热休克蛋白70与心肌缺血再灌注损伤大鼠心房颤动及心肌纤维化的关联

目的探讨热休克蛋白(HSP)70与心肌缺血再灌注损伤大鼠心房颤动(房颤)及心肌纤维化的关联。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、缺血30 min组、再灌注60 min和再灌注120 min组,每组12只。采用大鼠左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型。各组均采用24 h动态心电图监测房颤持续时间,直至实验结束。测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性。分别用免疫印迹和酶联免疫吸附试验检测心肌和血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。采用免疫印迹法检测心肌组织中HSP70蛋白表达。结果与正常对照组相比,缺血30 min组房颤持续时间显著增加(P0.05);与缺血30 min组相比,再灌注各组房颤持续时间显著增加,至再灌注120 min达到高峰(P0.05)。与正常对照组相比,心肌组织中SOD活性于缺血30 min开始降低至再灌注120 min达到最低值。与正常对照组相比,心肌组织中MDA活性于缺血30 min开始升高至再灌注120 min达到最大值。与正常对照组相比,缺血30 min组心肌和血清中TNF-α表达量显著增加(P0.05);与缺血30 min组相比,再灌注各组心肌和血清中TNF-α表达量显著增加,至再灌注120 min达到高峰(P0.05)。与正常对照组相比,缺血30 min组心肌组织中HSP70蛋白表达显著增加,再灌注各组与缺血30 min组相比HSP70蛋白表达也明显增加(P0.05)。结论心肌缺血再灌注损伤会导致大鼠房颤,并通过加重炎症反应导致房颤和心肌纤维化。同时,心肌细胞内HSP70的表达水平变化与心肌缺血再灌注大鼠的房颤及心肌纤维化相关,是心肌缺血再灌注损伤发展和恶化的重要标志。     

诱导型一氧化氮合酶和解偶联蛋白-2对心肌缺血预适应的作用

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和解偶联蛋白-2（uncoupling protein-2,UCP2）对大鼠心肌缺血预适应的保护机制。方法 结扎左冠状动脉复制大鼠心肌缺血再灌注模型。预适应组行3次缺血5min,再灌注10min的预处理,分别于预处理0,6,12,24和48h（分别为0,6,12,24和48h亚组）后行30min缺血及120min再灌注：对照组开胸后不结扎左冠状动脉,电镜观察心肌超微结构,据Rainio评分标准进行心肌超微结构损伤程度的半定量分析。采用Western Blot及比色法检测心肌UCP2活性及iNOS活性。结果 预适应各亚组UCP2活性均增高（P〈0．05）,0h亚组UCP2表达水平最高（P〈0．01）,24小时亚组和48小时亚组心肌iNOS活性显著升高（P〈0．05）。结论 UCP2和iNOS共同参与了大鼠心肌缺血预适应心肌保护作用。     

黄芪预处理大鼠心肌保护效应的实验研究

目的 本文研究黄芪预处理对大鼠心肌的保护效应以及心肌保护效应与热休克蛋白之间的关系。方法 用在体大鼠复制缺血再灌注损伤模型,将大鼠随机分成对照组、缺血再灌组、黄芪组三组、观察心肌组织学、SOD酶的活性、MDA含量变化、心肌梗死范围和HSP70蛋白的表达的变化。结果 黄芪预处理组明显减少梗死面积和减少MDA的产生,保护细胞中SOD酶活性和超微结构,HSP70表达水平明显高于对照组及缺血再灌注组。结论 黄芪处理可减少缺血再灌注心肌损伤,并能诱导心肌细胞HSP70的表达。     

黄芪预处理大鼠心肌保护效应的实验研究

目的本文研究黄芪预处理对大鼠心肌的保护效应以及心肌保护效应与热休克蛋白之间的关系.方法用在体大鼠复制缺血再灌注损伤模型,将大鼠随机分成对照组、缺血再灌组、黄芪组三组,观察心肌组织学、SOD酶的活性、MDA含量变化、心肌梗死范围和HSP70蛋白的表达的变化.结果黄芪预处理组明显减少梗死面积和减少MDA的产生,保护细胞中SOD酶活性和超微结构,HSP70表达水平明显高于对照组及缺血再灌注组.结论黄芪处理可减少缺血再灌注心肌损伤,并能诱导心肌细胞HSP70的表达.     

谷氨酰胺对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响

目的研究谷氨酰胺对心肌缺血再灌注损伤时心功能和心肌酶的影响。方法30只sD大鼠取心脏建立Langendorff灌注模型,随机分为三组：（1）对照组（A组,正常灌注90min）;（2）缺血再灌注组（B组,全心缺血30min,复灌60min）;（3）谷氨酰胺组（c组,取心脏前3小时静脉注射谷氨酰胺0．75g/kg,全心缺血30min,复灌60min）。记录三组心脏的血流动力学水平,测定冠脉流出液肌钙蛋白I水平,测定复灌后心肌的热休克蛋白70水平。结果实与缺血再灌注组相比,谷氨酰胺组的左室发展压（LVDP）、左室内压上升/下降速率（±dp/dt）和心率明显增加,左室舒张末期压力（LVEDP）和肌钙蛋白I水平显著降低（P均〈0．05）,谷氨酰胺组热休克蛋白70表达水平显著增加（P〈0．05）。结论谷氨酰胺能改善缺血再灌注损伤大鼠心脏的血流动力学,减轻心肌损伤,这些作用可能与其诱导热休克蛋白70表达相关。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响。方法42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只。通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积。结果3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P<0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P<0.05)。缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡。     

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制，采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理，以诱导热休克蛋白的表达，观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现，热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白表达明显增加，同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放，抑制Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示，热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡，为临床防治心血管疾病提供了新的信息。     

金纳多对心肌保护作用机制的实验研究

目的:观察金纳多注射液对兔心肌缺血再灌注后热休克蛋白70的诱导作用及其心肌保护作用的机制。方法:取成功建立心肌缺血30 min再灌注模型的新西兰大白兔30只,根据灌注液的不同随机分为两组:①盐水组(n=15),根据再灌注时间的不同平均(n=5)分为再灌注1 h、3 h和5 h 3种情况;②金纳多组(n=15),根据再灌注时间的不同平均(n=5)分为再灌注1 h、3 h和5 h 3种情况。另取5只为正常对照组(无心肌缺血)。采用western blot蛋白印迹技术检测各组心肌热休克蛋白70的含量,并进行半定量分析;检测各组血清总超氧化物歧化酶、丙二醛及肌酸激酶变化。结果:①心肌组织热休克蛋白70含量:缺血区和非缺血区在正常对照组、盐水组、金纳多组心肌热休克蛋白70均分别显示极少表达、轻度或明显表达及过度表达。缺血区和非缺血区各组间比较均有极显著性差异(P<0．01),各组的缺血区与非缺血区比较(除了盐水组再灌注5 h外)均有显著性差异(P<0．05～0．01)。②血清总超氧化物歧化酶含量:与正常对照组比较,再灌注不同时间的盐水组和金纳多组血清总超氧化物歧化酶含量均降低,且有显著性差异(P<0．05- 0．01);与同一再灌注时间盐水组比较,金纳多组均增高,有极显著性差异(P<0．01)。③血清丙二醛含量:与正常对照组比较,再灌注1 h和3 h时,盐水组和金纳多组血清丙二醛均增高,且有显著性差异(P<0．01或P<0．05),再灌注5 h基本恢复至正常对照组水平。且金纳多组较盐水组明显降低有显著差异(P<0．05或P<0．01)。④血清肌酸激酶含量;与正常对照组比较,盐水组再灌注1 h、3 h、5 h和金纳多组再灌注3 h、5 h血清肌酸激酶含量增高,有极显著性差异(P<0．01);且再灌注不同时间的金纳多组较同一再灌注时间盐水组降低,有显著性差异(P<0．05或P<0．01)。结论:心肌缺血再灌注3小时后热休克蛋白70开始明显表达,金纳多注射液可以诱导热休克蛋白70及早且大量表达,对心肌具有保护作用;金纳多的抗氧化作用可能与热休克蛋白70的表达有关。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞及热休克蛋白的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞(AS)及热休克蛋白(HSP70)的影响.方法采用沙土鼠双侧颈动脉夹闭脑缺血模型,于脑缺血15min再灌注24 h和48 h后,运用免疫组化技术观察星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及热休克蛋白70的蛋白基因表达.结果缺血再灌注24 h后,GFAP免疫阳性反应达高峰,补阳还五汤可使GFAP免疫反应减轻;缺血再灌注48 h后GFAP表达减弱,补阳还五汤可使其增强;缺血再灌注后48 h,HSP70 mRNA及蛋白表达明显增强,补阳还五汤可明显抑制其转录外,还可轻度降低HSP70的翻译.结论补阳还五汤对脑缺血损伤后神经功能的保护作用可能与调节星形胶质细胞及抑制缺血脑损伤HSP70基因的过度表达作用有关.     

谷氨酰胺预处理上调热休克因子1活性影响热休克蛋白表达

目的研究热休克因子1在谷氨酰胺诱导热休克蛋白表达中的作用。方法 30只SD大鼠随机分为三组:(1)对照组(C组,正常灌注90 min);(2)缺血再灌注组(I/R组,全心缺血30 min,复灌60 min);(3)谷氨酰胺组(G组,静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg,3小时后同I/R组行缺血再灌注处理)。记录各组冠脉流出液肌钙蛋白Ⅰ水平,测定复灌后心肌热休克蛋白70水平、热休克因子1蛋白表达水平及转录活性。结果与I/R组相比,G组肌钙蛋白Ⅰ水平降低(P0.05),热休克蛋白70水平增高(P0.05),热休克因子1蛋白表达未见显著影响(P0.05),热休克因子1转录活性增高(P0.05)。结论谷氨酰胺可减少缺血再灌注损伤大鼠的心肌酶释放水平,诱导热休克蛋白70表达,这一作用可能与其上调热休克因子1转录活性相关。