鼾症动物模型的建立及其气管力学重建的实验研究

目的　建立阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)动物模型，研究咽腔力学环境改变对气管力学特性的影响。方法　利用低压舱饲养小型猪获得OSAHS 动物模型，测量其气管无载荷、零应力状态的几何尺寸及不同轴向伸长比下的压力(p)-容积(V)关系。进一步计算得到气管的零压顺应性，并与正常对照组比较。结果　模型猪出现了明显的类OSAHS表现。与正常对照组相比，模型猪气管无载荷、零应力状态几何尺寸增大，不同伸长比下的零压顺应性增大；模型猪气管黏膜组织的超微结构发生了明显改变。结论　提出的建立OSAHS动物模型的方法具有可行性，模型猪气管的形态与结构及力学特性均发生了重建。     

人化SCID鼠的建立及其对脊髓灰质炎病毒的免疫应答

经测定鼠尾采血获取的血清,10只SCID鼠在所设实验室条件下饲养4个月前后均达到鼠IgG含量低于5μg/ml的合格标准,5只SCID鼠腹腔移植入2或4×10~7个人外周血淋巴细胞(hu—PBL),建立人化SCID(hu-PBLSCID)鼠,可在移植后4周和12周测到其血清中人IgG的存在,最高可达109μg/ml。以脊髓灰质炎Ⅰ型病毒(Polio—1 virus,Polio-1)作抗原免疫5只hu-PBL-SCID各5次,每鼠均能产生抗Polio-1的特异性人抗体,滴度最高达1:640,表明所建立的人化SCID鼠具备了一定的免疫应答能力。     

重组Norwalk病毒蛋白－酶免疫分析法对诊断Norwalk病毒和其它人＂候选＂杯状病毒感染的效力

重组Ｎｏｒｗａｌｋ病毒蛋白－酶免疫分析法对诊断Ｎｏｒｗａｌｋ病毒和其它人＂候选＂杯状病毒感染的效力［英］／［ＪａｒｋｅｒＳ．．．ＪＭｅｄＶｉｒｏｌ．－１９９３．４１．－１７９～１８４］用感染以Ｎｏｒｗａｌｋ病毒，夏威夷，雪山株病毒，小园结构病毒（ＳＲ...     

C反应蛋白酶联免疫分析和化学发光免疫分析的建立及其初步应用

采用高纯度的C反应蛋白(CRP)免疫兔,获取高效价的CRP抗体.提取抗血清中IgG,包被酶标板.用生物素标记CRP抗原,辣根过氧化物酶标记亲和素,建立CRP的ELISA和化学发光免疫分析法(CLIA).用ELISA测定正常人80名,心梗患者43例和重症监护室(ICU)病人39例的血清CRP水平,发现心梗患者(27.21±38.67μg/mL)明显高于正常人(0.57±2.99μg/mL)(P《0.05);ICU病人(117.48±97.05μg/mL)明显高于正常人及心梗患者(P《0.001和P《0.01).用CLIA检测正常人68名,结果为0.77±3.29μg/mL.随机收集病人血清样品73份,分别用免疫比浊法、ELISA和CLIA检测,经统计三种方法高度相关.结果提示:ELISA和CLIA是一种简便、灵敏和特异的CRP测定方法,可用于人血清中CRP的测定.     

血清肝纤维化指标酶联免疫分析实验和增强化学发光免疫分析系统检测的评价

目的 评价增强化学发光免疫分析系统(Enhanced Chemiluminescence Immunoassay, ECLIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA),测定血清透明质酸(HA)、层黏蛋白含量(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)方法与患者肝纤维化程度的相关性.方法 以患者肝穿病理结果为金标准,分别用ECLIA和ELISA法检测253例患者的4项血清纤维化指标,并分别与病理结果进行比较.结果 两种方法的检测结果均能反映患者从肝炎到肝硬化的肝纤维化逐渐加重的趋势.但与ELISA法比较,ECLIA方法检测的结果与病理结果的相关性较好.结论 ECLIA系统检测血清肝纤维化四项指标,可以更好的反应肝硬化的发展程度.     

异常黑胆质载体动物肿瘤模型的建立及其神经内分泌免疫指标的改变

目的：检测异常黑胆质载体肿瘤动物模型外周血有关神经内分泌免疫网络指标的变化，探讨异常黑胆质肿瘤与神经-内分泌-免疫网络紊乱的关系。方法：选择健康的ICR小鼠120只，分成正常对照组、异常黑胆质模型组、单纯肿瘤组和异常黑胆质载体肿瘤模型组，每组各30只。各组造模后收集小鼠外周血,用酶联免疫法检测IL-1β，IL-6，TNF-α，ACTH和CORT及DA，NE水平。结果：异常黑胆质载体肿瘤组肿瘤移植成功率为100%，明显高于单纯肿瘤组的63.3%(P<0.01）；且瘤体质量也明显高于单纯肿瘤组（P<0.01；而体质量明显低于单纯肿瘤组。异常黑胆质肿瘤组和单纯肿瘤组造模后的体质量均明显低于造模前(P<0.05）。与正常对照组相比，异常黑胆质模型组和异常黑胆质载体肿瘤模型组的IL-6明显升高(P<0.01）；且明显高于单纯肿瘤组(P<0.01），但异常黑胆质模型组和异常黑胆质载体肿瘤模型组之间无明显差异(P>0.05)。TNF-α在异常黑胆质载体肿瘤模型组高于单纯肿瘤组(P<0.05）。单纯肿瘤组、异常黑胆质模型组和异常黑胆质载体肿瘤模型组的ACTH均高于正常对照(P<0.01）；而CORT在异常黑胆质模型组、异常黑胆质载体肿瘤模型组降低，且也明显低于单纯肿瘤组(P<0.05）。IL-1β在各组间无明显差异。与正常对照组相比，DA和NE水平在3种动物模型组中均明显升高(P<0.01），且异常黑胆质肿瘤组明显高于单纯肿瘤组和异常黑胆质组(P<0.01）。结论：异常黑胆质体液促进小鼠肿瘤的发生和发展，可能与神经内分泌免疫网络的紊乱有关。     

血流动力学指标和IL-6 在脓毒症肾损伤患儿中的表达及其与免疫指标的相关性

目的:探究血流动力学指标与IL-6在脓毒症肾损伤患儿中表达水平及与免疫功能指标关系。方法:选取我院2016年3月～2018年4月收治脓毒症患儿75例。根据是否伴有肾损伤分为脓毒症组(n=34)与伴肾损伤组(n=41)。另选择同期来院体检健康儿童作为对照组(n=35)。采用血流动力学检测仪观察3组受试儿童血流量、血流阻力、收缩压、舒张压、中心静脉压、心率及平均动脉压。采用免疫比浊法观察3组受试儿童IL-6水平,采用免疫比浊法检测血清IgA、 IgM、IgG表达。通过流式细胞仪观察3组受试儿童CD4~+、CD8~+T细胞表达。通过Pearson相关系数分析观察血流动力学指标血流量、血流阻力、收缩压、舒张压、中心静脉压、心率、平均动脉压及IL-6与免疫功能指标IgA、 IgM、IgG、CD4~+、CD8~+T细胞表达的相关性。结果:脓毒症组与伴肾损伤组IL-6表达水平均显著高于对照组(P0.05);伴肾损伤组IL-6表达水平高于脓毒症组(P0.05)。对照组健康儿童血流量、收缩压、舒张压、中心静脉压、心率及平均动脉压高于脓毒症组与伴肾损伤组,血流阻力显著低于脓毒症组与伴肾损伤组(P0.05);伴肾损伤组患儿血流阻力高于脓毒症组,血流量低于脓毒症组(P0.05)。对照组血清IgA、 IgM、IgG、CD4~+及CD8~+T细胞水平均高于脓毒症与伴肾损伤组(P0.05);伴肾损伤组血清IgA、 IgM、IgG、CD4~+T细胞水平低于脓毒症组(P0.05);伴肾损伤组CD8~+T细胞水平与脓毒症组比较差异无显著统计学意义(P0.05)。伴肾损伤组血清IgA、 IgM、IgG表达水平与IL-6、血流阻力成负相关(P0.05),与血流量、收缩压及舒张压成正相关(P0.05)。结论:血流量、血流阻力等血流动力学指标及IL-6可作为评价脓毒症伴肾损伤患儿病情严重程度的敏感指标,与机体免疫功能密切相关。     

三种淋巴因子在重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒毒力和免疫效果影响的初步研究

研究了巨噬细胞游走抑制因子（ＭＩＦ）、白细胞介素６（ＩＬ－６）及白细胞介素２（ＩＬ－２）等三种淋巴因子分别在含有甲型肝炎病毒基因的重组痘苗病毒中表达后，对病毒毒力及免疫效果的影响。使用Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠和家兔进行免疫的初步结果显示，表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒免疫后特异性抗体反应明显增强，痘苗病毒抗体及甲型肝炎病毒抗体阳转小鼠数量分别由对照的３／１０和１／１０提高到８／１０和７／１０，痘苗病毒和甲型肝炎病毒抗体滴度也明显升高。家兔初次免疫痘苗病毒后，抗体平均滴度比对照病毒组提高约６倍，并能促使甲型肝炎病毒抗体阳转。而ＩＬ－２和ＭＩＦ重组痘苗病毒免疫后，特异性抗体反应升高不明显。重组痘苗病毒毒力变化结果显示，兔皮内接种ＩＬ－２和ＭＩＦ均显示了一定的减毒能力，二者的重组痘苗病毒毒力均比单纯ＴＫ病毒下降接近１个对数，而表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒的毒力与单纯ＴＫ病毒对照无差别。     

CVA10候选疫苗病毒株的分离、鉴定及其致病性和免疫保护性研究

目的分离、筛选柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CVA10)病毒候选疫苗株,并对其免疫原性及免疫保护性进行评价,为CVA10疫苗的研制奠定基础。方法本研究从北京市儿童医院、军事医学研究院、北京市疾控中心共收集80个手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)标本,通过细胞培养法、RT-PCR的方法分离、鉴定CVA10病毒株。对病毒进行嗜斑纯化,各纯化病毒株与Al(OH)_3(0.5 g/ml)佐剂混合后制备原疫苗,免疫Balb/c小鼠,收集血清。应用交叉中和实验及抗体阳转率实验筛选候选CVA10疫苗株。筛选后T9疫苗株免疫ICR乳鼠,观察ICR乳鼠的致病情况。结果共分离出14株CVA10病毒株。交叉中和实验筛选得到4株候选疫苗株。最后阳转率实验确定T9为候选疫苗株。Al(OH)_3+CVA10灭活抗原在Balb/c小鼠体内能诱生高滴度的特异性抗体,该抗体对Balb/c小鼠有保护作用。T9病毒免疫ICR乳鼠后,对乳鼠完全致死。结论筛选1株CVA10病毒候选疫苗株,CVA10候选疫苗对ICR乳鼠动物模型有致病性。     

重组嵌合腺病毒35型和重组痘苗病毒SIV疫苗在小鼠体内联合免疫的实验研究

目的:研究嵌合腺病毒35型载体和痘苗病毒载体SIVenvT疫苗通过不同策略联合免疫小鼠所诱导的细胞和体液免疫应答。方法:通过PCR和Western blot方法对表达SIV mac239株SIVenvT基因的重组嵌合腺病毒35型(rAd5F35-SIVenvT)和重组痘苗病毒安卡拉株(rMVA-SIVenvT)进行体外...     

表达PRRS病毒GP5、GP3和猪IL-18的核酸疫苗的构建及实验免疫研究

目的获得安全有效的防治PRRSV核酸疫苗。方法采用RT-PCR方法扩增了PRRSV长春分离株ORF5、ORF3基因，并将其插入真核表达载体pVAX1、pVIR—IL-18的CMV启动子下游，构建成真核表达质粒pVAXl一ORF5一ORF3和pVIR—ILl8一ORF5一ORF3，通过Westernblot及IFA等检测目的基因表达产物。同时进行了Balb／c小鼠免疫试验，检测免疫后小鼠的ELISA抗体水平和脾T淋巴细胞亚群数量。结果所构建的2个重组DNA疫苗质粒在真核细胞能进行有效的转录，并表达了目的蛋白（GP5、GP3）。pVIR-IL18-ORF5-ORF3免疫组的小鼠的ELISA抗体水平高于pVAX1-ORF5-ORF3和PRRS灭活苗免疫组，但差异不显著。CD8^＋T淋巴细胞亚群数量显著高于pVAX1-ORF5-ORF3和PRRS灭活苗组。结论IL-18对猪的细胞免疫功能具有明显的促进作用。     

人巨细胞病毒gB和pp150融合基因真核表达载体的构建及其免疫活性研究

目的 构建人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）糖蛋白（gB）和胞膜蛋白（pp150）的单基因及融合基因的真核表达载体并比较其免疫学活性,为研制HCMV核酸疫苗奠定实验基础.方法 PCR扩增HCMV gB及pp150并将其连接成融合基因,分别克隆至peDNA3.1（＋）真核表达载体;制备纳米粒DNA疫苗并免疫BALB/e小鼠,检测其体液免疫与细胞免疫应答.结果 成功制备了peDNA3.1（＋）-gB、peDNA3.1（＋）-pp150和peDNA3.1（＋）-gB-pp150纳米核酸疫苗;gB和gB-pp150核酸疫苗均能刺激小鼠产生较强的特异性抗体（P〈0.01）;pp150和gB-pp150核酸疫苗免疫组的小鼠脾细胞能产生较多的IFN-γ和较高的刺激指数.结论 HCMV gB单基因核酸疫苗能诱导较强的体液免疫应答,pp150单基因核酸疫苗则能诱导较强的细胞免疫应答;而gB-pp150的融合基因疫苗能诱导较强的体液免疫和细胞免疫应答.     

人巨细胞病毒gB和pp150融合基因真核表达载体的构建及其免疫活性研究

Objective To provide experimental evidence for development of human cytomegalovirus (HCMV) nucleic acid vaccine,HCMV surface protein(gB),membrane protein(pplSO),and gB-pp150 fused gene eukaryotie expression vector were constructed.Methods gB and pp150 genes were amplified and fused into gB-pp150,then were cloned into pcDNA 3.1(+) to obtain recombinant expression plasmids pcDNA 3.1(+)-gB,pcDNA 3.1(+)-pp150 and pcDNA 3.1(+)-gB-pp150,which were encapsulated with chitosan.Mouse were vaccinated and the humoral and eell immune response were determined by ELISA,specific proliferative response of plenie lymphocytes.Results The gB,pp150 and gB-pp150 fusion gene eukaryotie expression vector were successfully constructed.The antibodies A value induced by peDNA3.1(+)-gB or peDNA3.1(+)-gB-pp150 were much higher than that of peDNA3.1(+)(P<0.01).The IFN-γ levels induced by pcDNA3.1(+)-pp150 and peDNA3.1(+)-gB-pp150 were significantly higher than that of pcDNA3.1(+).There are significant diferenee between the stimulating indexes of pcDNA3.1(+)-pp150 or peDNA3.1(+)-gB-pp150 immunized and normal mice.Conclusion The DNA vaccine pcDNA3.1(+)-gB can induce significant humeral immunity response.and pcDNA3.1 (+)-pp150 can induce high cellular immune response,whereas pcDNA3.1(+)-gB-pp150 can induce both humeral and cellar immune responses in BALB/c mice.     

人巨细胞病毒gB和pp150融合基因真核表达载体的构建及其免疫活性研究

Objective To provide experimental evidence for development of human cytomegalovirus (HCMV) nucleic acid vaccine,HCMV surface protein(gB),membrane protein(pplSO),and gB-pp150 fused gene eukaryotie expression vector were constructed.Methods gB and pp150 genes were amplified and fused into gB-pp150,then were cloned into pcDNA 3.1(+) to obtain recombinant expression plasmids pcDNA 3.1(+)-gB,pcDNA 3.1(+)-pp150 and pcDNA 3.1(+)-gB-pp150,which were encapsulated with chitosan.Mouse were vaccinated and the humoral and eell immune response were determined by ELISA,specific proliferative response of plenie lymphocytes.Results The gB,pp150 and gB-pp150 fusion gene eukaryotie expression vector were successfully constructed.The antibodies A value induced by peDNA3.1(+)-gB or peDNA3.1(+)-gB-pp150 were much higher than that of peDNA3.1(+)(P<0.01).The IFN-γ levels induced by pcDNA3.1(+)-pp150 and peDNA3.1(+)-gB-pp150 were significantly higher than that of pcDNA3.1(+).There are significant diferenee between the stimulating indexes of pcDNA3.1(+)-pp150 or peDNA3.1(+)-gB-pp150 immunized and normal mice.Conclusion The DNA vaccine pcDNA3.1(+)-gB can induce significant humeral immunity response.and pcDNA3.1 (+)-pp150 can induce high cellular immune response,whereas pcDNA3.1(+)-gB-pp150 can induce both humeral and cellar immune responses in BALB/c mice.     

HIV-1中国流行株gag与hIL-2在重组痘苗病毒中的共表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行株 gag基因、gag和hIL-2基因片段插入到 pJ38载体启动子下游，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒，SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫Balb/c小鼠，进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 、CD8 T细胞数目以及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果：获得了重组痘苗病毒 vJ38gag和 vJ38gag-IL-2。与 vJ38-gag相比，vJ38gag-IL-2，具有更好的免疫原性，重组痘苗病毒免疫3次的效果好于重组病毒免疫2次，以2rVV-DNA混合免疫效果最好。结论：重组痘苗病毒vJ38gag和vJ38gag-IL-2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞因子IL-2发挥了免疫佐剂的作用。     

人乳头状瘤病毒(HPV)16L1病毒样颗粒蛋白与HPV16L1基因联合免疫的体液免疫反应及其抗体的体外中和实验

目的用含有编码人乳头状瘤病毒(HPV)16L1和HPV16L1病毒样颗粒(VLP)蛋白联合免疫小鼠,与用HPV16L1重组表达质粒比较,观察VLP蛋白免疫对免疫小鼠产生抗体的增强作用,以及抗体的体外中和作用,寻找研制HPV16感染的预防性疫苗的有效途径。方法将c57BL／6小鼠,随机分为4组：Ⅰ组：pcDNA-L1(100μl/鼠),Ⅱ组：pcDNA—L1(70μl/鼠) HPV16K1 VLP,Ⅲ组：pcDNA3.1(100μl/鼠)空质粒,Ⅳ组：PBS缓冲液。质粒免疫3次,间隔3周。ELISA法检测其血清抗体,红细胞凝集实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验体外检测抗体的中和活性。结果pcDNA-L1 HPV16L1 VLP较pcDNA—L1免疫组,3次免疫后的抗体水平均增高,尤其以第2次和第3次免疫后的抗体水平增加更显著。pcDNA—L1 HPV16L1 VLP联合免疫组血清的抑制活性高于pcDNA—L1免疫组,且．He[a细胞结合抑制实验染色呈阴性。结论HPV16L1 VLP联合免疫可以增加目的抗原的中和抗体产生,可能是HPV16有效预防性疫苗研制的更有希望的策略。     

共表达HPV16型E6和E7突变基因重组痘苗病毒的构建及其抗肿瘤免疫效果的观察

目的：构建用于子宫颈癌治疗的HPV16型E6和E7重组痘苗病毒实验性疫苗株，并对其抗肿瘤免疫效果进行初步评价。方法：以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术构建共表达HPV16 E6和E7基因的重组痘苗病毒。该病毒免疫C57BL／6小鼠后，检测其免疫原性和抗移植瘤生长情况。结果：PCR结果显示，重组病毒VmE6E7的TK基因内插入了分别由痘苗病毒早晚期启动子H6和7．5K表达的ME6和ME7－1基因。动物实验结果表明，rVmE6E7在C57BL／6小鼠体内可诱发E6和E7特异性抗体产生，被免疫小鼠能够抵抗HPV16 E6E7转化的同系肿瘤细胞的攻击。结论：获得1株用于宫颈癌治疗的HPV16型实验疫苗株，为进一步研制人用HPV16型疫苗株奠定了基础。