1-BP实验组突变率与溶剂对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);S9代谢活化系,3.375、6.750 g/L 1-BP实验组突变率均高于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01),但不存在剂量-反应关系.结论 1-BP经代谢活化后可能对V79 hprt基因位点具有致突变作用.     

硒和维生素E对丙烯酰胺致V79细胞毒性的拮抗作用

目的研究不同浓度的维生素E和（或）硒对丙烯酰胺（AA）染毒V79细胞的拮抗作用。方法利用细胞毒性实验（MTT法）计算细胞相对存活率，用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤，并对实验数据进行统计学分析。结果0．5～10．0μmol／L的硒和（或）2．5-40．0mmol／L维生素E与1．5mmol／L的丙烯酰胺作用于体外培养的V79细胞，实验结果表明，低浓度的硒与维生素E均可降低丙烯酰胺所致的细胞毒性和基因毒性，0．75mmol／L的AA已显示明显的细胞毒性，V79细胞的相对存活率（77．36％）明显低于阴性对照组，AA对V79细胞的毒性作用有明显的剂量-反应关系。高浓度的硒则起相反的作用；硒和维生素E共同作用，其拮抗效果明显优于硒、维生素E单独作用。结论在体外细胞培养条件下，一定浓度的维生素E和硒对AA染毒V79细胞的细胞毒性、遗传毒性有拮抗作用，且具有协同效应。     

DEHP对小鼠淋巴细胞分泌IL-2影响

目的 通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)影响小鼠淋巴瘤细胞(EL4)分泌白细胞介素-2(IL-2)蛋白影响机制研究,探讨DEHP对辅助性T细胞1(Th1)型细胞因子影响.方法 不同浓度DEHP染毒以25 ng/mL佛波酯(PMA)+1μg/mL离子霉素(Ion)激活的EL4细胞,并用钙调神经磷酸酶抑制剂FK506进行干预;实验6 h用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测活化T细胞核因子(NFAT)的mRNA表达;实验48 h用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中IL-2蛋白表达.结果 与激活剂组的(72.59±9.05)pg/mL比较,10,50 μmol/L DEHP染毒组的IL-2蛋白分泌量为(36.00±5.10),(32.00±1.86)pg/mL,明显降低EL4细胞分泌IL-2蛋白(P<0.01);50μmol/L DEHP明显升高了EL4细胞中NFAT2 mRNA相对含量,且降低了NFAT1 mRNA相对含量(P<0.05);0.05,0.5 μmol/L FK506未明显影响IL-2蛋白表达;Spearman相关分析表明,DEHP影响IL-2蛋白与NFAT mRNA表达元相关.结论 DEHP可能是通过NFAT非依赖途径影响EL4细胞分泌IL-2蛋白.     

无机砷对肝细胞转录因子Nrf2及其调控蛋白表达影响

目的探讨不同时间和不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对Chang肝细胞株NF-E2相关因子2(Nrf2)、及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响。方法25μmol/L NaAsO2作用Chang肝细胞2、4、6、12和24 h;或不同浓度的NaAsO2(10、25和50μmol/L)作用Chang肝细胞6 h,免疫印迹法(western blot)检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况。结果 25μmol/L的NaAsO2可以明显诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达(P<0.01);Nrf2蛋白2 h开始明显诱导,4 h表达水平最高,此后随暴露时间的延长虽然表达有所下降,但持续至24 h仍明显高于对照组;NQO1的蛋白表达水平也从4 h开始增加并持续至24 h;HO-1的蛋白表达则从6 h开始明显诱导,且随暴露时间的继续延长表达持续上升,具有明显的时间-效应关系;10、25和50μmol/L NaAsO2染毒6 h,Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达均随染毒剂量的增加而大量诱导,具有明显的剂量-效应关系(P<0.01)。结论 NaAsO2暴露能够诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达增强,且具有一定的剂量-效应关系。     

乙醛脱氢酶基因型对2-乙氧基乙醇代谢影响的研究

探讨乙醛脱氢酶（ALDH2）不同基因型代谢2－乙氧基乙醇（EE）的能力是否存在差异。方法 采用个体采样,毛细柱气相色谱分析技术及PCR检测方法,比较不同基因型个累计接触EE剂量与2－乙氧基乙酸（EAA）浓度对数值回归直线的回归系数。结果 ALDH2不同基因型个体累计接触EE剂量与EAA浓度对数值存在线性关系,A基因型回归系数大于B基因型。结论 ALDH2A基因型代谢EE能力强于B基因型。     

饮酒对尿2 -硫代噻唑烷-4-羧酸排泄的影响

目的观察饮酒对二硫化碳(CS2)接触者及非接触者尿2-硫代噻唑烷4羧酸(TTCA)排泄的影响。方法(1)男性非接触CS2志愿者10人,一次饮用38。白酒150ml或250ml,高效液相色谱法观察其尿TTCA排泄动态;(2)CS2作业男工152人,非接触者60人,分别收集班末尿和晨尿进行TTCA测定并进行问卷调查;同时进行个体空气采样和CS2浓度气相色谱法测定。结果非接触者一次饮白酒150ml后3h尿TTCA水平达峰值,12h后降至饮前水平(餐前0．5h,饮酒后1、3、12h中位数分别为0．045、0．068、0．099、0．046mg/gCr,n=10);TTCA水平随饮白酒剂量的增加而增高,饮0、150、250ml白酒者TTCA水平(中位数)分别为0．036、0．064、0．609mg/gCr(n=5,饮后3h)。CS2浓度为≤10．0、10．1～50．0、>50．0mg/m3时,CS2接触者TTCA有随CS2浓度增高而上升的趋势;对照组中饮白酒和啤酒者TTCA水平似高于不饮者,而接触组TTCA水平则随饮酒指数的增加而呈降低趋势。结论大量饮酒可影响尿TTCA水平,在进行CS2生物监测时,应避免在大量饮酒后12h内采集尿样,以避免饮酒对监测结果的干扰作用。     

细胞色素P450-2E1基因型对2-乙氧基乙醇代谢影响的研究

目的 探讨细胞色素P450－2E1（CYP2E1）不同基因型代谢2－乙氧基乙醇（EE）能力是否存在差异。方法 采用个体采样,毛细柱气相色谱分析技术及聚合酶链反应（PCR）检测方法,比较不同基因型个体累计接触EE剂量与2－乙在线性关系,B、C基因型回归系数大于A基因型。结论 CYP2E1B、C基因型代谢EE能力强于A基因型。     

核因子红细胞2相关因子2在毒死蜱毒性机制中的作用

毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)是一种广泛使用的有机磷农药,其对人类健康和生态系统的潜在风险已引起广泛关注。CPF主要通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)发挥杀虫作用,但越来越多的研究表明,CPF的毒性作用远不止于此,也与氧化应激、炎症反应、 细胞死亡等多种生物学过程密切相关,因而可能导致神经退行性疾病、生殖发育障碍以及其他慢性健康问题。核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)作为一种关键的抗氧化应激调节因子,具有显著的保护作用。本文旨在综述Nrf2在调节CPF诱导的氧化应激、神经毒性、细胞死亡和炎症反应中的作用机制,探讨其作为潜在治疗靶点的前景,以为开发新的CPF中毒治疗策略提供理论基础。     

不同煤尘对大鼠肺泡巨噬细胞分泌PGE_2的影响

对灌洗的肺泡巨噬细胞（ＡＭ） 加入不同品位的煤尘共同培养后, 不同时点测定其上清液中前列腺素Ｅ２ 的水平。结果表明, ４ ｈ 时, 无烟煤组较对照组有显著性差异, 而其他煤尘组, 只有在高浓度时才与对照组显示出差别; ２４ ｈ 时, 各煤尘组与对照组差异显著, 无烟煤与肥煤组之间差异较为显著。作者认为, ＰＧＥ２ 在煤工尘肺发生过程中起着重要的作用。     

IHC和FISH检测乳腺癌HER2基因表达的比较研究

目的探讨荧光原位杂交（FISH）与免疫组织化学（IHC）检测HER2基因状态的结果的一致性及HER2表达与其淋巴结转移的关系及意义。方法采用IHC技术检测68例乳腺浸润性导管癌HER2基因的表达,同时进行FISH检测。结果HER2表达（＋）的28例标本中,其中27例经FISH检测无扩增,1例有扩增;HER2表达（＋＋）的12例标本中,7例经FISH检测无扩增,2例有扩增,另3例为可疑;HER2表达（＋＋＋）的28例标本中,经FISH检测均扩增;FISH检测有扩增的30例标本中,26例发生了淋巴结转移;可疑的3例中有2例有淋巴结转移;无扩增的34例标本中只有6例发生了淋巴结转移。结论当HER2表达为（＋）或（＋＋＋）时。IHC和FISH检测的一致性较高,而当HER2表达为（＋＋）时,必须进行FISH检测;HER2的扩增与淋巴结的转移关系密切,呈正相关（P〈0．05）。